生化实验室必备技能Word文档格式.docx

生化实验室必备技能Word文档格式.docx

《生化实验室必备技能Word文档格式.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生化实验室必备技能Word文档格式.docx（8页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

洗普通的玻璃仪器可以放在超声波里加上洗涤剂超半个小时，拿出来用水冲干净，然后再用蒸馏水冲洗2-3次，就可以放在烘箱里烘干了，一定要记住要用蒸馏水冲一下，否则干燥出来的瓶子会有洗衣粉的痕迹。

但用超声波洗涤玻璃器皿，时间长了会使玻璃表面受损剥落的。

5.其他

如果玻璃仪器上沾有凡士林、松香、石蜡等污物，用有机化合物如酒精、乙醚、丙酮、苯、汽油等洗涤效果较好。

以上介绍了几种洗涤方法，可根据不同的要求进行选择。

所有仪器用水冲洗干净后，均要再用去离子水或蒸馏水冲洗二三次。

洗净的仪器，应不挂水珠，将仪器倒置时，水会顺着器壁流下，器壁上只留下一层既薄又均匀的水膜。

即洗涤干净的标准为“干净、透明、不挂水珠”。

洗净后的仪器不能用纸或布擦拭，以免造成二次污染。

二、枪头及其他特殊样品的洗涤：

对于PCR以及一些分子实验或使用体积小于10l的枪头，建议一次性使用。

枪头在使用后，应在未干时马上放到水中，等待试验结束后一齐放到洗衣粉溶液中煮半小时左右，冲干净后再用自来水煮半小时。

载玻片的清洗相似于枪头清洗，只是最后要用配制好的酒精溶液擦净后才可放入酒精溶液中。

三、干燥

1.可置于干燥处或仪器架上自然晾干。

2.放入恒温箱内烘干，放入前应该将仪器内的水倒净；

对于一些热敏性的物质如塑料制品，恒温箱温度保持在60℃左右。

注：

有塞子或盖子的容器，必须拔去塞子、盖子、活塞后方可放入烘箱烘干。

拔下的塞子、盖子、活塞也不可随便摆放，应放到一处，待仪器烘干后塞子和瓶子要配套放好。

四、实验室废物的处理

酸碱溶液应该统一回收，但考虑实际情况，少量的酸碱可以再经水大量稀释后缓慢倒入下水道中。

多数缓冲液可直接倒入下水道。

对于液体培养基、细菌培养的上清的处理最好倒入厕所中，之前最好经高压灭菌处理或10％的次氯酸钠处理。

对于一些有害化学废物，如酚，EB（溴化乙啶）等也不建议清洗。

五、溶液的配制

1．熟悉整个配制程序，记录下所需要用到的试剂名称，确定好每一种试剂要配置量的多少，勿配多而造成浪费，对于一些不稳定的溶液最好现用现配。

2.安全性：

清楚所接触药品的组分及相关毒性，遵照处理物质标签上的告示操作。

工作时要佩戴合适的手套，注意自身及他人的安全。

对于一些挥发性物质应该到通风厨中操作。

3.称量药品要遵循所需药品的使用量以及试验要求的误差级别来选用哪种天平。

实验室有电子天平（精度0.1g）和电子分析天平（精度0.0001g）两种。

