免疫标准操作程序SOP文档格式.docx
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文件编号
CHDEYY-JYK-MY-001
文件版本号
第1版
医务科保管者
院长办公室保管者
院档案室保管者
检验科主任
实验室名称
项目
编号
制定日期
芜湖市第二人民医院检验科免疫室
WHDRYY-JYK-MY-001
共2页第1页
2005-01-01
[目的]
保证检测结果准确可靠。
[该SOP变动程序]
本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经专业主管、科主任
批准签字。
[标本的采取和保存]
采静脉血2ml,分离血清备用。
也可以使用血浆标本进行检测。
标本宜新鲜,无污染,避免溶血,避免反复冻融,不可用NaN3防腐。
[测定原理]
采用兔抗-人IgMu链包被反应被,加入待测标本,同时加入HAVAg,抗HAV-HRP,如待测标本中含有抗-HAV-IgM时,就能与包被兔抗-人IgMu链结合,并且与HAVAg,抗-HAV-HRP结合成复合物,加TMB底物产生显色反应,反之则无显色反应。
[操作步骤]
1.将待测标本用生理盐水作(1:
1000)稀释,每孔加入稀释标本100ul,设阴、阳性对照各2空,每孔加入阴性对照(或阳性对照)100ul(或2滴),并设空白对照一孔,封板,置37度孵育20分钟。
2.洗板机洗板:
选择洗涤5次程序洗板后拍干。
手工洗板:
弃去孔内液体,洗涤液注满各空,静置5秒,甩干,重复三次后拍干。
3.每孔加入HAVAg30ul(或一滴),酶结合物50ul(或一滴),(空白对照孔不加),充分混匀,封板,置37度孵育20分钟。
4.洗板机洗板:
5.每孔加显色剂A液、B液各50ul(或一滴),充分混匀,封板,置37度孵育10分钟。
6.每孔加入终止液50ul(或一滴),混匀。
7.用酶标仪读数,取波长450nm(建议使用双波长的酶标仪比色,参考波长630nm),先用空白孔校零,然后读取各孔OD值。
[结果判断]
样品OD值除以阴性对照平均OD值大于或等于2.1判断为阳性,否则为阴性
阴性对照OD值低于0.05作0.05计算,高于0.05按实际OD值计算
[临床意义]
血清中HAV—IgM在亚临床期即已出现,其滴度在感染后3个月维持在1000以上,早被公认为早期诊断甲型肝炎的依据。
[注意事项]
1.试剂使用前应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加,注意均匀用力。
2.从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试,余者应及时封存,置冰箱内储藏备用。
3.洗板时所用的洗水纸请勿反复。
4.不同批号试剂请勿通用。
5.结果判断须在10分钟内完成。
WHDEYY-JYK-MY-001
共2页第2页
6.封片不能重复使用。
7.用本试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程操作。
乙肝表面抗原检测的标准操作程序
WHDEYY-JYK-MY-002
本标准操作程序的变动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:
专业主管、科主任。
随机静脉血2ml,分离血清备用。
双抗体夹心法测HBsAg:
抗S包被反应板,加入待测血清后,再加入酶标抗S,加底物显色为阳性,证明样本中含被测物,含量与显色程度成正比。
1.实验准备:
从冷藏环境中取出试剂盒,在室温下平衡30分钟,同时将浓缩洗涤液作1:
20稀释。
2.加待测标本:
加入待测标本每孔0.05毫升,并设阳性对照2孔,阴性对照2孔,空白对照1孔。
3.加酶结合物:
每孔0.05毫升,空白对照孔不加,充分混匀,置37℃孵育30分钟。
4.洗板:
1)手工洗板:
弃去反应板条孔内液体拍干;
用洗涤液注满每孔,静置5~10秒,弃去孔内洗涤液拍干,如此反复5次,拍干。
2)洗板机洗板:
选择洗涤5次的程序洗板,最后拍干。
5.加显色剂:
先加显色剂A,每孔0.05毫升;
再加显色剂B,每孔0.05毫升;
充分混匀,放置37℃避光孵育15分钟。
6.终止反应:
每孔加入终止液0.05毫升,混匀。
7.测定:
用酶标仪读数,可选择波长450nm(以空白孔校零)或双波长450/630nm,读取各孔OD值。
Cutoff值计算:
COV=阴性对照平均OD值*2.1
标本OD值大于COV为阳性,标本OD值小于COV为阴性
注:
阴性对照OD值低于0.05按0.05计算,高于0.05按实际OD值计算。
HbsAg在感染早期出现于患者血循环中,可持续数月,数年乃至终生,是诊断HBV感染最常用的指标。
