发热伴血小板减少综合征概述.ppt

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发热伴血小板减少综合征概述发热伴血小板减少综合征概述陈淑红陈淑红黑龙江省疾病控制中心黑龙江省疾病控制中心SFTSVSFTSV的发现和研究概况的发现和研究概况病毒性出血热病毒性出血热p一类由病毒引起的，以发热、出血、休克、多器一类由病毒引起的，以发热、出血、休克、多器官损害为主要表现的严重急性传染病。

官损害为主要表现的严重急性传染病。

p病毒性出血热具有较高病死率。

病毒性出血热具有较高病死率。

病毒性出血热的病原病毒性出血热的病原主要为主要为4个病毒科个病毒科沙粒病毒科沙粒病毒科布尼亚病毒科布尼亚病毒科黄病毒科黄病毒科丝状病毒科丝状病毒科均为有包膜单链均为有包膜单链RNA病毒病毒动物或昆虫作为宿主和媒介动物或昆虫作为宿主和媒介p2009-2010年年，在在河河南南、湖湖北北和和山山东东等等地地一一些些丘丘陵陵、山山区区相相继继出出现现病病原原不不明明症症状状类类似似的的病病人人，主主要要表表现现为为发发热热、消消化化道道症症状状、血血小小板板减减少少、白白细细胞胞减减少少及及多多脏脏器器功功能能损损伤伤等等，少少数数重重症症病病例死亡。

例死亡。

p中国疾病控制中心对该新发传染病加强监测，利中国疾病控制中心对该新发传染病加强监测，利用未知病原快速筛查技术体系，在湖北和山东用未知病原快速筛查技术体系，在湖北和山东3名名患者血清中同时发现新病毒基因序列。

患者血清中同时发现新病毒基因序列。

p从湖北、山东、河南、安徽、江苏、辽宁从湖北、山东、河南、安徽、江苏、辽宁6省病人省病人血清标本中分离到血清标本中分离到20株同种病毒。

株同种病毒。

p解析了解析了6省省11株新病毒全基因组信息。

株新病毒全基因组信息。

p并从并从70%急性期病人血清中检测到病毒急性期病人血清中检测到病毒RNA。

p确诊病人恢复期血清中特异性抗体转阳或确诊病人恢复期血清中特异性抗体转阳或4倍增高。

倍增高。

鉴定新病毒研究工作从病原体分离鉴定到病因关系的论证，研究工作从病原体分离鉴定到病因关系的论证，成功确定该新发传染病病原为：

成功确定该新发传染病病原为：

布尼亚病毒科白蛉病毒属的新病毒布尼亚病毒科白蛉病毒属的新病毒p命命名名为为发发热热伴伴血血小小板板减减少少综综合合征征布布尼尼亚亚病病毒毒（Severefeverwiththrombocytopeniasyndromebunyavirus,SFTSV）SFTSV一般生物学特性一般生物学特性SFTSV人感染后可出现病毒血症，从早期病人人感染后可出现病毒血症，从早期病人血血清清中可分离到病毒，病毒感染细胞谱较广，培养中可分离到病毒，病毒感染细胞谱较广，培养上清超滤浓缩后经蔗糖密度剃度离心可获得纯化上清超滤浓缩后经蔗糖密度剃度离心可获得纯化的病毒颗粒，在电镜下呈球形或椭球形，直径约的病毒颗粒，在电镜下呈球形或椭球形，直径约80100nm。

病毒颗粒有双层脂质包膜，包膜。

病毒颗粒有双层脂质包膜，包膜表面有糖蛋白形成的突起，内有病毒基因组与核表面有糖蛋白形成的突起，内有病毒基因组与核蛋白形成的核衣壳结构。

蛋白形成的核衣壳结构。

目目前前国国际际上上公公认认将将白白蛉蛉病病毒毒属属病病毒毒分分成成两两大大组组，一一组组是是对对人人类类致致病病的的，如如立立夫夫特特谷谷热热病病毒毒等等，另另一一组组一一般般对对人人类类不不致致病病，如如乌乌库库病病毒毒等等，新新发发现现的的SFTSV为白蛉病毒属第三组病毒。

为白蛉病毒属第三组病毒。

SFTSV感染流行病学特征感染流行病学特征我我国国目目前前已已在在河河南南、湖湖北北、山山东东、江江苏苏、安安徽徽、辽辽宁宁、浙浙江江、江江西西8省省发发现现发发热热伴伴血血小小板板减减少少综综合合征征（SFTS）病病例例，多多散散发发于于呈呈丘丘陵陵地地貌貌的的农农村村地地区，呈散在分布。

