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中药复方多途径、多靶点的治疗特点在该病的治疗中有独特的优势。

东汉张仲景的《伤寒杂病论》中治疗下利根据不同的病性、病位、病期酌情用药，积累了丰富的经验，至今仍有效地指导临床，历千年而不衰，其中多个经方早已成为临床治利的验方及基本方，笔者使用也多获良效。

经方治利的特点之一是药少效佳，功专力宏，只要汤证相符，切合病机，多获捷效。

但从现代医学角度看，对于其确切的治疗机制尚不清楚，目前也鲜见报道。

应用现代的理论与技术，深入研究经方在抗结肠溃疡方面的作用机制，对于挖掘经方这一祖国医学瑰宝是一次积极的探索，对于提升UC的治疗更具有重要意义。

随着对NF-κB（nuclearfactorkappaB，NF-κB）结构和功能研究的深入,发现NF-κB是一种转录因子,广泛存在于各种组织中,在免疫和炎症反应、细胞生长、病毒感染及某些疾病急性期反应方面起重要作用。

核因子-κB（nuclearfactorkappaB，NF-κB）最先发现于B淋巴细胞核提取物中，能与免疫球蛋白κ轻链基因的增强子κB序列（GGGACTTTCC）特异性结合，故称为核因子-κB。

。

许多研究证实,免疫反应的异常是造成UC炎症和组织损伤的内在重要因素,而细胞因子又在介导这一异常的免疫反应中起重要作用。

多种基因涉及机体的炎症反应，这些基因活化的前提首先是NF-κB的激活。

细胞处于静息状态时，NF-κB通过与抑制蛋白IκB（inhibitorykappaB，I-κB）结合存在于多种细胞的细胞质中。

当细胞受到胞外信号前炎症细胞因子如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1以及细菌、病毒、脂多糖、某些变应原等多种因素的刺激时，引起一系列连锁的酶促反应。

首先NF-κB诱导激酶NIK激活，随之IκB激酶IKK活化，IκB发生磷酸化，随后被蛋白酶体降解。

IκB的降解使NF-κB暴露出其蛋白序列上核定位信号，NF-κB被激活，并易位到细胞核内，与相应基因的启动子或增强子的κB位点发生特异性结合，激活基因转录和表达。

多种免疫和炎症反应有关的基因都含有κB位点，因而NF-κB可激活他们的转录。

反过来，由NF-κB调节的产物，如白介素又能激活NF-κB。

有研究结果显示溃疡性结肠炎患者病变结肠黏膜组织NF-KB表达水平显著增高，并与UC病情活动性和严重性之间有一定关系[3]。

多种免疫和炎症反应有关的基因包括IL-1、6、8、10，TNF-α、干扰素（INF）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）等[4][5]的调控区都含有κB位点，因而NF-κB可激活他们的转录。

反过来，由NF-κB调节的产物，如TNF-α和白介素又能激活NF-κB。

这意味着存在一个能放大且延续炎症反应的复杂的调节环路，而NF-κB是其中一个中心环节[6]。

所以NF-κB活化可能是UC发生发展的关键点。

近年研究发现NF-κB调控UC患者细胞因子的释放，从而参与了UC肠道的炎症和免疫反应，提示NF-κB在IBD的发生发展中占举足轻重的地位。

有研究发现UC患者NF-κB在水肿区、临近溃疡区的表面上皮、隐窝脓肿的隐窝上皮及上皮增生处表达明显，且与病情活动性及内镜分级有相关性，而NF-κB在正常组织无或低表达，这表明NF-κB的诱导与UC的发生和发展密切相关[3]。

白细胞介素8（Interleukin8,IL-8）是目前已知最强的多形核白细胞趋化和激活因子，是趋化中性粒细胞、释放各种活性酶和白三烯B4（leukotrieneB4，LTB4）的关键性因子，TNF-α、IL-l、IL-6诱发的炎症反应在很大程度上是通过诱导产生以IL-8为主的趋化因子所介导的[7]。

IL-8主要由中性粒细胞、巨噬细胞、单核细胞、T淋巴细胞、内皮细胞等在白细胞介素-1（IL-1）、TNF-α、脂多糖（LPS）等的刺激下产生，中性粒细胞是产生IL-8的主要细胞。

