探究培养液中酵母菌种群数量的变化Word文档下载推荐.docx
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血细胞计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。
玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面,刻有一个方格网。
方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室其中共有400个小格，供微生物计数用。
这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3。
血细胞计数板的使用
以计数酵母菌为例
（1）样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.
（2）将血细胞计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.
（3）将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血细胞计数室内.
（4）计数；
五点取样法
3.计算公式酵母细胞数/ml=每个小格酵母菌数目×
400×
104×
稀释倍数
注释：
培养的时间不同取样酵母菌的稀释倍数是不同的。
2．方法步骤：
提出问题→作出假设→讨论探究思路→制定计划→实施计划→按计划中确定的工作流程认真操作，做好实验记录→分析结果，得出结论→将记录的数据用曲线图表示出来。
（一）提出问题：
酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？
温度会影响酵母菌的生长吗？
养分会影响酵母菌的生长吗？
（二）设计实验：
将24支试管分成ABC三组，每组8支。
A组为实验组，装培养液10mL，酵母菌母液0.1mL,环境温度28℃。
B组装培养液10mL，酵母菌母液0.1mL,环境温度5℃，与A组形成温度条件对照。
C组不装培养液，只装无菌水10mL,酵母菌母液0.1mL,环境温度28℃，与A组形成营养条件对照。
（三）实验操作：
1．配制无菌马铃薯培养液和酵母菌母液；
2．预先设计分装。
先每次用10mL刻度吸管吸取10mL培养液到A组和B组试管，用另一支10mL刻度吸管吸取10mL无菌水到C组试管。
待分装完毕，每支试管加塞后把试管扎成捆后，然后用记号笔注明培养基的名称、组别、日期。
3．用高压蒸汽灭菌锅灭菌；
（无菌条件避免其他菌）
4．接种菌种：
用灭菌干净的1mL刻度吸管每次吸取0.1mL酵母菌母液，往每支试管中加入。
（注意滴加量不要太多，避免初始菌数过多。
）
5．培养：
将A、C试管置于28℃的恒温箱中培养。
将B试管置于5℃的恒温箱中培养。
（5℃的恒温箱可由某些型号冰箱保温室设定5℃时代替。
6．计数和记录：
本实验为7天，每天取样时间大体一致，每次每组按序号取一支试管。
计数过程中一定要遵守无菌操作规范，取样的吸管要干净且分开使用，每次取样前要试管振荡摇匀。
显微镜下进行细胞计数，后立即将数据填到记录表格中。
思考题1：
如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当采取怎样的措施？
3.分析结果，得出结论；
将记录的数据用曲线图表示出来。
参考1：
一次实验数据记录表
次数
1
2
3
4
5
6
7
8
时间/h
24
48
72
96
120
144
168
酵母菌数
（106.mL-1）
A
0.8
5.2
5.6
4.8
0.4
0.08
B
1.2
2.8
3.2
3.6
C
0.1
参考2：
出A、B、C各个处理的曲线图
显微镜直接计数法:
1.为何用血细胞计数板可计得样品总菌值？
叙述其实用范畴。
a计数室体积必定；
b在显微镜下，不经染色不能辨别菌体的逝世活，使计数所得的数目为一定体积内的总菌数，从而计得样品中总菌值。
实用范畴：
可单细胞存在的细菌酵母菌或显丝状生长的真菌，放线菌所生的包子等。
2.为什么计数室内不能有气泡？
试剖析产赌气泡的可能原因。
a气泡会盘踞计数室的空间，导致计数室中的菌体个数计数偏小，最后导致计数成果偏小。
b计数室内的气泡，可影响菌液的随机散布，使计数发生误差。
产生气泡原因：
a操作不当，先放菌液再盖盖玻片；
b计数室洗涤不清洁；
c盖玻片移动，造成空气进入而产生气泡。
3.试剖析影响本实验结果的误差起源及提出改进办法？
1、仪器误差：
所用器材均应干净清洁，并且计数板计数区不应当有擦痕。
2、计数室内可能有气泡。
由于酵母细胞并没有染色，看起来是透明的，有气泡很轻易被计进，使数值偏高；
并且，气泡会影响菌悬液的随机散布。
改良：
若产赌气泡，则用吸水纸吸出。
3、菌体在计数板上散布不均，当用选取5格计数时，会造成很大误差。
改良：
应使菌液自然流入并混匀，进行察看时尽可能多数几个格子。
4、配制稀释液时汲取的浓渡过高或过低，导致稀释液浓度和原液不成准确比例，盘算时发生误差。
应将原液摇摆均匀后取中部的液体进行稀释。
5、由于数菌体数目时视觉疲劳而导致的视觉误差。
应多人察看，取记载均匀数。
6、计数时可能将格四周的菌都盘算在内了，使数值偏高。
谨遵一个规矩，计上不计下，计左不计右，不可以反复计数。
7、可能呈现有出芽的酵母菌，将出芽的酵母菌按两个计数了，使数值偏高。
改进：
计数时，只有当芽体于母细胞一样大的时候，才干计为两个。
8、微量移液器的最小量程太大，在加样时，轻易加多，使盖玻片鼓起，血球计数板所技巧的体积变大，终极结果偏大。
用量程的小的微量移液器并少加一些。
计数时有哪些注意事项？
①从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几次；
如果酵母菌浓度过大，应先稀释。
②对于压在中格界线上的酵母菌，一般只取相邻两边及夹角计数；
③对于已经出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算；
已死亡的酵母菌不计数。
④每个样品一般计数三次，取其平均值。
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