平常配制溶液时用电子天平即可。

4.溶剂水的选取：

对于缓冲溶液以及培养基的配置可以使用蒸馏水。

而对于一些对水有特殊要求的试验，应使用超纯水。

5.溶解溶质时，玻璃棒的要轻轻搅拌，不可用力过猛造成仪器损坏，对于一些难以溶解的试剂的配置，可以考虑采用加热或者超声的办法，但对于热敏物质除外。

6.将配制好的试剂放入洗净的试剂瓶中，试剂瓶上必须贴有标签，注明配制试剂的时间，名称，浓度。

对于一些见光易分解的溶液要置于棕色瓶中储存。

并且注意储存的时间。

生化工程研究室实验技能系列讲座

（二）主讲人：

林永贤

培养基的配制中的注意事项

培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。

正确配制培养基是对从事微生物研究人员的一个基本要求。

由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，使得配制培养基没有一个统一的标准。

虽配制方法各异，但总的来说还是要注意以下几个问题。

1.药品

实验所用药品要结合实验室实际情况只要有效成分一致，例如酵母膏/酵母粉，琼脂条/琼脂粉。

注意分析纯和工业纯药品之间的区别，用时应该注意有效成分换算。

工业性实验应尽可能采用工业原料，这样有利于放大。

另外，选用工业性原料时，也应注意有效成分换算。

2.药品的称量

对于发酵培养基所用的药品，一般用电子天平（精确度0.1g）即可，请勿使用分析天平（精确度为0.0001g），会造成仪器不必要的浪费。

对于需要微量的药品，先用电子天平称量后，再配制成一定浓度的母液。

配制培养基时稀释一定倍数即可。

3.培养基用水

一般采用去离子水，有特殊要求的除外。

4.药品之间的相互影响

有些药品之间配制时会发生化学反应而产生沉淀，配制这些培养基时应该注意。

尽量避免沉淀的产生。

例如有些可以分别配制溶液灭菌冷却后再无菌混合。

例如，有一培养基（洛克氏液）组成为：

氯化钠8g，氯化钾0.2g，氯化钙0.2g，氯化镁0.01g，磷酸氢二钠2g，磷酸二氢钾0.3g，蒸馏水1000ml。

灭菌时应该先将氯化钙、氯化镁另分装于小瓶，高压灭菌后再合并以免Ca2+与PO43-化合，产生磷酸钙沉淀。

5.药品的溶解一些需要加热才能溶解的药品在加热过程中需要搅拌，人不可离开，以防发生意外。

例如琼脂条的溶解和高浓度葡萄糖溶液的配制。

6.灭菌操作

药品的灭菌要结合药品的具体情况，不可套搬参考书上介绍的通用灭菌条件（121℃，0.1MPa，20min）。

例如，葡萄糖灭菌温度稍低，一些抗生素或活性物质等不能灭菌只能用0.45um或0.22um膜过滤。

实例：

一、肉汤培养基的配置1实验材料

1.培养基组成牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，氯化钠0.5％，pH值7.2，固体时加琼脂2％。

