中药的及其制剂分析报告概论Word格式.docx

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所以，对于中药制剂的研究，很难用1～2中成分作为疗效指标成分，因此，对于中药制剂的质量分析应当综合考虑。

2、中药制剂组方的原则性和规律性中药制剂是严格按照中医理论和用药原则而组方的，各味药材在处方中地位不同，有君、臣、佐、使之分，进行质量分析时，首先进行组方分析，通过组方分析首选君药、贵重药及剧毒药建立分析方法。

当君药无明显特征或有效成分不明确而难以分析时，才可考虑分析臣药及其他药。

其次，对毒药、剧药成分进行检测，以达到临床用药安全可靠，目前，多根据制剂中某药味有效成分的特性建立控制方法，随方分析主药或药群的有效成分进行质量评价。

3、中药制剂中原药材来源和炮制的差异性中药制剂中原药材差异较大，分析时应考虑药材来源与炮制等方面的影响。

中药材品种繁多，同名异物、同物异名现象很多，药材规格、产地、生长环境、药用部位、采收季节和加工方法等均会影响到药材中有效成分的含量，从而影响到中药制剂的质量和临床疗效。

现代研究表明，不同的采收期中药的有效成分含量差异很大，如薄荷中的薄荷脑于秋季叶变黄时含量最高，丹参中的有效成分丹参酮在11、12月份含量最高。

此外，中药材经加工炮制后，其化学成分、性味、药理作用等方面均会发生一定的变化，为了保证中药制剂的质量，药材应严格遵守中药炮制规，对炮制工艺、成品质量都要严格控制。

4、中药制剂剂型、生产工艺及辅料的多样性含有相同药材的不同中药制剂，不同生产工艺的差别，都将会影响到制剂中化学成分的含量。

中药制剂的剂型较多，传统剂型有丸、散、膏、丹、酒、汤、茶、锭等；

现代新剂型有合剂、酊剂、颗粒剂、片剂、注射剂等，各种剂型由于制备方法不一，存在状态不同，剂型的多样性，决定了分析方法的多样性。

有些中药制剂生产工艺较为复杂，影响因素较多，即使同一批、同一生产车间，若工艺稍有差别，也很难保证不同批次之间化学成分的一致性。

此外，中药制剂所用辅料，如蜂蜜、糯米粉、植物油等，对质量分析均有一定的影响，大多需要进行提取、分离、净化等繁琐的预处理，以排除干扰，才能获得准确的分析结果。

所以，在分析方法上除考虑方法的专属性、灵敏性外，尚需注意药材在制剂中的存在形式、辅料对测定的影响及各成分间的干扰。

应针对不同工艺、剂型和辅料等选择适宜的分析方法和检测项目。

若制剂中含有药材粉末，保留有植物组织特征，可用显微法鉴别；

进行化学成分分析时，则须将被测成分从植物细胞中提取出来。

若制剂是由药材提取物、浸出物制成，则理化分析法是其主要的分析方法。

5、中药制剂分析方法的先进性由于中药材品种繁多，来源复杂，即使同一品种、由于产地、生态环境、栽培技术、加工方法等不同，其质量也会有差别，中药制剂的组成又十分复杂，各种成分的含量高低不一，许多成分的含量比较低，有的成分含量很低，甚至为十万分之几、百万分之几，因此，中药制剂的分析方法需要求其专属性和灵敏度。

目前，主要运用先进的科学技术进行分析，如色谱及连用技术、药理和生物测定技术及中药指纹图谱研究技术等。

二、影响中药制剂质量的因素

中药制剂的原料中药材大都是来自于自然界的植物、动物、矿物，因此，中药处方及中药材的原辅料及包装材料、剂型与生产工艺、质量标准与质量监控措施、厂房设施等因素都影响其质量。

1、处方处方是影响中药制剂疗效的主要因素，无论是古方、验方还是医院协定处方，在制备制剂前都必须进行处方中药味、各药味间用量比例及日服剂量的筛选，使处方尽量精炼、严谨，符合中医辨证施治、理法方药的原则。

