四培养基.ppt

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培养基的培养基的配制及质量控制配制及质量控制2009年10月一、培养基的配制一、培养基的配制培养基是绝大多数微生物试验的基础。

因培养基是绝大多数微生物试验的基础。

因此，培养基的质量是微生物试验成功与否此，培养基的质量是微生物试验成功与否的关键因素。

适宜的培养基制备方法、贮的关键因素。

适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。

的保证。

培养基可按处方制备也可使用按处方生培养基可按处方制备也可使用按处方生产的符合规定的商品化成品培养基，脱水产的符合规定的商品化成品培养基，脱水培养基除附有处方和使用说明外还应注明培养基除附有处方和使用说明外还应注明有效期、贮存条件、适用性试验的质控菌有效期、贮存条件、适用性试验的质控菌株和用途。

配制时应按使用说明上的要求株和用途。

配制时应按使用说明上的要求操作，受潮结块不能使用，以确保培养基操作，受潮结块不能使用，以确保培养基的质量符合要求。

的质量符合要求。

配制培养基使用的容器应是玻璃器皿或配制培养基使用的容器应是玻璃器皿或搪瓷器皿如搪瓷筒、量筒、漏斗、三角烧搪瓷器皿如搪瓷筒、量筒、漏斗、三角烧瓶、刻度吸管、试管、培养皿等。

使用瓶、刻度吸管、试管、培养皿等。

使用的的器皿应器皿应洗净，用蒸馏水冲净，烘干后方可洗净，用蒸馏水冲净，烘干后方可使用。

禁用金属容器如铁、铜、铝容器，使用。

禁用金属容器如铁、铜、铝容器，避免金属离子与培养基成分结合，生成有避免金属离子与培养基成分结合，生成有害物质，影响细菌生长。

害物质，影响细菌生长。

培养基若于非洁净的玻璃器皿中制备，培养基若于非洁净的玻璃器皿中制备，可能导致抑菌物质进入培养基中。

抑菌物可能导致抑菌物质进入培养基中。

抑菌物质可能是残留的玻璃器皿清洁用的清洁剂质可能是残留的玻璃器皿清洁用的清洁剂或之前玻璃器皿所盛装的物质。

因此。

应或之前玻璃器皿所盛装的物质。

因此。

应使用纯化水完全冲洗玻璃器皿以消除清洁使用纯化水完全冲洗玻璃器皿以消除清洁剂和外来物质的残留，并进行清除污物的剂和外来物质的残留，并进行清除污物的确认。

确认。

配制培养基最常用的溶剂是纯化水，配制培养基最常用的溶剂是纯化水，特殊情况下需要用去离子水和蒸馏水，特殊情况下需要用去离子水和蒸馏水，对热敏感的培养基应用灭菌水和无菌容对热敏感的培养基应用灭菌水和无菌容器配制与分装，配制时若需加热助溶应器配制与分装，配制时若需加热助溶应注意温度不要过高注意温度不要过高、对配制培养基的过程作详细的记录，、对配制培养基的过程作详细的记录，记录内容包括：

配制日期、培养基名称、记录内容包括：

配制日期、培养基名称、成分、配制数量、质量监控结果等进行全成分、配制数量、质量监控结果等进行全面详细记录。

面详细记录。

1、培养基的制备方法、培养基的制备方法称量称量配制配制分装分装矫矫正pH2、培养基的灭菌、培养基的灭菌灭灭菌方法及菌方法及条条件不件不当当可直接可直接影响影响培培养养基基质量质量，培，培养养基基灭灭菌方法和菌方法和条条件，件，应应通過通過无菌无菌性性试验试验和促生和促生长试验进行验证长试验进行验证，验证验证方法同方法同中國中國药典药典2010年版年版附附录灭录灭菌菌法。

法。

不同不同种类种类培培养养基基应采应采用不同的用不同的灭灭菌方菌方法，法，配制配制好的培好的培养养基基灭菌一般多用流通灭菌一般多用流通蒸汽灭菌和滤膜过滤除菌蒸汽灭菌和滤膜过滤除菌.流通蒸汽灭菌流通蒸汽灭菌滤膜过滤除菌滤膜过滤除菌3、培养基的贮藏、培养基的贮藏商品化培养基应根据使用说明书上的商品化培养基应根据使用说明书上的要求进行储存。

