凉血解毒方治疗银屑病的实验研究Word文件下载.docx
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凉血解毒方能促进小鼠尾部颗粒层形成和显着抑制小鼠阴道上皮细胞的有丝分裂，其治疗银屑病的机制可能与促进表皮细胞正常分化和抑制表皮细胞增殖有关。
【关键词】凉血解毒方;
银屑病;
有丝分裂;
小鼠
Objective:
TostudytheeffectsofLiangxueJieduDecoction,acompoundtraditionalChineseherbalmedicinewiththefunctionofbloodcoolinganddetoxicating,intreatingpsoriasisinmiceandtoexploreitsmechanism.
Methods:
（1）SixtymicewererandomlydividedintoLiangxueJieduDecoctiongroup,compoundIndigoNaturaliscapsulegroup,acitretincapsulegroupandnormalsalinegroup.Another10micewereselectedasblankcontrol.After2weekadministration,miceweresacrificedtoobtainsamples.Afterhematoxylinandeosin（HE）staining,tailscaleswithgranularlayerswerecalculatedbyanopticalmicroscope.
（2）Exceptfortenmiceinblankgroup,sixtyfemalemicewereinjectedintraperitoneallywithdiethylstilbestroloncedaily.After3dayinjection,micewererandomlydividedintofourgroupsandtreatedasabovedescription.After2weektreatment,allmicewereinjectedintraperitoneallywithcolchicine（2mg/kg）,andsacrificed6haftertheinjection.ThemitoticrateinvirginalepitheliumwascalculatedafterHEstaining.
Results:
Comparedwithnormalsaline,LiangxueJieduDecoctioncouldsignificantlyinhibitthemitosisofmousevaginalepithelium（）andpromotetheformationofgranularlayersinmousetailscaleepidermis（）.
Conclusion:
ThemechanismofLiangxueJieduDecoctionintreatingpsoriasismayberelatedtopromotinggranularcellgrowthandinhibitingproliferationofepidermiccells.
Keywords:
LiangxueJieduDecoction;
psoriasis;
mitosis;
mice
上海市名中医马绍尧教授采用凉血解毒方治疗银屑病，取得了较好的临床疗效［1］。
本实验通过观察中药凉血解毒方对小鼠尾部表皮鳞片模型和雌性小鼠阴道上皮有丝分裂模型的影响，探讨凉血解毒方治疗银屑病的作用机制。
1材料与方法
实验材料
实验动物昆明种SPF级小鼠，6～8周龄，体质量g，雌雄兼取，共140只，由上海龙华医院实验动物中心提供，动物许可证号为SCXK20030003。
实验药品凉血解毒方，经上海龙华医院制剂室统一煎取。
将中药加水1000mL，浸泡1h，武火煮沸后，文火煮30min，取汁150mL。
第2煎加水500mL，煎取150mL，两次煎液混合，浓缩至g/mL备用；
复方青黛胶囊，陕西天宁制药有限责任公司生产，批号为051101；
阿维A胶囊，重庆华邦制药股份有限公司生产，批号为20060302；
秋水仙碱注射剂，华美生物制品公司生产，批号为060404；
乙烯雌酚注射液，上海通用制药有限公司生产，批号为050907。
实验方法
凉血解毒方对小鼠尾部鳞片颗粒层的影响选取70只小鼠用作小鼠尾部鳞片模型［2］。
取10只小鼠作为空白对照组，另60只小鼠随机等分为4组，按人鼠等效剂量连续灌胃14d，1次/d。
其中凉血解毒方组15只，灌胃剂量g/（kg·
d）；
复方青黛胶囊组15只，灌胃剂量g/（kg·
阿维A胶囊组15只，灌胃剂量mg/（kg·
生理盐水组15只，灌胃剂量mL/d。