因此，处方是中药制剂研究的基础和依据，但值得注意的是，寻找一个治百病的处方是不科学的，只要对某一种病或对疾病的某一点有特效的处方就是好处方。

2、原辅料及包装材料原料、辅料是中药制剂生产的基础物质，是制剂生产的第一关。

其质量状况将会直接影响药品的质量。

尤其是中药材来源复杂，采收季节、产地、贮藏、饮片炮制质量等均可直接影响中药制剂产品的质量及其安全性和有效性。

《中国药典》将黄芪甲苷作为黄芪药材质量的指标成分，研究表明，产的蒙古黄芪和产的蒙古黄芪黄芪甲苷的含量相差9倍。

因此，重视制剂质量，必须从生产制剂的基础物质抓起，通过严格、科学、系统的管理，使原料、辅料及包装材料从采购、验收、入库、贮藏、发放等方面做到管理有章可循，使用有标准可依，记录有据可查，从而保证合格、优质的原料、辅料及包装材料用于药品的生产。

3、原料药的采收季节和时间、炮制与贮藏采收时间中药品质的好坏，取决于有效物质含量的多少，有效物质含量的高低与产地、采收季节、时间、采收方法有着密切的关系。

现代研究表明，不同的采收期中药的有效成分含量差异很大，如以总黄酮和淫羊藿苷含量为指标成分的淫羊藿药材，有学者对省临江野生淫羊藿不同采收期地上部位中总黄酮和淫羊藿苷的含量进行测定，发现不同采收期的淫羊藿地上部位中淫羊藿苷的含量在0.2630%～3.8133%之间，总黄酮的含量在6.360%～14.840%之间；

综合考虑淫羊藿苷含量和总黄酮含量，淫羊藿最佳采收期应以9月中旬为佳。

炮制加工中药炮制之后能使药材达到降低或消除毒性或副作用、改变或缓和药物的性能、增强疗效、净制、便于制剂和保存药效等目的，这是中医用药的一个特点，不同的处方、不同的剂型有不同的炮制要求和方法。

中药饮片能否按《炮制规》炮制，直接影响中药制剂的临床疗效和临床安全。

饮片贮藏保管中药的性状及其所含成分是决定该药材品质的主要标志。

贮藏保管的好坏，直接影响到主要成分与性状的变化。

中药由于含有不同的化学成分加之外界温度、湿度、和空气的影响，如贮藏保管不当，就会产生虫蛀、发霉、泛油、变色、气味散失等变异现象，直接对药材的质量产生影响，进而关系到临床用药的安全与疗效。

4、剂型与生产工艺中药制剂的剂型是影响中药制剂质量稳定性、有效成分的溶出和吸收、药物显效快慢强弱的重要因素，即剂型与制剂疗效直接相关。

因此，必须根据临床防治疾病的需要、处方药物及有效成分的性质和生产的技术水平及条件来选择剂型。

中药制剂大多需选用适当的溶媒和方法，提取有效成分，再进一步精制、纯化后做成制剂，应用于临床发挥治疗和调节作用。

在提取过程中，药材的浸泡、选用的溶媒、提取方法和时间，精制的方法和操作、制备过程中的干燥方法、成型方法、包装及操作人员的操作方式等都影响中药制剂的质量，进而影响临床效果。

构成制剂工艺的因素较多，如粉碎、提取、分离除杂、浓缩、干燥、及制剂造型的对象方法、工艺条件等，必须通过不断实验来选择工艺。

当前，如何将低温提取、超临界提取、微囊、微球、脂质体技术、离心分离技术、超滤技术等应用于中药制剂是中药制剂工艺现代化的关键，因此，生产工艺对药物制剂疗效的影响也可概况为以下三个方面：

（1）取舍有效成分的种类、数量及存在形式；

（2）控制有效成分的释放速度；

（3）直接控制药物的吸收速度。

5、质量标准与质量监控措施质量是疗效的保证，是工艺的体现，质量标准是药品质量优劣的指标，中药生产现代化和质量标准科学化是发展中药的关键，由于中药的有效成分复杂，疗效多根据传统经验的积累，作用于人体多强调整体性、互补性、协调性，而且目前中药制剂的质量标准水平相对较低，因此，如何采用现代分析技术手段与传统经验鉴定相结合制订出能指导生产操作和反映产品在质量的均一性、有效性、稳定性、重现性的多元化可控指标是提高中药制剂质量，促进中药现代化的重点，也是难点。

