对分子诊断设备的要求及应用中的问题发送版.pptx
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ISO15189ISO15189认可认可对对分子诊断分子诊断设备设备的要求及的要求及应用中的应用中的问题问题沈佐君主要内容一、开展分子诊断检测的国家及行业相关规定二、开展分子诊断检测涉及的主要设备三、ISO15189在分子诊断领域的应用说明简介四、ISO15189对分子诊断设备的性能要求五、ISO15189对分子诊断检测的系统完整性要求六、分子诊断设备制造商在帮组用户通过ISO15189认可过程中应注意的问题第一部分开展分子诊断检测的国家及行业相关规定分子诊断的基本概念分子诊断的基本概念基因体外扩增检验，通常称为基因体外扩增检验，通常称为PCR检验检验2002-2009年年:
该检验项目是目前我国临床检验项目该检验项目是目前我国临床检验项目中唯一一项需要通过卫生部或省级临床检验中心中唯一一项需要通过卫生部或省级临床检验中心现场技术验收合格方可开展临床检验的技术准入现场技术验收合格方可开展临床检验的技术准入项目。
项目。
2009年年5月月1日后：
日后：
卫生部关于印发卫生部关于印发医疗技术临医疗技术临床应用管理办法床应用管理办法的通知的通知（卫医政发卫医政发200918号号）和）和医疗机构临床基因扩增检验实验室管理医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法（卫办医政发办法（卫办医政发2010194号）号）。
医疗技术分为三类：
医疗技术分为三类：
第一类第一类：
医疗技术是指安全性、有效性确切，医疗机构通医疗技术是指安全性、有效性确切，医疗机构通过常规管理在临床应用中能确保其安全性、有效性的技术。
过常规管理在临床应用中能确保其安全性、有效性的技术。
第二类第二类：
医疗技术是指安全性、有效性确切，涉及一定伦医疗技术是指安全性、有效性确切，涉及一定伦理问题或者风险较高，卫生行政部门应当加以控制管理的理问题或者风险较高，卫生行政部门应当加以控制管理的医疗技术。
医疗技术。
（如（如PCR）第三类第三类：
医疗技术是指具有下列情形之一，需要卫生行政医疗技术是指具有下列情形之一，需要卫生行政部门加以严格控制管理的医疗技术：
（部门加以严格控制管理的医疗技术：
（1）涉及重大伦理问）涉及重大伦理问题；（题；
（2）高风险；（）高风险；（3）安全性、有效性尚需经规范的临）安全性、有效性尚需经规范的临床试验研究进一步验证；（床试验研究进一步验证；（4）需要使用稀缺资源；（）需要使用稀缺资源；（5）卫生部规定的其他需要特殊管理的医疗技术。
卫生部规定的其他需要特殊管理的医疗技术。
（共（共19项，项，第第8项项基因芯片诊断技术基因芯片诊断技术，现划为第二类，现划为第二类）卫生部负责第三类医疗技术的临床应用管理工作。
卫生部负责第三类医疗技术的临床应用管理工作。
第三类医疗技术目录由卫生部制定公布，并根据临床第三类医疗技术目录由卫生部制定公布，并根据临床应用实际情况，予以调整。
应用实际情况，予以调整。
省级卫生行政部门负责第二类医疗技术临床应用管理省级卫生行政部门负责第二类医疗技术临床应用管理工作。
工作。
第二类医疗技术目录由省级卫生行政部门根据本辖区第二类医疗技术目录由省级卫生行政部门根据本辖区情况制定并公布，报卫生部备案。
情况制定并公布，报卫生部备案。
医疗技术临床应用医疗技术临床应用能力审核能力审核属于第三类的医疗技术首次应用于临床前，必须经过卫生部组属于第三类的医疗技术首次应用于临床前，必须经过卫生部组织的安全性、有效性临床试验研究、论证及伦理审查。
织的安全性、有效性临床试验研究、论证及伦理审查。
第二类医疗技术和第三类医疗技术临床应用前实行第三方技术第二类医疗技术和第三类医疗技术临床应用前实行第三方技术审核制度。
审核制度。
对医务人员开展第一类医疗技术临床应用的能力技术审核，由对医务人员开展第一类医疗技术临床应用的能力技术审核，由医疗机构自行组织实施，也可以由省级卫生行政部门规定。
医疗机构自行组织实施，也可以由省级卫生行政部门规定。
