小儿支气管哮喘病应用康敏元抗过敏益生菌免疫治疗的理论依据Word下载.docx
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儿童支气管哮喘过敏的益生菌抗过敏免疫治疗
支气官哮喘过敏性疾病，主要是免疫功能不正常。
糖皮质激素会使免疫功能不正常，只是在抢救时才可以用。
不是抢救时是不要用的，因为会使免疫功能不正常。
其实正确治疗是不要用糖皮质激素，要用改善、恢复、维持免疫功能，是可以根治的。
但是如您这样已经糖皮质激素依赖，不能猛停糖皮质激素。
猛停糖皮质激素会产生反跳，即病情加重。
要先同时加用改善免疫功能的药，必要时再加用临时有效非激素类抗过敏药，以求慢慢减、停糖皮质激素。
康敏元抗过敏益生菌唾液乳杆菌（医院原文版）的临床与验证：
本发明涉及新的抗过敏乳酸菌菌株，及含一种或多种所述菌株的组合物（康敏元益生菌）专利中所包含的抗过敏益生菌菌种：
LS唾液乳杆菌PM-A0006、Lg格氏乳杆菌PM-A0005、Lj约氏乳杆菌PM-A0009、LP副干酪乳杆菌以及罗伊氏乳杆菌。
其中所述菌株具有现有技术中未知的可用于增进抗过敏的能力，以及通过增进TH1型免疫反应来调控因过敏而反应过度的TH2型免疫反应的方法。
抗过敏益生菌格氏乳杆菌（L.gasseriA5）对于气喘合并过敏性鼻炎儿童的影响（康敏元益生菌）
RandomizedPlacebo-ControlledTrialofLactobacillus
onAsthmaticChildrenWithAllergicRhinits.
出处：
PediatricPulmonology；
2010
摘要：
回顾过去的文献指出，食用益生菌可以有效的治疗或改善婴幼儿过敏性皮肤炎的情形，但是益生菌在过敏性呼吸道疾病的角色依然有争议性。
为了确认其功效，本试验选择同时患有气喘及过敏性鼻炎的学童为对象，每天补充益生菌L.gasseriA5持续八周，来探讨是否具有改善临床症状及调节免疫的功能。
针对6-12岁患有气喘及过敏性鼻炎的学龄儿童，随机双盲试验分为两组，补充益生菌L.gasseriA5组（49人）与安慰剂组（51人），试验期两个月。
试验期间由医师诊断评估肺部功能，以及气喘与过敏性鼻炎的改善情形，严重者在试验期间加入服用药物。
每日评估受试者早、晚纪录：
测量尖峰呼气流速、气喘与过敏性鼻炎发生次数。
在免疫评估方面，则分析患者食用益生菌前与后之总量IgE的浓度与PBMC细胞分泌各类细胞激素的量。
试验结果显示，相较于安慰剂组，食用益生菌组患者其肺部功能与尖峰呼气流速（PEFR）都有显着的提升，以及气喘与过敏性鼻炎等临床症状都有降低的情形。
结论：
补充益生菌L.gasseriA5，对于患有呼吸道过敏性疾病（如气喘或过敏性鼻炎）的学童，具有临床改善的效果。
关键词：
益生菌；
临床试验；
过敏性鼻炎；
哮喘
前言
过敏性疾病，如过敏性湿疹，荨麻疹，常年性过敏性鼻炎（AR），成为在发展中国家以及以开发国家最常见过敏性疾病。
其中一个解释为这些疾病的发生率增加在于良好被称为“卫生假说＂，它假设，在过敏性疾病的增加反映了在儿童时期感染减少。
益生菌是活的生物体，能预防以及治疗过敏性疾病，主要是靠通过以及平衡肠道的生态系统。
婴儿肠道菌群的不同取决于之后过敏性疾病的发展，服用益生菌对婴儿无危险性已经证明，并能预防过敏性湿疹。
临床试验还表明，暴露于微生物通过胃肠道有利免疫功能。
特别乳酸菌被认为是诱发Th1细胞反应和改善过敏性疾病。
口服热处理L.casei被发现能抑制小鼠血清中IgE的产生。
此外，热处理L.plantarumL-137腹腔注射对热蛋白过敏的小鼠，可以抑制IgE产生。