2.试剂6molL-1HCl、10％NaOH。

方法与步骤

1.先取所需水量的一半放于烧杯中，然后称取蛋白胨加入水中，加热溶解。

2.取一载玻片放于电子天平（精确度0.1g）上，称取所需牛肉膏，然后把牛肉膏和载玻片一同放入烧杯中，加热溶解。

3.称氯化钠，加入上述溶液中溶解，补足水量。

4.待溶液冷至室温时，测pH值，用NaOH调pH值至7.5～7.6（加热灭菌以后，pH值下降0.3～0.4）。

5.做固体培养基时，加2％琼脂，加热溶解，补足蒸发水量。

6.灭菌，条件为121℃，15～20min。

二、阿魏菇培养基的配制

阿魏菇是一种食用蕈菌，可采用袋栽或瓶栽的方法进行养殖。

它的培养基是一种典型的粗原料培养基。

培养基组成：

杂木屑68%、棉籽壳10%、麸皮20%、红糖1%、碳酸钙1%，每50千克干料另加酵母片0.025克，过磷酸钙0.25克，含水量65%，pH值自然。

按要求称量拌料装瓶（袋）。

经高压蒸汽灭菌1.5～2小时或常压蒸汽灭菌6～10小时，冷却到30℃以下接种。

生化工程研究室实验技能系列讲座（三）

主讲人：

曹伟锋一、如何选题

1、做任何事，都要有应用背景，要与老师讨论，同时多查文献，在此基础上确定选题。

2、不要被文献所禁锢，可以在方法上提出新观点。

3、看文献要带着问题去看，若提不出问题，要和老师同学交流。

4、要大量阅读外文，了解所研究课题的最新进展。

学习国外先进的实验方法，积极领会外文作者意图。

在阅读外文文献过程中，敢于批判和质疑，敢于写信向国内外（尤其是国外）同行请教。

二、开题报告与计划写的应当细些。

详细的计划可以尽早发现实验中需要解决的问题，避免实验的盲目性。

三、实验进行中要及时跟踪最新的文献，要求有一些创意。

四、要全面了解课题的国内外（尤其是国外）研究现状，研究思路，在阅读大量

文献的基础上，多与老师、同学、同行交流，提出自己的研究思路。

实验室基本操作与安全常识

1.挪动干净玻璃仪器时，勿使手指接触仪器内部。

2.容量瓶是量器，不可用作盛器。

容量瓶等带磨口玻璃塞仪器的塞子，不要盖错。

带玻璃塞的仪器或试剂瓶等，如果暂时不用，要用纸条把瓶塞和瓶口隔开。

3.洗净的仪器要放在架上或干净纱布上晾干，不能用抹布擦拭，更不能擦拭其内壁。

4.用完的药品或容器放回指定的位置，以便他人能方便快速地找到。

5.不要用滤纸称量药品。

6.定期清理冰箱，一般2个月，将过期的样品，溶液等移出并刷净容器。

7.标签纸上要写明物质的名称，规格和浓度，配制日期及配制人，标签应贴在试剂瓶或烧杯的2/3处，试管等细长容器的上部。

8.取用试剂和标准溶液后，须立即将瓶塞盖严，放回原处。

取出的试剂或标准溶液如未用尽，切勿倒回原瓶中，以免污染试剂。

9.凡是发生烟雾，有毒气体和有臭味气体的实验，均在通风橱中进行，橱门应紧闭，非必要时不得打开。

10.使用贵重仪器时应十分重视。

使用前应熟知操作规程，第一次使用该仪器时最好能在专业人员监督下完成；

若有问题，随时请专业人员解答。

使用时要严格遵守操作规程；

发生故障时，应立即关闭仪器，请示报告，不得擅自拆修。

11.在用电炉加热物品时，一定要用石棉网。

这样不但可以保证仪器的使用寿命，还可以保证操作人员的安全，尤其在用金属容器加热时。

12.实验室中已经配有足够的插座，实验中尽量不要使用接线板。

如必须使用，用完后请及时收起来。

扩展阅读：

生化和分子实验技能考试内容（最终）

《生物化学与分子生物学实验》实验技能点分解如下：

技观测项目观测点能称电子天平量技术1、调整地脚螺栓高度，使水平仪内空气汽泡位于圆环中央。

2、接通点源，按开关键直至全屏自检。

3、预热30分钟。

为取得理想的测量结果，天平应保持在待机状态。

4、使用除皮键，除皮清零。

放置样品进行称量。

5、读数时要保证门关闭6、开关门、按键要轻缓7、天平应一直保持通电状态，不使用时将开关键至待机状态，使天平保持保温状态，可延长天平的使用寿命。

8、在对天平清洗之前，将天平与工作点源断开9、称量废弃物用刷子小心去除10、在清洗时，不能使用强力清洁剂（溶剂类等），应使用中性清洁剂（肥皂）浸湿的清洁布擦拭（擦拭不要让液体渗到天平内部），然后使用干净的清洁布拭干。