卫生部指定或者组建的机构、组织（以下简称技术审核机构）卫生部指定或者组建的机构、组织（以下简称技术审核机构）负责第三类医疗技术临床应用能力技术审核工作负责第三类医疗技术临床应用能力技术审核工作（1.中国医学科学中国医学科学院院、2.中华医学会中华医学会、3.中国医院协会中国医院协会、4.中华医师协会中华医师协会、5.中华口腔医学会中华口腔医学会）。
省级卫生行政部门指定或者组建的技术审核机构负责第二类医省级卫生行政部门指定或者组建的技术审核机构负责第二类医疗技术临床应用能力技术审核工作。
疗技术临床应用能力技术审核工作。
卫生部可以委托省级卫生行政部门组织对指定的第三类医疗技卫生部可以委托省级卫生行政部门组织对指定的第三类医疗技术进行临床应用能力技术审核工作。
术进行临床应用能力技术审核工作。
对开展分子诊断检测实验室的要求：
对开展分子诊断检测实验室的要求：
实验室流程布局实验室流程布局人员上岗证书人员上岗证书实验室的管理（参照实验室的管理（参照ISO17025，10章章38款）款）规范的应该是：
实验室验收合格证书规范的应该是：
实验室验收合格证书（技术（技术审核报告）审核报告）+卫生行政部门的登记（诊疗科卫生行政部门的登记（诊疗科目）目）第二部分开展分子诊断检测涉及的主要设备主要设备主要设备（5.5检验检验过程）过程）1、核酸提取仪2、PCR
（1）普通PCR仪
（2）实时荧光PCR仪（3）液体芯片3、杂交仪4、基因芯片5、一体化/工作站6、测序仪辅助辅助设备（设备（5.2设施和设施和环境条件环境条件）1、加样器2、金属浴3、离心机4、冰箱5、生物安全柜6、UPS7、纯水器（能除RNA酶）第三部分ISO15189在分子诊断领域的应用说明简介：
5.2、5.3、5.5及附录医学实验室质量和能力认可准则医学实验室质量和能力认可准则在在分子诊断分子诊断领域的应用说明领域的应用说明CNAS-CL3620142014年年44月月2121日第一次修订，日第一次修订，20142014年年1111月月11日实施日实施1范围本本文文件件规规定定了了CNAS对对分分子子诊诊断断领领域域的的认认可可要要求求，包包括括：
病病原原体体核核酸酸和和人人体体基基因因等等领领域域涉涉及及的的核核酸酸扩扩增增试试验验、杂杂交交试试验验（包包括解剖病理中的原位杂交试验）、核酸电泳分析等括解剖病理中的原位杂交试验）、核酸电泳分析等。
注注：
“分分子子诊诊断断”包包括括检检验验医医学学领领域域的的“分分子子检检验验”以以及及病理学检查领域的病理学检查领域的“分子病理分子病理”。
2规范性引用文件下下列列文文件件对对于于本本文文件件的的应应用用是是必必不不可可少少的的。
凡凡是是注注日日期期的的引引用用文文件件仅仅注注日日期期的的版版本本适适用用于于本本文文件件。
凡凡是是不不注注日日期期的的引引用用文文件件，其最新版本（包括修改单）适用于本文件。
其最新版本（包括修改单）适用于本文件。
GB/T20468-2006临床实验室定量测定室内质量控制指南临床实验室定量测定室内质量控制指南CNAS-RL02能力验证规则能力验证规则CNSA-CL31内部校准要求内部校准要求临床技术操作规范临床技术操作规范病理学分册病理学分册医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则病理科建设与管理指南（试行），卫办医政发病理科建设与管理指南（试行），卫办医政发200931号号3术语和定义标本接收与处理：
流程和标本是否合格的要点标本接收与处理：
流程和标本是否合格的要点试剂耗材质检：
为何要质检、如何做试剂耗材质检：
为何要质检、如何做核酸提取：
原理和操作技术要领核酸提取：
原理和操作技术要领防污染：
措施和意识防污染：
措施和意识质量控制：
程序和实际运行情况、失控的分析处理质量控制：
程序和实际运行情况、失控的分析处理结果分析与判断：
结果审核、报告发放结果分析与判断：
结果审核、报告发放评审中考核评审中考核的主要的主要内容内容5.2设施和环境条件5.2.1应应实施安全风险评估，如果设置了不同的控制区域，实施安全风险评估，如果设置了不同的控制区域，应制定针对性的防护措施及合适的警告。