口服裂解EnterococcusfaecalisFK-23，能减少由花粉引起的是酸性球数量。
在人类中，口服抗过敏乳酸菌菌种组合物康敏元益生菌降低了儿童异位性湿疹的危险。
因此，补充益生菌对于胃肠功能紊乱或相关过敏疾病，如：
过敏性湿疹与食物过敏的影响是相当可观的。
相比之下，只有少数的研究探讨了影响益生菌对过敏性呼吸道疾病，如鼻黏膜炎和哮喘。
但它已被证明L.paracasei可以提高青少年的生活质量与减低常年性鼻炎（AR）。
研究了长期饮用益生菌的乳酸菌奶，并建议可能是有益的呼吸道。
另一项最新报告指出，益生菌补充剂可以保护婴儿接受育儿对发作的腹泻疾病和发烧，但不是针对呼吸系统疾病。
由于只有少数临床试验，信息不足是现有的关于意义乳酸菌在过敏性疾病，特别是在呼吸道过敏。
因此，我们进行这项随机，双盲，安慰剂对照的临床试验，以探讨L.gasseriPM-A0005（台湾，南部科学园区，东宇生物科技股份有限公司提供，由宁波绿康公司成功引进，名为康敏元益生菌）的补充对患有哮喘及过敏性鼻炎的学童的临床症状和免疫学上的影响。
材料与方法
受试条件
这项研究的受试者是患有哮喘至少持续一年有轻度或重度病史的儿童（年龄6~12岁）并伴随有过敏性鼻炎的症状。
所有的受试者吉他们的监护人均详细研读本研究的相关资料，并签署受试者同意书，并确实回答相关的问卷，以调查哮喘及过敏性鼻炎的病史。
本研究乃由台湾国立成功大学附设医院人体试验委员会同意。
而哮喘诊断的标准是基于过去六个月的病例，或经由支气管扩张试验，1秒中增加12%FEV1，呈阳性反应。
过敏性鼻炎的诊断依据为六个征兆或症状（咽痒，打喷嚏，流鼻涕，鼻痒和眼睛，鼻腔阻塞）存在一个或多个为期4天以上。
患者曾接受口服或是皮下注射类固醇连续超过15天，吸入性皮质类固醇剂量超过每天1000μg，或是β2-agonists每天些受超过四次，或是唤友其它呼吸道系统疾病、心血管疾病，或是先天遗传疾病等贝蟹为试验排除的条件。
试验设计
本试验在国立成功大学附设医院儿科部进行双盲，随机，对照安慰剂的方式进行哮喘及过敏的研究，研究时间自2006年10月至2007年3月。
参与者首先评估了2周（基线，v0），再进行了评估，以确定其资格。
此外，受试者每日对症状进行纪录，并每日两次测定极端呼吸峰值（PEFR），之后书面通知受试者及监护人开始启动试验（图1）。
在此期间，对受试者进行过敏症状全面评估，包含皮肤试验最常见的8种过敏原，计算其血液中嗜酸性球、总IgE。
皮肤测试为阳性被定义为在场的≥1阳性反应的一个风雨同舟直径≥5毫米。
血清总IgE水平是侦测采用固相免疫分析法。
而所有120名患者中，屋尘螨（87例，72.5％、粉尘螨（81例，67.5％、蟑螂（46例，38.3％）、狗（27例，22.5％），真菌溷合物（38例，占31.6％），花粉溷合组（n=18，15.0％），虾（24例，20.0％），牛奶（8例）。
所有符合条件的患者随机分配到控制组及益生菌治疗的对照组（图1）。
对照组每日服用含有L.gasseriPM-A0005（2X109cells/capsule）两次；
而控制组的胶囊则是内含奶粉的安慰剂，服用剂量也是一天两次，两组皆连续服用八周。
Fig.1.此研究方式为益生菌临床测试。
A：
为实验组织图、B：
为实验流程图。
临床测试时间为2006年10月~2007年3月结束。
乳酸杆菌及安慰剂胶囊的制备
抗过敏乳酸菌康敏元所含L.gasseriA5是由台湾东宇生物科技股份有限公司自健康人类肠道中分离出来，并高密度培养后，冻干做成菌粉，于4℃组藏。
此菌能在常温下存放三个月，不会影响菌种活性，并经由生物技术中心进行过急性经口毒性试验研究，小鼠最高剂量为5000毫克/公斤，经口服14天，无任何副作用。
