覆盆子鉴别与含量测定方法学确认方案Word格式文档下载.docx
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负责确认方案及确认报告的起草，确认实施记录的审核
QC
按照确认方案进行确认工作，填写记录，并判定是否符合认可标准要求
4、确认依据文件
《中国药典》2015年版
5、确认程序
5.1先决条件的确认
5.1.1仪器经过校准确认
所需仪器经过校准并在有效期内，确认记录见附表01。
5.1.2.人员培训确认
确认小组人员参加了本方案的培训，以及仪器的操作、维护和保养培训、偏差处理、变更控制等SOP的培训，确认记录见附表02。
5.1.3相关SOP的确认
制定仪器操作、校验、维护和保养标准程序并批准，确认记录见附表03。
5.1.4药品的确认
确认方案确认过程中使用的药品符合规定，并在有效期内。
确认记录见附表04。
5.2鉴别方法学确认
专属性：
供试品溶液制备取山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定项下供试品溶液，即得。
对照品溶液制备取椴树苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
阴性溶液制备照供试品溶液制备方法除取样品外，同法制成阴性溶液。
测定照《薄层色谱法标准操作规程》试验，吸取上述供试品溶液与阴性溶液各5μl，及对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸（90∶4∶4∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝溶液，在105℃加热5分钟，在紫外光灯（365nm）下检视。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
阴性液在相应位置上不显斑点（见薄层色谱图05-1）。
确认记录见附表05。
5.3含量测定方法学确认
5.3.1鞣花酸含量测定
5.3.1.1检查方法：
照《高效液相色谱法标准操作规程》测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
以乙腈-0.2%磷酸溶液（15∶85）为流动相；
检测波长为254nm。
理论板数按鞣花酸峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 取鞣花酸对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1ml含5μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置5ml量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，含鞣花酸（C14H6O8）不得少于0.20%。
5.3.1.2系统适用性确认
5.3.1.2.1色谱条件
高效液相色谱仪
XXXXX
色谱柱
AglilentTC-C18
（2）250*4.6mm5um
流速
1.0ml/min
检测波长
254nm，UV检测器
柱温
25℃
进样量
10μl
运行时间
30min
5.3.1.2.2溶液配制
名称
配制方法
流动相
分别量取乙腈（色谱纯）与超纯水，以乙腈-0.2%磷酸溶液（15∶85）的比例混合，用0.45µ
m水系微孔滤膜滤过，超声脱气10min，即得。
必要时可根据实际使用情况调整配制溶液的体积。
空白溶剂
样品处理用70%甲醇溶液。
对照品溶液
取鞣花酸对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1ml含5μg的溶液，即得。
平行制备2份，分别为对照品溶液1、2。
供试品溶液
取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置5ml量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
平行制备2份，分别为供试品溶液1、2。
5.3.1.2.3试验操作
待仪器稳定后，按下列进样序列注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以鞣花酸峰面积计算5针对照品溶液1的RSD；
按外标法以对照品溶液1的鞣花酸峰面积计算对照品溶液2的回收率。
序号
样品名称
进样体积（ul）
进样针数
1
5
2
对照品溶液1
3
对照品溶液2
5.3.1.2.4系统适用性回收率
按以下公式计算对照品溶液2的回收率：
式中：
AR1、AR21、AR22：
分别为对照品溶液1连续5针的平均峰面积和对照品溶液2第一针和第二针的峰面积；
MR1、MR2：
分别为对照品1、2的称样量；
CR1和CR2：
分别为对照品1、2中鞣花酸的含量；
RcR21和RcR22：
分别为对照品溶液2第1针和第2针的回收率；
5.3.1.2.5可接受标准
5针对照品溶液1鞣花酸主峰的保留时间的RSD均不大于2.0%，鞣花酸主峰面积的RSD均应不大于1.0%；
对照品溶液2的回收率应在98.0%～102.0%。
注：
若系统适用性不符合标准应立即停止进样，排查原因后再重做系统适用性，系统适用性合格后方可进行如下试验。
确认记录见附表06。
5.3.1.3含量测定
5.3.1.3.1操作
系统适用性合格后，接着系统适用性进样序列取供试品溶液1、2，用0.45um（尼龙66）一次性针式过滤头弃去5ml后取续滤液，进样，进样序列如下（序号4、5、6）：
4
供试品溶液1
供试品溶液2
6
在对照品溶液1运行完成后一般间隔10针（以时间最短的计）后，应重新插入2针对照品溶液1，作为系统跟踪，以此来评价系统稳定性。
5.3.1.3.2计算
综合前面5针对照品溶液1和后面2针对照品溶液1计算鞣花酸峰面积的RSD，当RSD不大于2.0%时，按以下公式计算覆盆子的含量：
综合供试品溶液的前面5针对照品溶液1和后面2针对照品溶液1计算鞣花酸峰面积的RSD不符合规定时，应排查原因后，再按5.3.1.2项重新测定。
5.3.1.3.3可接受标准：
按干燥品计算，含鞣花酸（C14H6O8）不得少于0.20%。
5.3.2山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定
5.3.2.1检查方法：