培养基标签上应标有批号，要求进行储存。

培养基标签上应标有批号，生产日期、有效期及培养基的有关特性。

生产日期、有效期及培养基的有关特性。

所采用的保藏和运输条件应使培养基最低所采用的保藏和运输条件应使培养基最低限度失去水分并提供机械保护。

限度失去水分并提供机械保护。

配制好的培养基应保存在配制好的培养基应保存在225避避光的环境。

若保存于非密闭容器中光的环境。

若保存于非密闭容器中，一般一般在三周内使用；若保存于密闭容器中在三周内使用；若保存于密闭容器中，一一般在一年内使用般在一年内使用，琼脂培养基不得在琼脂培养基不得在0或或0以下存放，防止冷冻破坏凝胶特性。

以下存放，防止冷冻破坏凝胶特性。

若培养基要长期保存，琼脂平板应密闭包若培养基要长期保存，琼脂平板应密闭包装或置于密闭容器中以防止水分流失。

装或置于密闭容器中以防止水分流失。

培养基灭菌后应立即取出，不得储藏在培养基灭菌后应立即取出，不得储藏在高压高压菌器中，避免影响培养基的质量。

菌器中，避免影响培养基的质量。

制备好的培养基应保存在制备好的培养基应保存在225、避光、避光的环境。

的环境。

保存于密闭容器中，可防止水分流失以保存于密闭容器中，可防止水分流失以延长保存时间。

延长保存时间。

固体培养基灭菌后的再融化应在加热的固体培养基灭菌后的再融化应在加热的水浴中或采用流通蒸汽进行，只允许一次，水浴中或采用流通蒸汽进行，只允许一次，融化的培养基应放在融化的培养基应放在4550的水浴中，的水浴中，不得超过不得超过8小时。

小时。

二、培养基的质量控制二、培养基的质量控制目前，许多实验室为了操作方便，多使用脱水目前，许多实验室为了操作方便，多使用脱水培养基进行配制或购买已制备好的分装于培养皿培养基进行配制或购买已制备好的分装于培养皿或玻璃容器的商业培养基。

或玻璃容器的商业培养基。

经经实实验验室室配配制制或或由由生生产产厂厂生生产产的的培培养养基基的的质质量量高高度度依依赖赖于于其其如如何何制制备备，采采用用不不适适宜宜方方法法制制备备的的培培养养基基将将影影响响微微生生物物的的生生长长或或复复苏苏，从从而而影影响响试试验验结果的可靠性。

结果的可靠性。

所有配制好的培养基均应进行验证，验证所有配制好的培养基均应进行验证，验证方法参照方法参照中国药典中国药典2010年版年版附录无附录无菌检查或微生物限度检查项下有关规定进菌检查或微生物限度检查项下有关规定进行。