现代分析方法和技术在中药制剂质量控制方面得到了扩大应用，《中国药典》2010年版对部分常用饮片和毒性药材制订了相应的在质控标准。

中药指纹图谱技术的应用，对中药制剂生产用的原料、中间体、成品都能做到定性、定量检测，有效鉴别中药材的产地或真伪，监督生产过程的规与否，从而达到良好控制制剂产品的质量。

6、厂房设施符合质量要求的厂房设施是提高中药制剂质量的保证，厂房的设计、空气洁净技术的应用、生产车间的设计与管理以及设备的选型、安装、维修与保养无一不影响着中药制剂的质量，中药制剂生产单位必须不断更新设备，采用较成熟的现代喷雾干燥技术，高速离心技术及先进的检测仪器等手段，以更完全地提取出有效成份，除去无效成分，使中药制剂符合三效（高效、速效、长效）、三小（服用剂量小、毒性小、副作用小）、五方便（服用、携带、贮藏、生产、运输方便）的要求。

因此，生产企业必须按照GMP组织生产；

牢固树立质量第一的思想，在生产中严格执行生产工艺规程、岗位操作法和标准操作规程；

质量管理部门要加强对生产全过程的质量管理和检验，控制有效成分的稳定性，保证最终产品批次间的质量统一。

三、中药指纹图谱

中药指纹图谱（traditionalchinesemedicinefingerprint）系中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标定该中药材或中药制剂特性的共有峰的图谱，即运用现代分析技术对中药化学信息以图形（图像）的方式进行表征并加以表述。

中药指纹图谱是一种现代中药鉴别新技术，是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性，能提供从原药材的种植、栽培、引种，中成药生产过程中工艺的规与优化，到产品质量标准的制订全方位的质量保证。

因此，中药指纹图谱为研究道地药材、稀有药材替代品以及原药材真伪鉴别的依据。

目前，指纹图谱技术是在现有的技术条件下对中药材、中成药进行质量控制最好的解决办法。

现代分析技术包括光谱、色谱、波谱、核磁共振、X-射线衍射等和各种连用技术。

（一）、中药指纹图谱的特点

中药指纹图谱是一种综合的、量化的鉴别手段。

“整体性”和“模糊性”为其显著特点。

①整体性，是指把所得指纹图谱作为一个整体进行考察，而不能以其中单个峰的有无、峰的高低以及峰面积的大小来判断检测品的质量。

②模糊性，是指个体样品本身存在着差异，难以精确的进行测量，绝大多数的指纹图谱本身也存在着模糊性，不能保证在所得的指纹图谱中每一个峰都没有重叠，而且也不能保证所得的图谱包含了样品的所有特征，况且在不同的实验条件下得到的图谱会有很大的差异。