但所谓HBV感染的“窗口期”,HbsAg可以阴性,而抗HBc等其他HBV血清标志物则可阳性。
1试剂使用前应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加,注意均匀用力。
2从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试,余者应及时封存,置冰箱内储藏备用。
3洗板时所用的洗水纸请勿反复。
4不同批号试剂请勿通用。
5结果判断须在10分钟内完成。
6封片不能重复使用。
7用本试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程操作。
乙肝表面抗体检测的标准操作程序
WHDEYY-JYK-MY-003
双抗原夹心一步法测HbsAb:
S抗原反应包被板,加入待测血清后,再加入酶标抗S,加底物显色为阳性,证明样品中含被测物,含量与显色程度成正比。
a)手工洗板:
b)洗板机洗板:
抗—HBs为HBV的中和抗体,有清除HBV,防止在感染的作用,抗—HBs一般出现于乙肝患者恢复期,提示感染已终止。
此外,注射过乙肝疫苗的人,抗—HBs阳性。
乙肝E抗原检测的标准操作程序
WHDEYY-JYK-MY-004
双抗体夹心法测HbeAg:
抗e包被反应板,加入待测血清后,再加入酶标抗e,加底物显色为阳性,证明样本中含被测物,含量与显色程度成正比。
每孔0.05毫升空白对照孔不加,充分混匀,置37℃孵育30分钟。
HBeAg是HBV的核心部分,故一般认为HBeAg阳性是具有传染性的标志,在乙肝潜伏期乃至整个病程中,HBeAg均可检出。
抗HBe是HBeAg的相应抗体。
一般认为HbeAg消失和抗HBe出现是病情趋向好转的征象。
但并不意味着HBVDNA停止复制,或传染性消失。
1.试剂使用前应摇匀,并弃去1~2滴后垂直滴加,注意均匀用力。
2.从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30分钟再进行测试,余者应及时封存,置冰箱内储藏备用。
3.洗板时所用的洗水纸请勿反复。
4.不同批号试剂请勿通用。
5.结果判断须在10分钟内完成。
6.封片不能重复使用。
7.用本试剂盒应视为有传染性物质,请按传染病实验室检查规程操作。
乙肝E抗体检测的标准操作程序
WHDEYY-JYK-MY-005
芜湖市第一人民医院检验科免疫室
WDYYY-JYK-MY-005
竞争抑制一步法测HBeAb:
抗e包被反应板,加入待测血清后,加入中和e抗原,再加入酶标抗e,加底物不显色的为阳性,证明样本含被测物,含量与显色程度成反比。
1.验准备:
3.加中和试剂:
每孔0.05毫升,空白对照孔不加。
4.加酶结合物:
5.洗板:
6.加显色剂:
7.终止反应:
8.测定:
COV=阴性对照平均OD值*0.3
标本OD值大于或等于COV为阴性,标本OD值小于COV为阳性
非原倍血清样品(稀释血清、质控血清)COV=阴性对照*0.5
乙肝核心抗体检测的标准操作程序
WHDEYY-JYK-MY-006
芜市第二民医院检验科免疫室
竞争抑制一步法测HBcAb:
抗c包被反应板,加入待测血清后,加入中和c抗原,再加入酶标抗抗c,加底物不显色的为阳性,证明样本含被测物,含量与显色程度成反比。
1)1:
30稀释血清(血浆)检测结果代表临床意义,待检标本可用稀释后的洗涤液加以稀释2)原倍血清(血浆)检测结果代表流行病学意义。
3.酶结合物:
每孔0.05毫升(抗—HBc1:
30稀释血清代表临床意义,可用稀释后的洗涤液加以稀释;
原倍血清代表流行病学意义),空白对照孔不加,充分混匀,置37℃孵育30分钟。
原倍血清COV=阴性对照平均OD值*0.3
1:
30稀释血清COV=阴性对照平均OD值*0.5
标本OD值大于或等于COV为阴性,标本OD值小于COV为阳性。
抗HBc是HBeAg的相应抗体,也是HBV感染后血清中最早出现的HBV的标志性抗体。
持续时间长,甚至终生存在。
几乎所有个体在感染HBV后都能产生抗HBc,故它是乙肝流行病学调查的良好指标。
在HBV感染的“窗口期”抗HBc常是唯一可测出的HBV血清标志物。
乙肝病毒Pre-S1抗原检测的标准操作程序
WHDEYY-JYK-MY-007
乙肝病毒Pre-S1抗原检测的标准操作程序
共1页第1页
用乙肝病毒PreS1蛋白抗体和抗HBS分别用作酶标记抗体和包被抗体。
采用ELISA双抗体夹心一步法检测标本中的乙肝病毒PreS1蛋白。
1.将包被条固定于支架并编上序号。
2.设阳性对照2孔,每孔加入阳性对照50微升,阴性对照2孔,每孔加入阴性对照50微升,空白对照一孔,加入生理盐水100微升。
然后,依次在反应孔内加入