实验室配制的培养基的常规监控项目行。

实验室配制的培养基的常规监控项目是外观、性状、是外观、性状、pH、促生长试验、定期的、促生长试验、定期的稳定性检查以及培养基有效期的确定。

稳定性检查以及培养基有效期的确定。

培养基的有效期是指已通过促生长试验的培养基的有效期是指已通过促生长试验的培养基在整个有效期内均需符合这些相应培养基在整个有效期内均需符合这些相应的标准。

每批培养基储存的时间将取决于的标准。

每批培养基储存的时间将取决于一定存放条件（包括容器和密封性）的培一定存放条件（包括容器和密封性）的培养基组成成分的稳定性。

养基组成成分的稳定性。

当批培养基不符合促生长试验，应寻找造当批培养基不符合促生长试验，应寻找造成不合格的原因。

这个调查包括采取适当成不合格的原因。

这个调查包括采取适当的行动以防止问题的重复出现。

如果未找的行动以防止问题的重复出现。

如果未找到原因或还没有解决有关培养基的促生长到原因或还没有解决有关培养基的促生长问题，那么任何不符合要求的批次均不能问题，那么任何不符合要求的批次均不能使用。

使用。

一些用于进一步鉴定微生物的诊断试剂，一些用于进一步鉴定微生物的诊断试剂，如革兰染色、氧化酶试验试剂等。

它们与如革兰染色、氧化酶试验试剂等。

它们与培养基相似点可能是质量控制试验。

在试培养基相似点可能是质量控制试验。

在试剂用于未知样品鉴定前，选择正确的标准剂用于未知样品鉴定前，选择正确的标准质控菌，按使用说明上的要求进行质控试质控菌，按使用说明上的要求进行质控试验。

验。

用于环境监控的培养基应特别小心防护。

用于环境监控的培养基应特别小心防护。

1、测定、测定PH值值2、一般性状、一般性状制成平板或分装于试管的培养基应检查制成平板或分装于试管的培养基应检查固体培养基固体培养基液体培养基其他其他3、培养基的促生长和抑制性能试验、培养基的促生长和抑制性能试验无菌检查用培养基无菌检查用培养基适用性试验适用性试验无菌性检查和灵敏度检查无菌性检查和灵敏度检查灵敏度检查灵敏度检查参照参照2010年版年版中国药典中国药典中培养基灵中培养基灵敏度检查试验敏度检查试验微生物限度检查微生物限度检查（计数培养基计数培养基）培养基的适用性检查培养基的适用性检查促生长、抑制及指示能力检查促生长、抑制及指示能力检查菌种菌种大肠埃希菌大肠埃希菌CMCC（B）26003金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501白色念珠球菌白色念珠球菌CMCC（B）98001黑曲霉黑曲霉CMCC（F）98003菌悬液制备后在室温下放置应在菌悬液制备后在室温下放置应在2小时小时内使用，若保存在内使用，若保存在28可以在可以在24小时小时内使用。

黑曲霉孢子悬液可保存在内使用。

黑曲霉孢子悬液可保存在28，在验证过的贮存期内使用。

，在验证过的贮存期内使用。

结果判定结果判定被检培养基上的菌落平均数不得小于被检培养基上的菌落平均数不得小于对照培养基菌落平均数的对照培养基菌落平均数的70%，且菌，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致。

判该培养基的适用性检查符合规一致。

判该培养基的适用性检查符合规定。

定。

控制菌检查用培养基的适用性检查控制菌检查用培养基的适用性检查控制菌检查用培养基的促生长、抑制及指示能力检查控制菌检查用培养基的促生长、抑制及指示能力检查控制菌检查控制菌检查培养基培养基特性特性试验菌株试验菌株大肠埃希菌大肠埃希菌胆盐乳糖胆盐乳糖促生长能力促生长能力大肠埃希菌大肠埃希菌抑制能力抑制能力金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌MUG促生长能力促生长能力+指示能力指示能力大肠埃希菌大肠埃希菌曙红亚甲蓝曙红亚甲蓝或麦康凯或麦康凯促生长能力促生长能力+指示能力指示能力大肠埃希菌大肠埃希菌大肠菌群大肠菌群乳糖胆盐乳糖胆盐促生长能力促生长能力大肠埃希菌大肠埃希菌抑制能力抑制能力金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌乳糖发酵乳糖发酵促生长能力促生长能力+指示能力指示能力大肠埃希菌大肠埃希菌曙红亚甲蓝曙红亚甲蓝或麦康凯或麦康凯促生长能力促生长能力+指示能力指示能力大肠大肠埃希菌埃希菌沙门菌沙门菌营养肉汤营养肉汤促生长能力促生长能力乙型付伤寒沙门菌乙型付伤寒沙门菌四硫磺酸钠亮绿四硫磺酸钠亮绿促生长能力促生长能力乙型付伤寒沙门菌乙型付伤寒沙门菌抑制能力抑制能力金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌胆盐硫乳琼脂或沙门、胆盐硫乳琼脂或沙门、志贺氏属琼脂培养基志贺氏属琼脂培养基促生长能力促生长能力+指示能力指示能力乙型付伤寒沙门菌乙型付伤寒沙门菌曙红亚甲蓝琼脂曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂或麦康凯琼脂培养基培养基促生长能力促生长能力+指示能力指示能力乙型付伤寒沙门菌乙型付伤寒沙门菌三糖铁琼脂三糖铁琼脂培养基培养基指示能力指示能力乙型付伤寒沙门菌乙型付伤寒沙门菌铜绿假单铜绿假单胆盐乳糖胆盐乳糖促生长能力促生长能力铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌胞菌胞菌抑制能力抑制能力金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌溴化十六烷基三溴化十六烷基三促生长能力促生长能力铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌甲铵琼脂甲铵琼脂抑制能力抑制能力大肠埃希菌大肠埃希菌绿脓菌素测定绿脓菌素测定用培养基用培养基促生长能力促生长能力+指示能力指示能力铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌金黄色葡金黄色葡亚碲酸盐肉汤亚碲酸盐肉汤促生长能力促生长能力金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌萄球菌萄球菌抑制能力抑制能力大肠埃希菌大肠埃希菌卵黄氯化钠琼脂促生长能力卵黄氯化钠琼脂促生长能力+指示能力指示能力金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌或甘露醇盐琼脂或甘露醇盐琼脂抑制能力抑制能力大肠埃希菌大肠埃希菌梭菌梭菌梭菌增菌培养基梭菌增菌培养基促生长能力促生长能力生孢梭菌生孢梭菌哥伦比亚琼脂哥伦比亚琼脂