但是，只要能圈定图谱中关键部分即可对样品进行质量控制。

因此，中药指纹图谱不仅是一种中药质量控制模式和技术，更可以发展成为一种采用各种指纹图语来进行中药理论（复杂系统）和新药开发的研究体系和研究模式。

（二）、制订中药指纹图谱的原则及意义

1、建立中药指纹图谱的原则中药指纹图谱的建立，要以系统的化学成分研究和药理学研究为依托，应遵循以下三个原则。

（1）系统性：

指纹图谱反应的化学成分应包括中药所含大多数组分的类别或指标成分的全部。

如人参中的有效成分是人参皂苷，则在指纹图谱的考察中，应尽可能多地反应其中的皂苷成分；

而对于有效成分较为复杂的，如银杏叶中的有效成分是黄酮和银杏酯类，针对这两类成分其指纹图谱可采用两种方法进行分析，最终达到系统、全面的目的。

（2）特异性：

指纹图谱成是中药自身的“化学条码”，其反映的化学信息（表现为保留时间或比移值）具有高度的选择性，通过指纹图谱的特异性，能有效鉴别区分中药的真伪、优劣或产地。

（3）重现性（可操作性）：

是指已建立的指纹图谱，不同的操作者、不同的实验室，只要在规定的方法和条件下、允许的误差应围，即能做出相同的结果，这样才能保证指纹图谱的通用性和实用性。

2、制订指纹图谱的意义指纹图谱是对中药质量控制的补充和提高。

理想中的指纹图谱不仅能进行定性鉴别，也可用于精确的定量分析。

通过指纹图谱研究，可以掌握每个批次原药材、中间体成分的变化，进行有指导的合理“混批勾兑”，保证成品在成分含量、组成比例上保持一致，减少批间差异。

（三）、中药指纹图谱的类型

狭义的中药指纹图谱是指中药化学（成分）指纹图谱；

广义的中药指纹图谱则通常按测定手段和应用对象的不同进行分类。

1、按测定手段分类中药指纹图谱按测定手段可分为中药化学（成分）指纹图谱和中药生物指纹图谱。

中药生物指纹图谱主要是测定各种中药材的DNA图谱，由于每个物种基因的唯一性和遗传性，中药材DNA指纹图谱可用于对中药材的种属鉴定、植物分类研究和品质研究。

它对中药材GAP基地建设、中药材种植规（SOP）、选择优良种质资源和药材道地性研究极为有用。

2、按应用对象分类中药指纹图谱可用于中药制剂研究、生产过程的各个阶段，按应用对象来分类，可分为中药材（原料药材）指纹图谱、中药原料药（包括饮片、配伍颗粒）指纹图谱和中药制剂指纹图谱。

如分得更细，还可包括用于工艺生产过程中间产物的指纹图谱。

值得注意的是建立中药材化学指纹图谱必须考虑诸多因素的影响。

中药品种混杂，历史上形成的同名异物、异名同物，以及同一物种受产地环境、不同有效部位所含成分的波动大等因素，给质量控制带来了很多困扰。

因此对于某一种中药材的指纹图谱，需要有大量的数据积累，才能制定合理的相似性标准。

（四）、中药色谱指纹图谱研究的技术关键

（一）研究思路与容

1、确定研究对象一种药材有多个临床应用，有多种活性组分。

研究中药注射剂的指纹图谱时，必须尽可能详尽地了解药材、中间体及成品中所含成分的种类及其理化性质，找出成品中的药效成分或有效成分，作为成品及中间体指纹图谱的研究对象，即分析检测目标。

2、研究容中药注射剂在固定中药材品种、部位、产地、采收期以及加工工艺的前提下，需制订中药材、有效部位或中间体、注射剂的指纹图谱。

（二）研究方案

1、样品的选择与收集药材应尽可能固定产地（如道地药材）、采收期和炮制加工方法等，对工艺稳定、疗效恒定、临床使用中很少出现异常的药材批次应重点选择，另外还应收集不同产地、不同采收期的药材，中间体、注射剂的收集原则也应重点选择工艺稳定、疗效恒定、临床使用中很少出现异常的批次。

供试品的取样应按《中国药典》（2010年版）一部中规定的中药材取样方法，以保证所取供试品的代表性和均一性。

2、供试品的制备在指纹图谱研究过程中，供试品（中药材、中间体及注射剂）溶液的制备，应根据所含化学成分的理化性质和检测方法的需要，选择适宜的方法进行制备。

制备方法须确保该注射剂、有效部位或中间体主要化学成分在指纹图谱中的再现，以便分析指纹图谱的相关性。

注射剂中除少数品种添加溶剂外，所含化学成分均具有较好的水溶性，而且研究生产工艺时考虑到色素、生物大分子等因素，生产过程中已通过微孔滤膜、脱色等操作，无须特殊处理，可直接分析检测。