灌胃剂量参照《药理与中药药理实验》［3］中的体型分数换算法计算，公式为
dB=dA×
RBRA×
3WA3WB。
其中dB是欲求算的B种动物每千克体质量所用剂量，dA是已知A种动物每千克体质量所用剂量；
WA、WB为已知动物A、B的体质量；
RA、RB为动物的体型系数。
第15天上午8时将70只小鼠处死，取材、固定、切片，苏木精和伊红染色，光学显微镜下计数小鼠尾部100个表皮细胞中的颗粒细胞数，并与对照组的数据进行比较。
凉血解毒方对小鼠阴道基底细胞有丝分裂的影响随机选取60只雌性小鼠腹腔注射乙烯雌酚，mL/只，1次/d，连续3d，使小鼠处于高雌激素状态，小鼠阴道上皮细胞出现有丝分裂［4］。
同时选10只正常小鼠作为空白对照组。
第4天将造模小鼠随机分为4组，灌胃方法和治疗方式同前，继续每日1次腹腔注射乙烯雌酚。
第15天将70只小鼠腹腔注射秋水仙碱2mg/kg，使细胞分裂停滞于有丝分裂期，6h后处死，取材，HE染色，在光学显微镜下计数300个小鼠阴道基底细胞中所出现的有丝分裂细胞数，换算成每100个基底细胞的有丝分裂细胞数。
统计学方法统计软件为SPSS，计量资料采用x±
s表示，各组组间差异比较采用单因素方差分析，并采用LSD法进行两两比较。
2结果
凉血解毒方对小鼠尾部表皮细胞中颗粒细胞数的影响生理盐水组小鼠尾部表皮浅层见少量颗粒细胞，各药物治疗组小鼠尾部表皮浅层见数量较多成层排列的颗粒层细胞形成。
凉血解毒方对小鼠尾部颗粒层形成有明显的促进作用，凉血解毒方组颗粒细胞显着多于生理盐水组。
见表1和图1。
表1凉血解毒方对小鼠尾部鳞片颗粒细胞形成的影响
凉血解毒方对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响生理盐水组小鼠阴道上皮基底层见较多的核分裂细胞，而各治疗组阴道上皮基底层细胞核分裂少见。
凉血解毒方对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂具有明显的抑制作用，凉血解毒方组有丝分裂指数显着低于生理盐水组。
见图2和表2。
表2凉血解毒方对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响
3讨论
银屑病由热毒侵犯肌肤血脉而致血热妄行，流溢肌肤所致。
因紧张、劳累、情志不畅而导致银屑病的诱发与加重，屡见不鲜。
一旦发作，则红斑色鲜，肌肤灼热，瘙痒剧烈，患者因此而焦虑不安，心烦失眠。
故急性发病或进展期患者，病性多为实证热证，由心肝火旺，热入血分，泛发肌肤而成。
治宜凉血清心平肝，清热解毒，以犀角地黄汤主之。
凉血解毒方中重用水牛角，其为寒性类药，可解心经之热邪而宁心、除烦；
生地黄、赤芍、紫草、大青叶、白花蛇舌草凉血活血、清热解毒；
丹参活血化瘀、通络。
实验结果提示，凉血解毒方与阿维A胶囊、复方青黛胶囊均能促进小鼠尾部鳞片上皮颗粒层的形成。
凉血解毒方组小鼠尾部鳞片上皮颗粒层细胞在数量上和层次上比生理盐水组明显增多，体积明显增大，从而使表皮增厚。
凉血解毒方对雌性小鼠阴道上皮细胞有丝分裂具有明显的抑制作用，凉血解毒方组小鼠阴道上皮的有丝分裂指数显着低于生理盐水组。
从病理角度看，银屑病皮损处表皮细胞增殖过快，单位面积的有丝分裂指数明显高于非皮损处，且皮肤颗粒层细胞减少或消失。
因此，抑制表皮细胞的异常增生，诱导颗粒层细胞形成，无疑是治疗银屑病的重要机制之一［5］。
本实验中雌性小鼠经乙烯雌酚造模成功后，处于雌激素周期，表现为阴道口黏膜明显肿胀充血，病理显示阴道上皮细胞有丝分裂增加，增生活跃。
本实验中的模型组有丝分裂指数显着高于空白对照组，符合银屑病皮损中表皮细胞增生过度的特点［6］，因此通过用药前后比较有丝分裂指数的大小，可以了解药物对过度增殖的上皮细胞的抑制作用。
正常情况下，小鼠尾部鳞片表皮细胞中颗粒层缺失，仅在毛囊附近有少量的颗粒细胞，表皮较薄，其天然的角化形成与人类银屑病表皮相似，故可直接利用小鼠尾鳞片模型，模拟银屑病皮损中表皮角化不全［7］。
此模型简便易行，目前大多应用该模型进行银屑病药物实验研究［8］。
药物如能抑制阴道上皮有丝分裂，促进鼠尾鳞片颗粒层的形成，说明其可转化表皮细胞的角化过程，因此可能对银屑病具有治疗作用。
维A酸类药物有诱导表皮细胞正常角化的作用，因其疗效肯定，是目前国际公认的治疗银屑病的常用药物之一。
但常见皮肤黏膜过度干燥，以及部分患者出现肝功能、血脂异常的副反应。
复方青黛胶囊也是目前临床上常用的中药制剂，患者服用后常出现胃肠道反应。
本次动物实验研究证实，凉血解毒方能诱导小鼠尾部颗粒层形成，抑制雌性小鼠雌激素期阴道上皮细胞有丝分裂。
因此中药凉血解毒方治疗银屑病的作用机制可能与其促进角质形成细胞的正常角化，抑制角质形成细胞过度增殖有关。
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