黄芩苷的提取和分离纯化Word文档下载推荐.docx

黄芩苷的提取和分离纯化Word文档下载推荐.docx

《黄芩苷的提取和分离纯化Word文档下载推荐.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《黄芩苷的提取和分离纯化Word文档下载推荐.docx（7页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

的脂溶性，所以在提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液作为提取液。

黄苓苷为葡萄糖醛酸苷,具有弱酸性，其可在碱性溶液中溶解，形成钠盐，在提取液中加酸酸化，使黄苓苷游离析出。

利用黄苓苷能溶于碱，不溶于酸的性质使之与酸性杂质分

离，进行精制。

本实验选用了60%乙醇回流提取，酸沉、碱溶、酸沉的方法进行精制，并对精制品进行了简单的定性鉴别，没有对照品，所以没做定量实验。

三、实验材料与仪器

材料：

黄芩干燥根，硅胶G薄层层析板

仪器：

UV2550紫外可见分光光度计（日本岛津），Spectrum100傅立叶红外光谱仪，旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），LXJ-H离心沉淀机（上海医用分析仪器厂），200g摇摆式高速中药粉碎机，电子天平，循环水式真空泵，抽滤装置，圆底烧瓶

（500ml），水浴锅，冷凝管，索氏提取器，层析缸

试剂：

2mol/L盐酸，60%乙醇，10%氢氧化钠，乙酸乙酯，甲醇，甲酸

四、实验步骤

1黄芩苷的提取

将黄苓干燥根粉碎，称取粗粉100g，装入1L的圆底烧瓶，加入4倍量即400ml的60%乙醇，搅拌均匀，90C回流提取1h。

提取完进行抽滤，将滤渣倒入圆底烧瓶中，加300ml60%乙醇继续回流30min，重复上一步再回流30min。

合并3次滤液，65C减压浓缩至无醇味，将水液水浴加热到80C,用2mol/L的盐酸调PH至1~2,保温30min，室温静置12h,沉淀，2000r/min离心2min，弃上清，向沉淀中加10倍水量即

700ml，搅拌均匀，加10%氢氧化钠调PH至7，静置1h，2000r/min离心2min,弃沉淀，将上清液加热至40C,搅拌均匀，加入等体积即700ml的60%乙醇，静置1h，2000r/min离心2min，弃沉淀，将上清液水浴加热至80C，用2mol/L

的盐酸调PH至1~2,保温30min，室温静置1h，沉淀，离心，弃上清液，得粗黄芩苷湿重43g。

2黄芩苷的精制

向粗黄苓苷中加入7倍水量即300ml，水浴加热至70C,10%氢氧化钠调PH至7，完全溶解后，用2mol/L的盐酸调PH至6，加乙醇至含醇量70%，未出现明显沉淀，所以没过滤，用2mol/L的盐酸调PH至1~2,70C保温20min，静置过夜。

次日，沉淀很少，又80C保温30min，离心，弃上

清，得精制品，向圆底烧瓶中加入约60倍量甲醇，将精制品装入索氏提取器的滤纸中，加热回流至提取液颜色很浅，趁热抽滤，滤液减压浓缩一半，冷却，静置，结晶析出，静置30min，过滤，甲醇洗涤，得黄苓苷再精制品。

用40倍量甲醇加热回流溶解，重复上述步骤可得黄苓苷重结晶。

3黄苓苷的薄层层析

吸附剂：

硅胶G薄层层析板，厚0.25~0.3mm展开剂：

乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（7：

2：

0.5：

0.5v/v/v）样品配成合适浓度的甲醇液，用点样毛细管点样，每点一次要等到干了才能点下次，点样斑点直径不大于2mm。

层析缸用展开剂饱和20min后，将点样板垂直放入层析缸，上行展开，展层完毕后，取出，晾干，放在254nm紫外灯下观察。

4黄芩苷的紫外吸收图谱

取少量黄芩苷重结晶样品于50ml容量瓶中，加甲醇溶解至颜色微黄，用紫外分光光度计在200-400nm进行紫外扫描。

5黄芩苷的红外吸收图谱

精确称取0.100g的溴化钾，压片测红外作为背景，再精确称取0.100g的溴化钾，加入极少量样品一起研成细粉，压片，测红外吸收图谱。

五、实验结果

1黄芩苷得率（％）=M／M0x100％

式中：

M一所得黄芩苷精品重量M0一提取时用黄芩的重量

本实验中M为0.132g,Mo为100g，所以收率为0.132%。

2薄层层析

3紫外光谱

由下图可知在200-400nm内最大吸收波长为278nm，与文献中（上图）的标准品的最大吸收波长一致。

4红外光谱

黄苓苷红外图谱

3339cm-1，宽峰：

-OH伸缩振动

3030cm-1左右：

苯环=CH伸缩振动

2900cm-1:

C-H伸缩振动

1611、1575、1478、1450cm-1:

苯环骨架振动

1736cm-1：

C=O伸缩振动（葡萄糖醛酸）

1667cm-1：

C=O伸缩振动（吡喃酮环）

1363cm-1：

C-O伸缩振动

1078cm-1:

C-O-C的对称和不对称伸缩振动

900~690cm-1多个吸收峰：

苯环取代

六、讨论

1由薄层板上的斑点可以看出虽然得到了一个比较明显的斑点，结合紫外图谱应该是黄芩苷，但是斑点上方有小淡斑存在，证明得到的结晶不是很纯。

2红外图谱与文献中标准品的图谱大部分吻合，不一致的原因可能是：

黄芩产地不一样；

本实验中得到的黄芩苷纯度不高。

3本实验中产率不高，原因可能有：

粗粉未浸泡；

静置时间短；

调PH时温度控制不好。

4黄芩苷在一定温度和湿度下能酶水解成黄芩素及葡萄糖醛酸。

黄芩素分子中具有临三酚羟基，性质不稳定，在空气中易氧化成醌式结构显绿色。

所以在储藏及提取过程中应注意防止黄芩苷的酶解、氧化，以减少有效成分的破坏。

5在用酸、碱进行提取纯化黄酮类化合物时，应当注意温度和碱度都不宜过高，以免破坏黄酮类化合物的母核。

酸化时，酸度也不宜过高，否则酸会与黄酮类化合物生成盐而溶解。

6黄芩苷在黄芩中以羧酸盐存在,可以被溶剂溶出,传统的

提取方法以水做提取溶剂,但是黄芩苷只能微溶于热水,而且,在水煎煮的过程中,引入了大量的水溶性杂质。

黄芩苷为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮化合物,具有一定的脂溶性所以在提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液作为提取液,不仅大大增加它的溶出率,并且可以抑制象鞣质、蛋白、粘液等高分子杂质的溶出,便于过滤纯化。

文献指出中等浓度（50%〜70%）的乙醇水溶液其极性与黄苓苷的极性相近,

便于其溶出,而低浓度（40%及以下）的乙醇极性较大,杂质的溶出量大大增加,高浓度（90%及以上）的乙醇溶液极性较小,主要用于药材中的挥发油、叶绿素、树脂等的溶出。

因此,本实验采用了60%的乙醇溶液作为提取溶剂。