评估
参与试验的医生从试验开始的2个星期的间隔期（V1-V3）到8周的干预期（V4）及第10周（V5）的最后评估期全程参与。
此期间医生负责进行患者临床症状的评估，血液的采集以及益生菌的投予；
病患则纪录症状的评分以及药物。
使用儿童哮喘控制测试（CACT作业者集团）的中文版进行了评估，每个研究项目。
日纪录卡
患者的父母提供了日记卡，他们被要求记录哮喘分数，药物消费，PEFR在整个研究治疗期间。
的日间和夜间哮喘症状记录在4个等级（0=没有症状，1=轻度症状，2=中度症状，3=严重症状）。
日夜间的分数总和为哮喘总分。
在评估过程中，整个研究期间所有患者均接受同样的控制者，根据个人哮喘的症状，如果需要的话使用药物：
吸入β2-agonists，以及口服皮质类固醇（5毫克）所有药物的施用均被确实记录。
每天的PEFR测定，在白天和晚上，每一次测量三次，取最好的的一次是用在后续计算。
肺功能试验
医生测量FVC、FEV1，用力呼气容积在肺活量范围25-75％（FEF25-75），在V0、V3、V5期间进行PEFR的评估。
检测细胞激素的变化量
在将病患随机分配之前，先收集外围血液单核细胞（PBMC），在浓度为1×
106细胞/毫升；
之后分配到服用益生菌的对照组再收集一次（n=41）。
与植物血凝素（PHA;
10微克/毫升），屋尘螨（尘蹒，1微克/毫升），或尘蹒（1微克/毫升）培养，再与L.gasseriA5（细菌/细胞比例，1:
1）共培养72小时，使用酵素免疫吸附试验（ELISA）来分析TNF-、IFN-、IL-10、IL-12p40和IL-13这些细胞激素。
统计分析
使用双因子变异数分析方法来分析两组内的固定因素。
成对样本T检定来分析每个分析条件基准间的变化，以P值小于0.05判定为有显着差异。
科克伦-曼特尔-Haenszel法统计分类变量是用来比较两组间的差异。
结果：
研究范围
从120例儿科门诊的患者中选出105位，并随机分成接受益生菌（49人）及安慰剂（56人）治疗的两个组别。
图1B显示整个试验的流程。
表1则是受试者收桉的标准。
两组个组别在统计学，临床和功能变量上均无显着的差异。
此外，哮喘和AR的严重程度上，两组也无差异。
血清总IgE，各种过敏原的敏感性，PEFR，肺功能测试结果是两群体之间评估的基准；
儿童哮喘控制测试（CACT）前先进行超过四周的哮喘控制，两组之间并没有显着不同。
两组患中度持续性哮喘的受试者中，过敏性鼻炎的患者占多数。
有6例病患有一个或多个试验控制的偏差，治疗方法上则无差异。
所有可用的数据都计算在内。
肺功能的变化
表2显示了在在每个临床病人访问中进行肺活量、肺功能参数变化的检测。
相对于控制组的病人中，接受益生菌治疗的对照组病人，其FEV1、FVC、FEV1/FVC（%）和MEF25-75到试验后期有显着的增进。
此外，支气管扩张试验中，两组之间也有显着性的差异（p<
0.001）；
这也支持了益生菌可以减缓哮喘儿童支气管的敏感性。
PEFR的变化
在每次门诊中，病人的病例日记卡纪录日间和夜间PEFR得分以及哮喘症状。
图2显示由病患日夜间PEFR的变化临床纪录（图2A）及纪录卡评分的变异（图2B）的比较。
接受益生菌治疗的病人，其PEFR在观察期间均有显着的增加，控制组则无显着差异。
白天的观察纪录中，两组之间相比较无显着的差异；
但是晚上的纪录中，在刚开始实验的两周以及试验结束前有显着的差异。
过敏性鼻炎以及哮喘的变化
检视患有过敏性鼻炎的气喘儿童的气喘评分以及病例日记卡，我们发现控制组与对照组在白天及夜间均有稳定的改善直到试验结束。