区，呈散在分布。

发发病病时时间间一一般般开开始始于于3月月，高高峰峰期期在在5-7月月份份，可可延续至延续至11月份。

月份。

SFTSV易易感感人人群群年年龄龄分分布布在在39-83岁岁之之间间，其其中中50岁以上患者占岁以上患者占75；没有明显性别差别。

；没有明显性别差别。

宿主和媒介SFTSV传传播播媒媒介介主主要要是是蜱蜱虫虫，人人类类可可通通过过蜱蜱虫虫叮叮咬咬而而得得病病，已已从从长长角角血血蜱蜱中中分分离离到到SFTS病病毒毒，其其核酸序列与人源病毒具有核酸序列与人源病毒具有95左右同源性。

左右同源性。

SFTSV宿宿主主范范围围较较广广，病病毒毒可可感感染染牛牛、羊羊、狗狗等等脊脊椎椎动动物物和和蜱蜱等等节节肢肢动动物物，在在牛牛、羊羊、狗狗、鸡鸡、猪猪血血清清中中存存在在SFTS布布尼尼亚亚病病毒毒抗抗体体，并并已已从从牛牛、羊、狗中分离到病毒。

羊、狗中分离到病毒。

发发现现SFTS死死亡亡病病人人血血清清中中病病毒毒载载量量可可达达107TCID50，直直接接接接触触高高感感染染性性病病人人血血液液可可导导致致人人人直接传播。

人直接传播。

SFTSV病毒循环SFTS临床特征及致病机理临床特征及致病机理SFTS患患者者没没有有特特异异的的临临床床症症状状，主主要要表表现现为为发发热热和胃肠消化道症状，可见局部淋巴结肿大。

和胃肠消化道症状，可见局部淋巴结肿大。

实实验验室室化化验验常常见见血血小小板板减减少少（100）和和白白细细胞胞减减少（少（99）。

）。

大大多多数数患患者者很很快快发发展展为为多多器器官官功功能能异异常常，表表现现为为血血清清中中谷谷丙丙转转氨氨酶酶、谷谷草草转转氨氨酶酶、乳乳酸酸脱脱氢氢酶酶、磷酸肌酸激酶，磷酸肌酸激酶同工酶水平升高。

磷酸肌酸激酶，磷酸肌酸激酶同工酶水平升高。

常见蛋白尿（常见蛋白尿（84）和血尿（）和血尿（59）。

）。

临床特征绝绝大大多多数数患患者者预预后后良良好好，少少数数病病例例病病情情危危重重，出出现现意意识识障障碍碍、皮皮肤肤淤淤斑斑、消消化化道道出出血血等等，可可因因休休克克、呼呼吸吸衰衰竭竭、弥弥漫漫性性血血管管内内凝凝血血（DIC）等等多多脏脏器器功功能能衰衰竭竭死死亡亡。

动动态态监监测测结结果果显显示示幸幸存存者者中中病病毒毒载载量量多多在在发发病病后后7天天开开始始下下降降，但但病病死死者者其其病病毒毒载载量量仍仍维维持持在在较较高高水水平平，可可发发生生经经血血液液人人人人传播。

传播。

在在发发病病第第7-13天天，血血清清病病毒毒载载量量、血血清清谷谷草草转转氨氨酶酶，乳乳酸酸脱脱氢氢酶酶异异常常提提示示可可能能会会导导致致更更为为严严重重的的出出血血症症状状、中中枢枢神神经经系系统统症症状状、DIC、MOF及及血血清中组织酶升高。

清中组织酶升高。

病死率约病死率约12左右。

左右。

新新型型布布尼尼亚亚病病毒毒的的致致病病机机理理尚尚待待更更多多的的临临床床数数据据和和实实验验室室研研究究进进行行阐阐明明。

选选取取发发热热伴伴血血小小板板减减少少综综合合征征病病不不同同预预后后的的患患者者，利利用用Luminex技技术术平平台台，检检测测了了27种种细细胞胞因因子子的的动动态态变变化化，并并通通过过标标准曲线对每种因子进行定量。

准曲线对每种因子进行定量。

致病机理致病机理研研究究结结果果显显示示SFTS患患者者急急性性期期血血清清中中促促炎炎性性细细胞胞因因子子IL1-RA，IL-6，IL-8，IL-10，MCP-1，G-CSF及及IP-10水水平平大大幅幅度度提提升升，而而PDGF-BB和和RNATES水水平平则则显显著著降降低低，且且病病毒毒载载量量与与血血清清细细胞因子水平具有相关性。

胞因子水平具有相关性。

研研究究结结果果提提示示高高病病毒毒载载量量可可能能会会导导致致危危重重病病人人的的严严重重病病理理变变化化，而而促促炎炎性性细细胞胞因因子子异异常常可可能能与与SFTS症状加重有关。

