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⑶强。

⑷干热灭菌法高压蒸汽灭菌法火焰

2、（11年山东卷）（生物—生物技术实验）

研究发现柚皮精油和乳酸菌素（小分子蛋白质）均有抑菌作用，两者的提取及应用如图所示。

（1）柚皮易焦糊，宜采用____________法提取柚皮精油，该过程得到的糊状液体可通过___________除去其中的固体杂质。

（2）筛选乳酸菌A时可选用平板划线法或____________接种。

对新配制的培养基灭菌时所用的设备是_______________。

实验前需对超净工作台进行____________处理。

（3）培养基镇南关的尿素可为乳酸菌A生长提供______________。

（4）抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。

可通过测定透明圈的______________来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。

答案：

（1）压榨过滤

（2）稀释涂布平板法（或稀释混合平板法）高压蒸汽灭菌锅消毒

（3）氮源越慢

（4）直径（或大小）

3.（11年海南卷）[生物——选修1：

生物技术实践]（15分）

许多植物含有天然香料，如薄荷叶中含有薄荷油。

现用薄荷叶提取薄荷油。

（1）薄荷油是挥发性物质，提取薄荷油时应选用_____（鲜、干）薄荷叶作原料，其原因是

。

（2） 

用萃取法提取薄荷油时，采用的溶剂是_，原理是。

（3）用水蒸气蒸馏法提取薄荷油时，在油水混合物中加入氯化钠的作用是。

常用于分离油层和水层的器皿是。

分离出的油层中加入无水硫酸钠的作用是，除去固体硫酸钠的常用方法是___。

（1）鲜薄荷油是挥发性物质，鲜薄荷叶才含薄荷油。

（2）酒精薄荷油易溶于有机溶剂酒精中

（3）使溶液分层分液漏斗除水过滤

2013年高考试题

1．【生物——选修1生物技术实践】

（15分）

回答下列有关泡菜制作的习题：

（1）制作泡菜是，所用盐水煮沸，其目的是。

为了缩短制作时间，有人还会在冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液，加入陈泡菜液的目的是。

（2）泡菜制作过程中，乳酸发酵过程即为乳酸菌进行的过程。

该过程发生在乳酸菌的中。

（3）泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有、和等。

（4）从开始制作到泡菜质量最佳这段时间内，泡菜液逐渐变酸，这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是，原因是：

（1）消灭杂菌增加乳酸菌含量

（2）无氧呼吸细胞质（3）温度、食盐用量、腌制时间（4）乳酸菌数量增加，杂菌数量较少乳酸菌比杂菌更为耐酸

2.[生物——选修1：

生物技术实践]

临床试用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。

实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。

回答下列问题：

（1）为了从样本中获取致病菌菌落，可用_______法或_________法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。

（2）取该单菌落适当稀释，用______法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。

（3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A，B，C，D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_______；

含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B_____；

含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明________；

含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的________。

（4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选择抗生素_______。

【答案】：

（1）划线稀释涂布（或涂布）

（2）涂布（3）敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A弱耐药菌（4）A

3.（8分）【生物-生物技术实践】

胡萝卜素是一种常用的食用色素，可分别从胡萝卜或产生胡萝卜素的微生物体中提取获得，流程如下：

（1）筛选产胡萝卜素的酵母菌R时，可选用或平板划线法接种。

采用平板划线法接种时需要先灼烧接种环其目的是。

（2）培养酵母菌R时，培养基中的蔗糖和硝酸盐可以分别为酵母菌R提供和

（3）从胡萝卜中提取胡萝卜素时，干燥过程应控制好温度和以防止胡萝卜素分解；

萃取过程中宜采用方式加热以防止温度过高；

萃取液浓缩前需进行过滤。

其目的是。

（4）纸层析法可用于鉴定所提取的胡萝卜素。

鉴定过程中需要用胡萝卜素标准品作为

（1）稀释涂布平板法灭菌（防止杂菌污染）

（2）碳源氮源

（3）时间水浴滤去不溶物

（4）（实验）对照

4．（12分）由于酵母菌利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程菌菌种（过程如图甲所示）。

（1）图甲中，过程①需要的酶有_____________。

为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以____________作为唯一碳源。

②、③过程需要重复几次，目的是______

________。

（2）某间学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。

该同学的接种方法是_____________________；

推测该同学接种时可能的操作失误是______________。

（3）以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种________菌的发酵罐需要先排气，其原因是__________________________。

（1）限制性内切酶和DNA连接酶淀粉分离纯化（PS：

关键点在第二步操作中的“选取”）

（2）稀释涂布法菌液稀释浓度较大

（3）工程酵母菌工程酵母菌利用淀粉能力更强，产生CO2速率更快

（4）较小

5、【生物—选修1：

（15分）植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。

回答下列问题：

（1）分解秸秆纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中葡萄糖苷酶可将分解成。

（2）在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成色复合物，用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上回出现以该菌的菌落为中心的。

（3）为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）

酵母膏

无机盐

淀粉

纤维素粉

琼脂

CR溶液

水

培养基甲

+

—

培养基乙

注:

“+”表示有，“—”表示无。

据表判断，培养基甲（填“能”或“不能”）用于分离和签别纤维素分解菌，原因是;