虽然两组间在哮喘及过敏性鼻炎的改善上无显着的差异，但益生菌治疗的对照组在白天，其症状从试验开始（Vo）至结束（V4）有显着的改善；
而控制组则无。
而两组在夜间则均无显着改善上的差异（图3b）。
在哮喘控制试验中严重哮喘及过敏性鼻炎的变化情形
两位医生（J.R.L和C.S.H.）随机分配到不同的患者群，来做严重哮喘及过敏性鼻炎的评估诊断。
在图4A所显示，无论是益生菌治疗的对照组和安慰剂的控制组，均观察到严重过敏性鼻炎持续性的改善；
相同的结果也出现在严重哮喘的观察（图4B）。
在小儿气喘控制试验（CACT）的结果发现，在试验结束前对照组跟控制组的分数均有增加，但以益生菌治疗的对照组，从试验开始到试验结束，有显着性的差异（p<
0.05）。
血清中总IgE及细胞激素变化
虽然对照组与控制组病患血清中总IgE在试验结束前均侦测到有减少，两组无显着差异。
图5显示从试验初期（Ｖ０）至试验末期（Ｖ５），血液单核球（PBMC）经由ＰＨＡ或是Ｄｅｒｐ的刺激，在培养基上清液中所侦测到的发炎性的细胞激素TNF-a，以及Th2细胞激素群中的IL-10和IL-13。
我们观察到相较于控制组，服用益生菌L.gasseri连续８周的对照组，其ＴＮＦ－ａ以及ＩＬ－１３有显着的减少（p<
虽然IL-10的侦测量，控制组低于对照组，但两者在统计上无显着上的差异。
为了延续我们发现的现象，我们侦测了Ｔｈ１的细胞激素ＩＦＮ－ｒ以及ＩＬ－１２，我们发现对照组在试验末期的细胞激素浓度明显低于试验初期；
而控制组则无显着的差异。
我们也测试了其它Ｔｈ２的细胞激素，例如：
ＩＬ－４、ＩＬ－５和ＴＧＦ－Ｂ，然而产生的浓度过低而无法侦测到。
讨论
众所皆知益生菌能够平衡肠道中的微生物平衡，有利于免疫以及预防过敏性湿疹在婴儿身上发生。
然而此类微生物对于改善上呼吸道的过敏性疾病尚存许多疑点，需要更多临床试验的左证。
在本试验中，连续八周给予学童L.gasseri服用，相较于接受安慰剂的控制组学童，其对照组的学童肺功能明显改善，哮喘以及过敏性鼻炎的分数均下降。
更重要的是，由全球医生的评估认为给予病患补充乳酸菌无重大或是轻微的副作用发生。
在此之前，仅少数的临床研究过敏性鼻炎的成人和儿童口服益生菌的影响。
而我们的研究显示，益生菌的补充能改善患有呼吸道过敏疾病的儿童在白天哮喘以及呼吸道的功能。
虽然造成影响的机制尚不清楚。
但至少有三个支持益生菌况过敏的相关假说。
益生菌引起调节T淋巴细胞（Treg），例如：
Th3、Th1和自然调节性T细胞（Treg）分泌Th1佐剂，而调节改变Th2细胞激素的状态，而减少发炎反应；
益生菌也会在肠胃道的黏膜上和一些抗原呈现细胞，例如：
巨噬细胞和树状细胞（DCs），进而达到全身性免疫调节作用。
在这个试验中，我们发现益生菌治疗的前后，其血液中总IgE和过敏程度无显着的提高,而且精益生菌治疗后，Th1类细胞激素，如：
IFN-r及IL-12的浓度均未显着升高（图6）。
这些结果似乎排除了在过敏性体质的儿童身上益生菌会提升Th1细胞功能去抗衡Th2细胞。
另一方面，由诱导型T细胞而产生的IL-10，经益生菌的疗程后减少（图5）。
此外，我们还发现CD4+CD25highFoxp3+这种T淋巴细胞（natureTreg）的比例在益生菌治疗前与治疗后无显着的变化。
虽然natureTreg的功能，在经过益生菌的治疗后获得改善；
正如我们早先发表的报告，这可能是经过益生菌治疗的患者，牠们的单核球细胞（PBMC）减少了TNF-a的产生而引起的现象。
因此推论，益生菌不大可能诱发nature或inducibleTreg细胞来减缓过敏引起的呼吸道发炎症状。