症状加重有关。

在在SFTS患患者者血血清清中中几几乎乎检检测测不不出出干干扰扰素素。

已已有有的的布布尼尼亚亚病病毒毒的的研研究究认认为为，布布尼尼亚亚病病毒毒科科的的病病毒毒通通常常不不能能有有效效促促进进抗抗病病毒毒复复制制的的干干扰扰素素生生成成，有有些非结构蛋白具有拮抗干扰素的作用。

些非结构蛋白具有拮抗干扰素的作用。

基基于于这这些些资资料料推推测测，新新型型布布尼尼亚亚病病毒毒可可能能通通过过抑抑制制靶靶细细胞胞生生成成干干扰扰素素而而在在体体内内复复制制，在在这这一一过过程程中中可可通通过过诱诱导导机机体体产产生生炎炎症症性性趋趋化化因因子子而而引引发发后后续的免疫炎症反应。

续的免疫炎症反应。

将将从从患患者者血血清清中中分分离离的的SFTSV接接种种到到小小鼠鼠体体内内，在在感感染染急急性性期期可可引引发发特特征征性性临临床床症症状状，即即血血小小板板减少和白细胞减少减少和白细胞减少发现病毒核酸在血、肝、脾、肾中均可检出发现病毒核酸在血、肝、脾、肾中均可检出病病毒毒感感染染可可有有效效地地诱诱导导病病毒毒特特异异性性IgM、IgG以以及及中和抗体的生成中和抗体的生成发发现现SFTSV在在肝肝、脾脾、肾肾引引起起显显著著病病理理变变化化，与与临床观察到的肝肾损伤症状一致。

临床观察到的肝肾损伤症状一致。

SFTSV感染动物模型、免疫学、病理学感染动物模型、免疫学、病理学发发现现脾脾巨巨噬噬细细胞胞为为病病毒毒感感染染复复制制的的靶靶细细胞胞，在在SFTSV感感染染的的脾脾组组织织中中，巨巨噬噬细细胞胞大大量量增增加加，血血小小板板也也出出现现大大量量沉沉积积，并并且且荧荧光光共共定定位位研研究究显显示示病毒与血小板共定位于巨噬细胞的胞浆中。

病毒与血小板共定位于巨噬细胞的胞浆中。

结结合合细细胞胞学学实实验验发发现现SFTSV可可以以黏黏附附于于人人血血小小板板并并引引发发巨巨噬噬细细胞胞对对血血小小板板的的吞吞噬噬，目目前前的的研研究究提提示示SFTSV感感染染导导致致的的血血小小板板减减少少可可能能是是由由于于脾脾巨巨噬细胞对病毒黏附血小板的异常清除所致。

噬细胞对病毒黏附血小板的异常清除所致。

SFTSVSFTSV实验室检测方法实验室检测方法标本-病人血清病毒核酸诊断病毒特异性IgM抗体诊断病毒分离培养双份血抗病毒IgG抗体检测（免疫荧光、ELISA）空斑减少或微量中和试验检测中和抗体。

病毒血症期病毒血症期IgMIgM、IgG、中和抗体和总抗体：

、中和抗体和总抗体：

ELISA和中和实验等和中和实验等病毒分离病毒分离方法方法0IgG核酸检测方法病程病程SFTSV病毒感染的动态指标与检测样本病毒分离RNA提取cDNA合成一步法RT-PCRPCR电泳分析实时、定量分析基因序列分析IFA或FA核酸检测流程图常用PCR检测方法常规PCR检测单轮PCR检测2轮PCR检测（套式或半套式PCR）实时定量PCR基于SYBRGreenI的PCR检测基于探针的PCR检测方法：

HybProbe/Taqman根据检测靶标单元PCR检测方法多元PCR检测方法核酸检测流程反应体系混合物正、反向引物混合物特异性荧光探针1）核酸分离2）Real-timePCR检测20l5l反应条件取决于病原体特异性PCR仪合适的PCR管1、带手套、带手套2、注意及时更换手套，尽量保持分离、注意及时更换手套，尽量保持分离RNA的管子封闭的管子封闭。

3、分离、分离RNA保持在冰上保持在冰上4、使用灭菌和无、使用灭菌和无RNA酶的耗材酶的耗材5、用、用0.1MNaOH，1mMEDTA（或氯仿）和无（或氯仿）和无RNA酶水冲洗塑料酶水冲洗塑料耗材；玻璃器皿使用含去污剂的水反复冲洗，然后耗材；玻璃器皿使用含去污剂的水反复冲洗，然后240干烤干烤44小时，或充满小时，或充满0.1%DEPC0.1%DEPC的水的水3737过夜（或不少于孵育过夜（或不少于孵育1212小时）。

小时）。

66、溶液：

如果不能确认是否无、溶液：

如果不能确认是否无RNARNA酶（酶（RNaseRNase-free）-free），应用，应用0.1%DEPC0.1%DEPC处理。

处理。

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