IL-8是中性粒细胞强有力的趋化因子，可聚集并激活中性粒细胞，使其释放溶菌酶，并促进溶菌酶的活性和吞噬效应，造成局部组织病理损害，对嗜碱性粒细胞和T细胞也有一定的趋化作用，上述的生物学活性与炎症反应密切相关，在炎症反应中起更直接的介导作用，故IL-8的异常往往导致一些免疫炎性疾病发生。

IL-8是UC发生过程中重要的炎症介质，UC患者的IL-8含量均明显增高[8]。

白细胞介素10（Interleukin10,IL-10）是近几年新发现的细胞因子,又称细胞素合成抑制因子,主要由Th2细胞产生,是具有多向性生物学活性的强免疫抑制因子。

为含178个氨基酸残基的单肽链糖蛋白（其中N端18个氨基酸信号肽序列）。

IL-10分子量35-40kDa,通常为二聚体。

IL-10主要由Th2细胞产生,但Tho细胞、Th细胞、CD8+T细胞、活化的B细胞、单核-巨噬细胞、kupffer细胞、肝细胞、角化细胞等也可产生。

IL-10是具有多向性生物学活性的强免疫抑制因子,能改变机体的免疫应答和MHCⅡ类抗原的表达,并介导Th1和Th2两类细胞之间的相互调节。

在UC在发生时,体内IL-10呈不同程度下降[9][10]。

UC的治疗应顺序进行，先治疗急性活动性病变，然后维持缓解，对具体病例则十分强调个体化的处理原则，这已是共识。

现代UC治疗要掌握好分型、分期治疗的原则：

分型，溃疡性结肠炎临床常见慢性复发型、慢性持续型、急性暴发型和初发型4种类型；

分期治疗，指活动期以控制症状为主要目标，缓解期则应继续控制发作，预防复发。

据一项研究报道[11]，我国溃疡性结肠炎患者该病类型以慢性复发型居多。

现代医学在诱导溃疡性结肠炎活动期的缓解上取得了很大的进展，虽其如此，仍有一部分慢性持续型、急性暴发型和初发型患者药物无法诱导缓解，或需大剂量的氨基水杨酸、肾上腺糖皮质激素甚至免疫调节剂或生物学制剂等方能诱导缓解。

无疑增加了药物的毒副作用，降低了病人的依从性。

中医药在治疗溃疡性结肠炎方面积累了丰富的经验，临床实践表明在溃疡性结肠炎的活动期配合中医治疗，可降低急性暴发型溃疡性结肠炎的死亡率，缩短慢性持续型、初发型患者的缓解时间并提高其缓解率，并减少西药的用量，以降低其毒副作用。

甚至部分轻中度溃疡性结肠炎以中药治疗为主或中药为主并适当辅以口服西药即可诱导缓解，且未发现明显的不良反应[12][13]。

溃疡性结肠炎急性发作期的临床表现为腹泻，每日数次或10次以上，腹痛，多局限于左下腹及下腹部，黏液血便或便鲜血，里急后重，发热，恶心呕吐等，结肠镜下见黏膜呈弥漫性充血水肿，黏膜变脆，呈颗粒状，伴有渗血，黏膜可见大小不一、深度不等的溃疡。

虽然目前中医对溃疡性结肠炎急性发作期的病理认识还见仁见智，但大多倾向于认为其病理变化主要是湿热之邪壅滞肠间，与气血相搏结，脂膜和血络受伤，腐败化为脓血，出现下利赤白脓血；

气机不畅，腑气不通故腹痛、里急后重。

利久伤及人体中气，渐而转为寒热错杂之证。

病机关键是寒热错杂，治疗当清温并用，补中止利以祛除病邪而使气血调畅。

需要注意的是慢性结肠炎以脾虚为本，尤其是慢性复发型UC患者，尽管证中出现实热证候，但选用清热化湿药时尽量避免选用大苦大寒之峻剂，必须选用时，用量适度，以免过于苦寒伤脾阳，矫枉过正，时时以顾护中洲为要。