普通天平1、称量前调节螺丝达平衡，若不平衡，应调节螺丝使之平衡。

2、被称量物要放在左盘中，砝码要放在右盘中。

3、取砝码时，切不可用手拿取，而必须用镊子夹取。

4、添加砝码时，应先夹质量大的砝码，然后在夹质量小的砝码（最后再移动游码）。

5、被称量的药品不能直接放在托盘上（可在两个托盘上各放一张大小相同的纸片，然后把被称量的药品放在纸片上，潮湿或具有腐蚀性的药品必须放在表面皿或烧杯里称量）。

6、称量完毕后，应把砝码放回砝码盒中，把游码移回零处，使天平恢复原来的状态。

容容量瓶使量用瓶使用1、使用前要检验是否漏水。

程序是：

加水→倒立，观察→瓶塞旋转180°

→倒立，观察。

2、容量瓶不能用于溶解溶质，更不能用玻璃棒搅拌。

因此溶质要先在烧杯内溶解，然后再转移到容量瓶中。

3、不能将热的溶液转移到容量瓶中，更不能给容量瓶加热。

如果溶质在溶解时是放热的，则须待溶液冷却后再移液。

4、配制一定体积的溶液，须选用与该溶液体积相同规格的容量瓶。

常用的有50mL、100mL、250mL、500mL、1000mL等规格。

5、观察所加液体是否达容量瓶的刻度线，一定要平视，使液面的最低点刚好与刻度线相平。

6、如果加水定容时超过了刻度线，不能将超出的部分再吸走，必须重新配制。

因为吸走一部分液体虽然溶液的体积达到了要求，但吸走的部分液体带走了一部分溶质，使所配溶液的浓度偏低。

7、容量瓶通常不用于贮存试剂，因此，配制好的溶液要倒入试剂瓶中，并贴上标签。

移移液管使液用管使用1、取液时移液管的位置（液面以下）1分2、调整液面时移液管是否垂直（要垂直）1分3、调整液面时眼光的位置（视线、液面、标线均应在同一水平面上）2分4、放液时移液管尖是否与容器接触（管尖要与容器壁触碰）2分5、液体流完后,是否有再接触容器15秒（要保持15秒的触碰,使其流尽）1分6、是否吹管（无需吹管）1分7、移液管使用前的洗涤（除分别用洗涤液、水洗涤外，还需用少量被移取的液体洗涤）1分8、使用前的洗涤方法：

先慢慢地吸入少量洗涤的水或液体至移液管中，用食指按住管口，然后将移液管平持，松开食指，转动移液管，使洗涤的水或液体与管口以下的内壁充分接触，再将移液管持直，让洗涤水或液体流出，如此反复洗涤数次1分移液枪

移液枪使用1、量程的调节：

由大调小和由小调大（如果要从大体积调为小体积，则按照正常的调节方法，逆时针旋转旋钮即可；

但如果要从小体积调为大体积时，则可先顺时针旋转刻度旋钮至超过量程的刻度，再回调至设定体积，这样可以保证量取的最高精确度。

）2分使用2、调最大、最小量程时，是否超过量程范围（将按钮旋出量程，否则会卡住内部机械装置而损坏了移液枪）1分3、枪头（吸液嘴）的装配（将移液枪（器）垂直插入枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。

枪头卡紧的标志是略为超过O型环，并可以看到连接部分形成清晰的密封圈。

错误操作：

使劲地在枪头盒子上敲几下，这时错误的做法，因为这样会导致移液枪的内部配件（如弹簧）因敲击产生的瞬时撞击力而变得松散，甚至会导致刻度调节旋钮卡住。

）1分4、移液时的操作姿势：

吸取液体时，移液器保持竖直状态，将枪头插入液面下2-3毫米1分5、移液的方法：

一是前进移液法。

用大拇指将按钮按下至第一停点，然后慢慢松开按钮回原点。

接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体。

最后松开按钮。

二是反向移液法。

此法一般用于转移高粘液体、生物活性液体、易起泡液体或极微量的液体，其原理就是先吸入多于设置量程的液体，转移液体的时候不用吹出残余的液体。

先按下按钮至第二停点，慢慢松开按钮至原点。

接着将按钮按至第一停点排出设置好量程的液体，继续保持按住按钮位于第一停点（千万别再往下按），取下有残留液体的枪头，弃之。

4分6、移液器的放置：

将其竖直挂在移液枪架上，但要小心别掉下来。

移液器枪头内具有液体时，移液器的拿放。

（不得水平放置或倒置）1分沉有机溶剂淀沉淀技术1、操作温度（低温下操作，冰盐浴中进行）1分2、有机溶剂的选用（能与水互溶）1分3、有机溶剂的加入（缓慢且不断搅拌以免局部过浓）1分4、盐浓度（溶液中盐浓度以不超过5%为宜，少量的中性盐对蛋白质变性有良好的保护作用，过高会增加蛋白质在水中的溶解性，降低了有机溶剂沉淀蛋白质的效果。