照《高效液相色谱法标准操作规程》测定。
检测波长为344nm。
理论板数按山柰酸-3-O-芸香糖苷峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 取山柰酸-3-O-芸香糖苷对照品适量，精密称定，加70%甲醇分别制成每1ml含80μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品粉末（过四号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用石油醚振摇提取3次，每次20ml，弃去石油醚液，再用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
本品按干燥品计算，含山柰酸-3-O-芸香糖苷（C27H30O15）不得少于0.03%。
5.3.2.2系统适用性确认
5.3.2.2.1色谱条件
344nm，UV检测器
35min
5.3.2.2.2溶液配制
取山柰酸-3-O-芸香糖苷对照品适量，精密称定，加70%甲醇分别制成每1ml含80μg的溶液，即得。
取本品粉末（过四号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用石油醚振摇提取3次，每次20ml，弃去石油醚液，再用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
5.3.2.2.3试验操作
待仪器稳定后，按下列进样序列注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以山柰酸-3-O-芸香糖苷峰面积计算5针对照品溶液1的RSD；
按外标法以对照品溶液1的山柰酸-3-O-芸香糖苷峰面积计算对照品溶液2的回收率。
5.3.2.2.4系统适用性回收率
分别为对照品1、2中山柰酸-3-O-芸香糖苷的含量；
5.3.2.2.5可接受标准
5针对照品溶液1山柰酸-3-O-芸香糖苷主峰的保留时间的RSD均不大于2.0%，山柰酸-3-O-芸香糖苷主峰面积的RSD均应不大于1.0%；
确认记录见附表07。
5.3.2.3含量测定
5.3.2.3.1操作
5.3.2.3.2计算
综合前面5针对照品溶液1和后面2针对照品溶液1计算山柰酸-3-O-芸香糖苷峰面积的RSD，当RSD不大于2.0%时，按以下公式计算覆盆子的含量：
综合供试品溶液的前面5针对照品溶液1和后面2针对照品溶液1计算山柰酸-3-O-芸香糖苷峰面积的RSD不符合规定时，应排查原因后，再按5.3.2.2项重新测定。
5.3.2.3.3可接受标准：
按干燥品计算，含山柰酸-3-O-芸香糖苷（C27H30O15）不得少于0.03%。
6、偏差处理
在确认过程中，应严格按照确认方案进行操作和判定，出现个别指标不符合标准的结果时，针对不合格指标应展开调查分析，对于确认是因操作不当等自身原因造成，应重新进行测试。
确认过程中所产生的偏差记录在附表08中。
7、变更控制
涉及到方案变更时，填写“变更申请表”，需要对其进行原因分析，根据分析结果决定是否需要重新制定确认方案还是修改可接受标准，并将涉及到的变更情况记录在附表09中。
8、附表清单
编号
附表名称
01
仪器校验确认记录表
06
鞣花酸含量测定方法确认记录表
02
人员培训确认记录表
07
山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定方法确认记录表
03
相关SOP确认记录表
08
偏差处理确认记录
04
药品确认记录
09
变更控制确认记录
05
鉴别方法确认记录表
9、变更记录
版本号
批准日期
变更描述
00
/
新文件。
附表01：
仪器校验确认
仪器名称
型号
检定有效期至
检定证书编号
符合要求
电子天平
□是□否
玻璃仪器校验确认
玻璃仪器名称
规程
校正日期
容量瓶
10ml
25ml
50ml
100ml
移液管
是否存在偏差或不一致项：
□是偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差编号：
。
□否
结论：
所有仪器均经校验且在有效期内。
检查人/日期
复核人/日期
附表02：
培训记录
XXX电子天平标准操作与维护规程
XXX型高效液相色谱仪标准操作与维护规程
偏差处理标准管理规程
变更控制标准管理规程
培训时间
培训地点
课时
讲师
是否已接受培训（是用“√”表示，否用“×
”表示）
结论：
执行本方案的人员已得到必要的培训。
附表03：
SOP名称
检查标准
检查结果
已批准生效
相关SOP均已批准生效。
附表04:
批号
来源
覆盆子
留样室
椴树苷对照品
中国食品药品检定研究院
鞣花酸对照品
山柰酸-3-O-芸香糖苷对照品
是否存在偏差或不一致项：
样品、对照品符合要求。
附表05:
鉴别方法确认记录
人员
项目
薄层板
点样方式
温度
湿度
图谱
判定标准
结果符合要求
专属性
市售
手动
见05-1
供试品与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
阴性液不显斑点。
□是
椴树苷鉴别分析方法已确认符合规定。
附表06:
鞣花酸含量测定方法确认记录
柱温
检测器
波长
系统适用性确认
理论板数
对照品1
对照品2
供试品1
供试品2
鞣花酸
可接受标准
按鞣花酸峰计算应不低于3000
是否符合规定
分离度
与相邻色谱峰之间的分离度应大于1.5
重复性
对照品1RSD值
对照品2回收率
5针峰面积的相对标准偏差（RSD值）应不大于2.0%；
对照品溶液2的回收率应在98.0%～102.0%
保留时间
空白溶剂在相应保留时间处没有峰；
供试品与对照品在相应保留时间处出现峰。
含量测定确认
平均峰面积
含量测定结果
平均值
可接受标准：
。
覆盆子的鞣花酸含量测定分析方法已确认符合规定。
附表07：
山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定方法确认记录
山柰酸-3-O-芸香糖苷
按山柰酸-3-O-芸香糖苷峰计算应不低于3000
覆盆子的山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定分析方法已确认符合规定。
附表08：
偏差处理单号
发生日期
记录标题
偏差解决日期
处理结果
附表09：
变更号
日期
升级会员 