培养基乙（填“能”或“不能”）用于分离和签别纤维素分解菌，原因是。

（1）纤维二糖、葡萄糖

（2）红、透明圈（3）不能、液体培养基不能用于分离单菌落

不能、培养基中没有纤维素，不会形成CR纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌

6.[生物——选修1：

生物技术实践]（15分）为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。

（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。

在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是__________________________________________；

然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入稀释液；

经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37,据此可得出每升水样中的活菌数为___________。

（2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过___________灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是___________。

（3）示意图A和B中，________表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。

（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养，结果发现：

振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。

分析其原因是：

振荡培养能提高培养液中________的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高________的利用率。

（1）检测培养基平板灭菌是否合格×

107

（2）灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落

（3）B（4）溶解氧营养物质

7.（16分）铁皮石斛是我国名贵中药，生物碱是其有效成分之一，应用组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎（简称PLBs，类似愈伤组织）生产生物碱的实验流程如下：

在固体培养基上，PLBs的重量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如图17所示，请回答下列问题：

⑴选用新生营养芽为外植体的原因是，诱导外植体形成PLBs的过程称。

⑵与黑暗条件下相比，PLBs在光照条件下生长的优势体现在，，。

⑶脱落酸（ABA）能提高生物碱含量，但会抑制PLBs的生长。

若采用液体培养，推测添加适量的ABA可提高生物碱产量。

同学们拟开展探究实验验证该推测，在设计实验方案是探讨了以下问题：

①ABA的浓度梯度设置和添加方式：

设4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复。

因ABA受热易分解，故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基后按比例加入。

②实验进程和取样：

实验50天完成，每10天取样，将样品（PLBs）称重（g/瓶）后再测定生物碱含量。

如初始（第0天）数据已知，实验过程中还需测定的样品数为。

③依所测定数据确定适宜的ABA浓度和培养时间：

当某3个样品（重复样）的时，其对应的ABA浓度为适宜浓度，对应的培养时间是适宜培养时间。

8.（11分）有机磷农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。

研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解，分离降解苯磺隆的菌株和探究其降解机制的实验过程如图甲、乙所示。

⑴微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、___________________四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是________________________________________________________________。

⑵与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和________________，这些植物激素一般需要事先单独配制成___________保存备用。

⑶纯化菌株时，通常使用的划线工具是____________。

划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。

造成划线无菌落可能的操作失误有____________________________________________________________________________________。

⑷为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。

该实验的假设是_____

_____________________________________________，该实验设计是否合理为什么______________________

_____________________________________________。

【答案】⑴无机盐和氮源只有能降解利用苯磺隆的菌株才能生存繁殖成菌落⑵细胞分裂素母液

⑶接种环（或接种针）接种环在二区划线前未冷却即划烫死了菌种，或不小心从一区末端的空白处划线

⑷目的菌株通过分泌蛋白酶来降解苯磺隆不合理，因为该菌种的培养液中已含有分泌出的蛋白酶，对实验结果会带来干扰。

正确做法是，将上清液先经高压蒸汽灭菌后再做图乙实验。

9.（8分）为了获得纯正的胡萝卜素产品,某小组开展了产ß

-胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。

请回答下列问题:

（1）实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是;

为了减少灭菌后器皿被污染,灭菌前应该。

（2）为了筛选出酵母菌,培养基中添加了青霉素,其目的是。

（3）右图是灭菌锅及其局部剖面示意图,图中甲、乙、丙指示的依次

是。

（填序号）

①安全阀、放气阀、压力表②放气阀、安全阀、压力表

③安全阀、放气阀、温度表④放气阀、安全阀、温度表

（4）为了将分离到的菌株纯化,挑取了菌落在3块相同平板上划线,结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长,最可能的原因是。

（5）为增加纯正的胡萝卜素提取量,在研磨酵母细胞时,添加石英砂的目的是;

研磨时（填“需要”或“不需要”）添加CaCO3,理由是。

30.（8分）

（1）干热灭菌和湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）用牛皮纸（报纸）包扎器皿

（2）抑制细菌（放线菌）生长（3）淤（4）接种环温度过高,菌被杀死

（5）有助于研磨充分不需要茁鄄胡萝卜素较耐酸

10.玉米是重要的粮食作物，经深加工可生产酒精、玉米胚芽油和果糖等。

流程如下：

（1）玉米秸秆中的纤维素经充分水解后的产物可被酵母菌利用发酵生产酒精。

培养酵母菌时，该水解产物为酵母菌的生长提供________。

发酵过程中检测酵母菌数量可采用_______法或稀释涂布平板法计数。

（2）玉米胚芽油不易挥发，宜选用_______法或________法从玉米胚芽中提取。

（3）玉米淀粉经酶解形成的葡萄糖可在葡萄糖异构酶的作用下转化成果糖。

利用________技术可使葡萄糖异构酶重复利用，从而降低生产成本。

（4）利用PCR技术扩增葡萄糖异构酶基因时，需用耐高温的_______催化。

PCR一般要经历三十次以上的循环，每次循环包括变性、_______和_______三步。

（1）碳源；

显微镜直接计数

（2）压榨；

萃取（注：

两空可颠倒）

（3）固定化酶

（4）（Taq）DNA聚合酶；

（低温）复性（或退火）；

（中温）延伸