）1分5、有机溶剂沉淀的原理（有机溶剂能降低溶液的介电常数，减小溶剂的极性，从而削弱了溶剂分子与蛋白质分子间的相互作用力，增加了蛋白质分子间的相互作用，导致蛋白质溶解度降低而沉淀。

）2分6、影响有机溶剂沉淀的因素（温度、样品浓度、pH值、离子强度）4分盐析技术1、如何查找硫酸铵饱和度表格2分2、何谓硫酸铵的饱和度（在饱和溶液中的百分数）2分3、如何判断所需添加的硫酸铵的量1分4、添加硫酸铵时应如何操作（在加入之前要先将其研成细粉不能有块，加入盐时应该缓慢均匀，搅拌也要缓慢，少量多次加入，尤其到接近计划饱和度时，加盐的速度更要慢一些，以免引起局部的盐浓度过高，导致不应有的蛋白质沉淀。

）2分5、温度的影响（一般情况蛋白质盐析对温度要求不严，可在室温下进行，但对于某些对温度敏感的酶，要求在0℃~4℃下操作）1分6、盐析的原理（大量的中性盐夺走了水分子，破坏了蛋白质水膜，暴露出疏水区域，同时又中和了电荷，破坏了亲水胶体，从而使蛋白质沉淀。

）2分过减压抽滤1、减压抽滤所用装置名称（抽滤瓶、布氏漏斗、真空泵）3分2、滤纸的操作：

贴好滤纸，滤纸的大小应剪得比布氏漏斗的内径略小，以能恰好盖住瓷板上的所有滤小孔为度。

先由洗瓶挤出少量蒸馏水润湿滤纸，稍微抽吸。

使滤纸紧贴在漏斗的瓷板上，然后进行抽气过滤。

3分加液时的操作：

过滤时，应该将澄清的溶液沿玻璃棒倒入漏斗中1分3、在布氏漏斗上清洗沉淀的操作：

应停止抽滤，让少量洗涤剂缓慢通过沉淀，然后进行吸滤。

2分4、布氏漏斗的出液口的方向1分研冰浴研磨磨技术

1、如何有效研磨？

2、磨而非捶3、石英砂的作用4、冰浴如何做5、研磨完成的判定液氮研磨1、小心冻伤2、使用的研钵（瓷,玻璃）？

3、使用前研钵预冷4、研钵内不能有水5、研磨操作应快速6、研磨后样品粉末迅速放置到容器电SDS-PAG泳E电泳技术1、凝胶板的洗涤（次序、干净面的保证）2、凝胶板的安装3、电泳槽的安装（板的上下）4、如何正确用琼脂封底？

5、胶配置的注意事项（冰箱保存、顺序、凝固温度）6、灌胶7、电泳液添加的位置8、样品的制备（2×

溶液的使用、如何沸水浴）9、上样的操作10、电泳仪的使用11、变换电压的时间确定12、停止电泳的时间确定13、回收电泳液14、剥胶15、染色时间和温度16、脱色时间和效果判断17、结果分析（条带的位置和深浅说明什么？