应制定针对性的防护措施及合适的警告。
5.2.2涉及涉及基因扩增检验的实验室原则上分四个独立的工基因扩增检验的实验室原则上分四个独立的工作区域：
试剂贮存和准备区；样品制备区；扩增区；扩增产作区域：
试剂贮存和准备区；样品制备区；扩增区；扩增产物分析区。
如使用自动分析仪（扩增产物闭管检测），扩增物分析区。
如使用自动分析仪（扩增产物闭管检测），扩增区和扩增产物分析区可合并。
具体实验室分区应依据其所使区和扩增产物分析区可合并。
具体实验室分区应依据其所使用的技术平台及检验项目和工作量而定用的技术平台及检验项目和工作量而定。
上述每个区域应有充足空间以保证：
样品处置符合分析前、后样品分区放置；仪器放置符合维修和操作要求；样品制备区放置生物安全柜、离心机和冰箱等仪器设备样品制备区放置生物安全柜、离心机和冰箱等仪器设备；打印检验报告时交叉污染的控制。
5.2设施和环境条件工作区域应符合如下要求：
工作区域应符合如下要求：
c）实验室各分区应配置固定和移动紫外线灯，波长为254nm，照射时离实验台的高度一般为6090cm；e）样品制备区应配置二级生物安全柜和洗眼器，实验室附近应有喷淋装置。
所有分子病理实验室均应设置独立的标本前处理区，包括切片区和脱蜡区，用于组织切片、脱蜡、水化、染色等。
脱蜡、水化及染色应在通风设施中进行。
5.2设施和环境条件5.2.3用以保存临床样品和试剂的设施应设置目标温度和允许范围，并记录。
实验室应有温度失控时的处理措施并记录。
5.2.6不同的实验区域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染。
工作结束后应立即对工作区进行清洁，必要时进行消毒及去污染。
应依据所用分析设备和实验过程的要求，制定环境温湿度控制要求并记录。
应有温湿度失控时的处理措施并记录。
扩增扩增仪应配备不间断电源（仪应配备不间断电源（UPS）；应应依据用途（如：
依据用途（如：
RNA检测用水），制定适宜的水质标准（如：
检测用水），制定适宜的水质标准（如：
应除应除RNase），并定期检测），并定期检测。
分子检验各工作区域应有明确的标记。
进入基因扩增实验室各工作区应按照单一方向进行，即试剂贮存和准备区样品制备区扩增区扩增产物分析区。
不同的工作区域宜使用不同的工作服（如不同的颜色）。
工作人员离开各工作区域时，不应将工作服带出。
5.3实验室设备、试剂和耗材实验室设备、试剂和耗材5.3.1.1如从事RNA检测，宜配备70的的冷冷冻冻设设备备。
需要时，配备高高速速冷冷冻冻离离心心机机。
标本制备区使用的一次性加样器吸头应带有滤芯。
PCR试验用容器应可密闭，不同工作区域内的设备、物品不能混用。
组织标本前处理区的设备通常应包括切片机、裱片机、切片刀、电热恒温箱、脱蜡缸、水化缸及HE染色缸等。
5.3实验室设备5.3.1.4应按国家法规要求对强检设备进行检定。
应进行外部校准的设备，如果符合检测目的和要求，可按制造商校准程序进行。
应至少对分析设备的加样系统、检测系统和温控系统进行校准（适用时）。
分析设备和辅助设备的内部校准应符合CNAS-CL31内部校准要求。
ABI5700FAM/SYBRGreenI，VIC/JOE，NED/TAMRA/Cy3，ROX/Texas-Red和Cy5应定期对基因扩增仪、加样器、温度计、恒温设备、离心机和生物安全柜等进行校准。
样本升降温速率样本升降温速率：
快速模式：
1.6-0.8/秒标准模式：
1.6/秒加热块最高升降温速率加热块最高升降温速率：
2.5/秒温度范围温度范围：
4-100温度精度温度精度：
设置值/显示温度的0.25（35至95）（时钟启动后3分钟开始测量）温度均一性温度均一性：
0.5（35至95）（时钟启动后30秒开始测量）光学系统光学系统：
五色激发光滤光片，五色发射光滤光片和CCD成像系统安装时已校准染料安装时已校准染料：
SYBRGreenI，FAM，VIC，JOE，NED，TAMRA，ROX，TexasRed，Cy3，Cy5。
被动参照染料
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