本病慢性缓解期的临床表现为腹痛腹泻和里急后重明显减轻，时有少量黏液脓血便，肢冷便溏，倦怠乏力，面色萎黄，纳食不化，腹冷喜温，舌淡苔薄黄腻等。

结肠镜下见黏膜充血水肿基本消失，溃疡表面无脓性分泌物，看见假息肉形成。

中医认为UC的缓解期以脾胃虚弱为主，属本虚为主，余邪未净。

虽然具体治疗各家众说纷纭，但多数学者认为病机关键为正气亏虚，湿热之邪未清。

辨证重在健脾益气，注意兼顾余邪留恋。

很多医家根据《诸病源候论》“大便脓血，似赤白下利而实非者，是肠痈也”及现代结肠镜下见可见肠壁弥漫性多发糜烂或溃疡并附脓苔，病理示隐窝脓肿，微观辨证符合中医“疮疡”的特征，认为UC急性期酷似“内痈”。

临床可参合“内疡”、“内痈”的治疗方法，应用局部灌肠以提高疗效。

临床上UC急性发作期重在清温并用，补中止利，可予以经方甘草泻心汤等原方或适当化裁口服间或灌肠治疗。

笔者临床应用，效果颇佳。

甘草泻心汤由甘草、干姜、半夏、黄芩、黄连、人参、大枣组成，重在调节中焦止利。

本研究根据溃疡结肠炎的发病特点及中医辨治规律，拟通过制作大鼠溃疡性结肠炎模型，观察经方甘草泻心汤对NF-κB信号通路的影响，探讨经方治疗溃疡性结肠炎的作用机制，为临床治疗难治性溃结提供思路与理论依据，为开发新型中药肠黏膜保护剂打下基础。

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附图：

图1NF-κB细胞信号转导路径图

二、研究内容（包括研究的具体内容和技术考核指标）

本课题通过制作溃疡性结肠炎大鼠动物模型，给予经方甘草泻心汤灌胃及灌肠治疗，观察各组动物结肠黏膜病理变化，同时取动物血清与结肠相同病变部位组织，测定炎症反应调节环路中重要转录因子NF-κB及其相关炎症因子表达的影响。

在对溃疡性结肠炎大鼠动物治疗前后,主要围绕以下几个方面来观测：

1）．疾病活动指数，主要对大鼠体重改变百分率、大便黏稠度和血便存在度等指标进行积分。

大体形态学损伤，观察有无溃疡、溃疡大小、有无炎症、局部充血等。

组织学评分，观察隐窝缺损、炎性细胞浸润、黏膜糜烂、溃疡等情况。

2）．局部组织NF-κB/I-κB表达变化情况。

3）．炎症因子IL8、IL-10血清浓度变化情况。

三、最终成果（成果提供形式，要解决的科学技术问题和应用前景、效益分析）

本研究旨在阐明经方甘草泻心汤治疗溃疡性结肠炎的作用机制，为临床治疗难治性溃结提供思路与理论依据，为开发新型中药肠黏膜保护剂打下基础。

将通过发表相关论文，以利于进一步学术交流。

四、研究方法和技术路线（包括理论分析、实验方法和步骤，技术关键及其解决办法）

1.研究方法：

1.1．动物分组

清洁级雄性Wistar大鼠90只，鼠龄8周，体重（180～220）g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。

90只大鼠随机分为正常对照组、模型组、西药组、泻心灌胃小剂量组（泻心A组）、泻心灌胃中剂量组（泻心B组）、泻心灌胃大剂量组（泻心C组）、泻心灌肠小剂量组（泻心D组）、泻心灌肠中剂量组（泻心E组）、泻心灌肠大剂量组（泻心F组），共9组，每组10只。

1.2．动物造模

参考江学良法[1]，应用2，4-二硝基氯苯和醋酸复合法建立大鼠溃疡性结肠炎模型。

大鼠颈背部用l0％Na2S脱毛后，连续14d，每天以20g／L的2，4—二硝基氯苯丙酮液滴背1次，每次每鼠0.3ml，第15天用直径3mm的尼龙导管经肛门插入结肠8cM处，注入0.04mmoL/L（0．1％）的2，4—二硝基氯苯乙醇（50％）液0.25ml，第16天同部位注入80ml/L醋酸溶液2ml，准确定时15s后，再用5ml生理盐水冲洗。