）18、为什么该实验是按分子量分离蛋白质？

19、2×

样品溶解液中的各成分的作用20、2×

、5×

中数字的意义琼脂糖凝胶电泳1、琼脂糖凝胶的配制2、电泳水平槽的安装3、加样孔的方向4、电泳上样缓冲液的配方及各个组分的作用（蔗糖、溴酚蓝）5、电泳上样的操作6、电泳时电压的设置7、电泳终止的判断8、核酸的检测方法（EB染色、大分子染料）9、EB操作的安全事项10、琼脂糖电泳的原理离台式高速心离心机技术冷冻高速离心机1、离心样品的平衡2、转速的设置3、时间的设置1、离心样品的平衡2、转速的设置3、时间的设置4、离心温度的设置薄板层薄板准备1、活化的原因2、活化温度3、活化的时间析样品准备1、样品中不能含有盐，否则有拖尾2、样品溶液要有一定浓度不能太稀影响分离效果技1、斑点小（直径不超过2mm）、均匀、点样量适量（多-容易扩散和拖尾，少-组分丢失）术点样2、距离薄板下沿2cm3、少量多次点（1-5），每点一次用吹风机冷风吹干4、几个不同的样要在同一直线上展层1、展层剂的选择2、层析缸的使用3、展层剂的界面要低于点样线Rf测定溶缓冲液的液配制配制特殊溶液的配制萃萃取技术取技术PPCR仪的C使用R技术反应体系加样1、Rf值为原点到层析点中心的距离（r）与原点到溶剂前沿的距离（R）的比值1、配方2、容量瓶的使用3、配制方法1、硫酸溶液的配制方法1、振荡均匀2、静置时间3、分离4、防止液体泄露1、程序设计7分2、开关盖要轻2分3、正确放入PCR管1分4、每步骤的意义1、PCR管的选择2分2、加样顺序（由多到少）2分3、最后离心2分4、注意污染4分5、正确使用移液枪质质粒提取粒技术提取技术高高压灭菌压技术灭菌技术1、判断菌液浓度是否达到要求3分2、操作过程注意污染2分3、加入溶液2后不要剧烈振荡，只需轻轻颠倒几次离心管。

1分4、加入溶液3后，复性时间不宜过长1分5、溶液2现用现配1分6、如何分离离心后产生的絮状沉淀1分7、正确溶解质粒DNA1分1、是否向外层锅内加入适量的水；

2分2、灭菌物品是否装得太挤；

1分3、螺栓是否旋紧；

1分4、是否设置好灭菌所需的压力、温度和时间；

1分5、排气阀是否打开；

1分6、是否在冷空气完全排尽后关上排气阀；

1分7、是否在灭菌所需时间到后切断电源；

1分8、是否让灭菌锅内温度自然下降；

1分9、是否在压力降至“0”时打开排气阀。

1分感受

细胞对数生长期的1、所摇菌液是否是活化过的；

1分2、摇床的温度及转数是否正确；

1分态确定制备技术转热激处理化技术超净台的使用涂板玻玻璃器皿璃的洗涤技器术皿的洗涤技术pH值的测定pH试纸的使用pH计的使用3、是否是每隔20-30分种测量菌液的OD值；

1分4、测OD值前分光光度计是否预热；

1分5、测OD值前分光光度计是否调波长、调零和调“100”；

1分6、测OD值是否以未接种的作为对照；

2分7、所测OD值是否在0.3－0.5之间，不同的菌株具体数值不同。

3分1、热激处理的时间2、热激处理的温度特别要控制热激时间（42℃，90s）1、使用前应开启风机2、用75%的酒精擦拭台面。

注意有机玻璃面不能用酒精擦3、紫外灯照射30分钟，然后关闭紫外灯。

1、应用超净台内，微开培养皿盖，用推子来回涂均匀。

2、如何判断推子已冷却1、洗前应用洗涤剂浸泡2、试管刷洗后倒扣3、玻璃器皿的内外壁应不挂水珠1、不能把试纸直接放入待测溶液，应用玻璃棒沾取少量溶液将其涂在pH试纸上（5分）2、颜色比对观察的时间（马上进行观察）（5分）1、使用前需校正（采用两点校准法）2、测量完后，应用蒸馏水冲洗电极。

3、电极如何保护。

1、预热仪器（20分钟）2、使用前调零与校正3、取比色皿及擦拭的方法4、测量前，比色皿应用待测溶液清洗5、可见光检测与紫外光检测使用的比色皿是否有差异？

为什么？

分分光光度光仪的使用光度法1、移液管、移液器的使用2、SDS-PAGE电泳3、离心机的使用4、PCR仪的使用5、高压灭菌技术6、分光光度仪的使用7、抽滤

8、琼脂糖电泳

友情提示：

本文中关于《生化实验室必备技能》给出的范例仅供您参考拓展思维使用，生化实验室必备技能：

该篇文章建议您自主创作。