3、参照物的制备制订指纹图谱必须设立参照物，应根据供试品中所含化学成分的性质，选择适宜的对照品作为参照物；

如果没有适宜的对照品，可选择适宜的标物作为参照物。

参照物的制备应根据检测方法的需要，选择适宜的方法进行。

4、研究方法的选择方法的选择根据所含化学成分的理化性质，选择适宜的测定方法。

建议优先考虑色谱方法。

对于成分复杂的中药材及其制剂，特别是中药复方注射剂，必要时可以考虑采用多种检测方法，建立多指纹图谱。

5、色谱条件的选择无论是原药材、中间体，还是注射剂，其指纹图谱的色谱条件选择是整个研究检测方法过程中最重要、关键性的容。

下面以HPLC法为例，阐述各影响因素与解决途径。

（1）色谱柱：

指纹图谱研究时一般选择5—10um的C18填充柱，以250mm×

4.6mm较适宜，其他特殊填料的色谱柱，如氨基柱、氰基柱等，可视研究对象的不同进行选择。

（2）流动相：

流动相可选择乙腈、甲醇、水和四氢呋喃等。

对于反相高效液相色谱法，乙腈·

水系统比较适合梯度洗脱，而醇一水系统由于热力学和可压缩性因素，在梯度洗脱时易导致基线漂移。

-

（3）检测器：

HPLC法应用最多的是紫外检测器，且前主要是可变波长型和二极管阵列检测器，适用于在紫外区具有吸收物质的测定。

蒸发光散射检测器适用于无生色团物质的检测，如碳水化合物（多糖）、类脂类（磷脂）、皂苷等，与紫外检测器互相补充。

联用技术中质谱检测器是最有效的检测手段，如GC-MS，HPLC-MS等可提供大量的结构信息，符合解决中药复杂体系的要求。

检测波长的选择：

中药制剂根据君、臣、佐、使的组方理论，在尽可能兼顾佐、使药的同时，主要选择君、臣药中有效成分的吸收峰值；

一个检测波长的色谱图如达不到控制质量的目的时，可建立多个检测波长下的指纹图谱；

（4）柱温：

柱温的选择与恒定是影响指纹图谱技术稳定性的主要因素之一。

当色谱图中某个色谱峰因溶解度差而峰形较“钝”时，可适当提高柱温（30一50℃）；

若样品中组分在常温或高温下不稳定，易发生水解或分解（如乌头生物碱）等变化时，可降低柱温。

（5）进样量：

进样量对指纹图谱的结果影响不大，但加大进样量，可以减弱梯度洗脱时基线漂移的程度；

然而色谱柱的载样量有一定的限度，进样量过大，色谱柱超载，导致色谱峰峰宽增加或色谱峰峰尖钝化，并影响柱的寿命。

6、指纹特征的选择与技术参数指纹图谱方法一旦建立，除提供指纹图谱外，还应说明相应的技术参数。

通过大样本的指纹图谱在的挖掘，找出其中的指纹特征是指纹图谱研究的目的。

（1）共有指纹峰的标定：

采用色谱法制订指纹图谱，必须根据参照物的保留时间，计算指纹峰的相对保留时间。

根据10批次以上供试品的检测结果，标定共有指纹峰。

色谱法采用相对保留时间标定指纹峰。

（2）共有指纹峰面积的比值：

以对照品作为参照物的指纹图谱，以参照物峰面积作为1，计算各共有指纹峰面积与参照物峰面积的比值；

以标物作为参照物的指纹图谱，则以共有指纹峰中其中一个峰（要求峰面积相对较大、较稳定的共有峰）的峰面积作为l，计算其他各共有指纹峰面积的比值。

各共有指纹峰的面积比值必须相对固定。

1）中药材供试品的图谱中各共有峰面积的比值与指纹图谱中各共有峰面积的比值比较，单峰面积占总峰面积大于或等于20％的共有峰，其差值不得大于±

20％；

单峰面积占总峰面积大于或等于10％，而小于20％的共有峰，其差值不得大于±

25％；

单峰面积占总峰面积小于10％的共有峰，峰面积比值不作要求，但必须标定相对保留时间。