1.3．给药

甘草泻心汤由炙甘草、干姜、半夏、黄芩、黄连、人参、大枣组成。

上述药物均购自福建中医药大学国医堂，药物用量依据《伤寒论》所载药量比例计算（炙甘草12g、干姜9g、半夏9g、黄芩9g、黄连3g、人参9g、大枣6g）。

煎药使用北京东华原YFY-20型密闭煎药机。

药材浸泡30分钟后，第1煎加入了7倍药重量的洁净水，2煎加入3倍量的水。

1煎时间为30分钟，2煎为20分钟。

按中药常规煎煮法制成lg/mL溶液，4℃保存备用。

造模后第3天，开始给药，每天1次，连续14d。

实验各组具体给药方法：

正常对照组自由饮食，

模型组以蒸馏水灌胃4mL/只•d-1，

西药组以柳氮磺胺吡啶灌胃450mg／kg•d-1，

泻心灌胃小剂量组以甘草泻心汤药液灌胃1mL/100g•d-1，

泻心灌胃中剂量组以甘草泻心汤药液灌胃2mL/100g•d-1，

泻心灌胃大剂量组以甘草泻心汤药液灌胃3mL/100g•d-1，

泻心灌肠小剂量组以甘草泻心汤药液灌肠1mL/100g•d-1，

泻心灌肠中剂量组以甘草泻心汤药液灌肠2mL/100g•d-1，

泻心灌肠大剂量组以甘草泻心汤药液灌肠3mL/100g•d-1。

上述各组大鼠用药剂量按动物体表面积以成人用量折合。

1.4．取材

在灌药观察14d后，禁食24h，疾病活动指数评价后进行大鼠心脏采血，分离血清，-20℃冰箱保存备用。

颈椎脱臼法处死大鼠，打开腹腔，分离鼠结肠，取距肛门约8cm长结肠，沿纵轴剪开，冷生理盐水冲洗干净，滤纸吸干，平铺于冰块上。

1.5.检测指标

（1）疾病活动指数（DAI）评分[2]

按下列指标进行积分：

大鼠体重改变百分率（0分：

无改变；

1分：

下降1％~5％；

2分：

下降6％~10％；

3分：

下降11％~15％；

4分：

下降>

15％）、大便黏稠度（正常为O，松散大便为2分，腹泻为4分）和血便存在度（正常0分，隐血阳性为2分，显性出血为4分），三者相加累计。

（2）大体损伤评分[3]

平铺于冰块上的结肠,进行大体形态学损伤评分：

O分：

无溃疡、无炎症；

无溃疡，局部充血；

溃疡形成，不伴充血；

1处溃疡伴炎症；

多处溃疡伴炎症；

5分：

溃疡超过2cm；

6-10分：

溃疡超过2cm，且病变每超过lcm，加1分。

（3）组织学评分

取结肠病变部位组织，用10％的甲醛固定，石蜡包埋、常规组织切片、HE染色进行组织学评分[4]：

选lO个视野（100倍）平均评分。

正常结肠黏膜记0分；

隐窝缺损l／3时记1分；

隐窝缺损2／3记2分；

固有层覆盖单层上皮伴轻度炎性细胞浸润记3分；

黏膜糜烂、溃疡伴显著炎细胞浸润记4分。

（4）血清中IL-8、IL-10的检测

采用酶联免疫吸附测定法测定血清IL-8、IL-10的浓度。

具体方法和操作步骤严格按试剂盒说明进行。

（5）结肠粘膜组织NF-κB/I-κB免疫组化染色分析

取结肠病变部位组织，用10％的甲醛固定，石蜡包埋、常规组织切片，免疫组化法分析结肠粘膜组织NF-κB、I-κB的表达。

A．石蜡切片热修复抗原染色程序如下：

1）载玻片防脱片剂处理：

捞片后置烤箱58-60℃30-60分以使切片紧密黏附。

2）切片常规脱蜡置水：

按下列顺序浸泡：

二甲苯Ⅰ（20分钟）-二甲苯Ⅱ（20分钟）-100％酒精（10分钟）-100％酒精（10分钟）-95％酒精（10分钟）-85％酒精（10分钟）-70％酒精（10分钟）-蒸馏水（5分钟）。

3）30％H2O21份+蒸馏水10份混合，室温5-lO分钟以灭活内源