虽然我们没友直接的证据证明乳酸杆菌对于人体免疫系统中的树状细胞（DCs）有调节的功能，但有许多先前的研究显示益生菌能增进人类树状细胞的活性，进而让免疫系统增加Th1的分化，但这些潜在的免疫调节机制都还未明了。
然而已有证明乳酸杆菌的细胞壁上有许多细胞表面分子以及胜醣能够激活肠道免疫细胞的分子。
例如DC-SIGN或TLRs这类的分子能让初级的树状细胞发展成熟，并且能调控Treg细胞，进而增加IL-10的产生抑制伴随者T细胞的增值。
而益生菌与数灀细胞之间的交互作用机制仍需进一步的探讨。
在本临床研究益生菌对于哮喘与过敏性鼻炎的改善有几个影响因素，在试验中，因有药物的限制因素，而影响了控制组与服用益生菌的对照组比较。
我们加入了服药纪录的评分，而在本研究中，为了防止患者的心理因素影响试验的准确性，因此控制组给予了安慰剂，此试验方式也常见于一些临床的过敏疾病研究，而我们发现两组的用药评分均下降显着，但是两组之间无显着的差异。
另外一个因素，是乳酸杆菌减少哮喘发作的长期效益。
更重要的是，益生菌用于改善过敏疾病，会受到许多不同因素的影响，有宿主本身的影响因素（个体遗传、对微生物的反应、以及过敏体质等）和环境的因素（饮食、所消费的益生菌种类等..），以及抗生素的使用。
所以我们的临床试验结果，可能会受到这些因素而影响了其应用性。
总结上述，我们发现患有呼吸道过敏疾病的学童服用L.gasseriA5连续八周，和服用安慰剂的控制组比，在呼吸到功能、临床症状、细胞激素均有显着的改善。
但如前文所述，乳酸杆菌在抗过敏的效果仍然不是很清楚，在益生菌治疗哮喘及过敏性鼻炎广泛的运用上，仍需更多更进一步的临床试验做探讨。
■Lactobacillussalivarius透过肠道黏膜，诱导免疫平衡
JApplMicrobiol.2007Feb
■Lactobacillussalivarius刺激脾脏细胞，降低发炎反应
■Lactobacillussalivarius抑制金黄葡萄球菌，能力最好
PNAS.2007MayClinNutr.2007Jun
■Lactobacillussalivarius高菌数，安全看得见
JDairySci.2007Aug
■Lactobacillussalivarius可诱发调控型T细胞活性，进而调整体质
JApplMicrobiol.2007;
102
（2）:
337-43
■Lactobacillusjohnsonii可以藉由调控前发炎细胞激素进而调整过敏反应
FEMSImmunolMedMicrobiol.2007;
50
（1）:
67-76
■Lactobacillusgasseri可减轻过敏性鼻炎的鼻塞症状
Microbiollmmunol.2007;
51（11）:
1109-14
■Lactobacillusgasseri对于气喘合并过敏性鼻炎儿童的影响
PediatricPulmonology;
抗过敏益生菌唾液乳杆菌的临床功效验证；
唾液乳杆菌L.s（PM-A0006）對異位性皮膚的改善
PaediatricDermatology2011
（北榮吳克恭醫師）
L.G對鼻炎與氣喘的改善
PediatricPulmonology2010
（成大王志堯醫師）
L.G在動物模式中調降氣喘的機制探討
JofNutrition.2012
L.S降低特異性抗體的探討
CanJMicrobiol.2010
L.S調整免疫細胞的表現
JAgricFoodChem.2007
支气管哮喘和喘息性支气管炎过敏性疾病关键病因是免疫功能不正常，恢复并维持免疫功能正常则不再犯病或达到根治。
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