未达基线分离的共有峰，应计算该组峰的总峰面积作为峰面积，同时标定该组各峰的相对保留时间。

2）注射剂及其有效部位或中间体供试品的图谱中各共有峰面积的比值与指纹图谱中各共有峰面积的比值比较，保留时间小于或等于30分钟的共有峰：

单峰面积占总峰面积大于或等于20％的共有峰，其差值不得大于±

单峰面积占总峰面积大于或等于5％，而小于10％的共有峰j其差值不得大于±

30％；

单峰面积占总峰面积小于5％的共有峰，峰面积比值不作要求，但必须标定相对保留时间。

保留时间超过30分钟的共有峰：

单峰面积占总峰面积大于或等于10％的共有峰，按上述规定执行；

（3）非共有峰面积：

中药材供试品的图谱与指纹图谱比较，非共有峰总面积不得大于总峰面积的10％。

注射剂及其有效部位或中间体供试品的图谱与指纹图谱比较，非共有峰总面积不得大于总峰面积的5％。

案例[1]：

HPLC法对不同产地12批白花蛇舌草药材的指纹图谱研究

精密称取白花蛇舌草样品1.0g，置125mL圆底烧瓶中，加入体积分数80％甲醇20mL，超声提取40min，取上清液用微孔滤膜（0．45um）过滤，即得供试品溶液。

色谱条件为ThermoBetaBasie—18（250mm×

4.6mm，5um）为色谱柱；

柱温：

30℃；

以乙腈0.5％醋酸为流动相，连续梯度洗脱；

体积流量1.0mL·

min-1；

检测波长为360nm；

进样量10uL．注入高效液相色谱仪，记录色谱图（图15-1）和各色谱峰保留时间（图15-2），以面积归一化法计算各色谱峰相对峰面积（AR）．

总之，指纹图谱研究的建立、分析、比较、评价和校验，应逐渐取得共识并形成规。

指纹图谱研究应结合当前的实际情况，同时还应该结合生产工艺的优选及药效和临床观察，当前阶段宜简不宜繁、宜易不宜难，以确保研究方法与产品质量的基本稳定和一致。

图15-1白花蛇舌草药材标准色谱指纹图谱

图15-212批白花蛇舌草药材色谱图

第二节中药及其制剂中待测成分的提取分离和纯化

中药制剂的组成非常复杂，除制剂特有的工艺步骤外，还含有其他的附加剂，原药材和提取物中还含有众多的化学成分，因此，在测定前需提取待测组分，有的还需作进一步的纯化处理。

一中药及其制剂中待测成分的提取分离方法

中药制剂常用的提取方法通常有萃取法、冷浸法、回流提取法、连续回流提取法、水蒸气蒸馏法、超声提取法和超临界流体萃取法等。

1、萃取法萃取法是利用溶质在两种互不相溶的溶剂中溶解度的不同，使物质从一种溶剂转移到另一种溶剂中，经过多次萃取，将测定组分提取出来的方法。

萃取法主要用于液体制剂中待测组分的提取分离，多用有机溶剂将其萃取出来，以便分析测定。

萃取用溶剂应根据组分的溶解性来选择，测定组分在其中的溶解度大，杂质在其中的溶解度小。

溶质在有机相和水相的分配比越大，萃取效率越高。

根据相似相溶的原理，极性较强的有机溶剂正丁醇等适用于提取皂苷类成分，醋酸乙酯多用于提取黄酮类成分，氯仿分子中的氢可与生物碱形成氢键，多用于提取生物碱类成分，挥发油等非极性组分则宜用非极性溶剂乙醚、石油醚等提取。

水相的pH可影响弱酸弱碱性物质在两相的分配。

酸性有机组分在酸性条件下不电离，在有机相中溶解度增大而有利于提取；

碱性组分则在碱性条件下不电离，易被有机溶剂提出。

溶液的pH应根据组分的pKa来确定，酸性组分提取的pH一般应比pKa低1～2个pH单位，碱性组分提取的pH一般应比pKa高1～2个pH单位。

萃取通常在分液漏斗中进行，加入有机溶剂后，振荡、放置分层后分取有机相。

若提取液用作鉴别，一般只提取一次；

若用作含量测定，应提取完全，一般