犬的发情及阴道涂片鉴定法Word文档格式.docx
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（1）嗜中性粒细胞
（2）红细胞
（3）鳞状上皮细胞
鳞状上皮细胞根据细胞的大小和角化程度，将其进一步分类，可将其分为：
a.小基底细胞
b.轻度增大的副基底上皮细胞
c.最大的未角化鳞状上皮细胞（也称中间细胞）
2、阴道涂片上的细胞种类：
基细胞、副基细胞、中间细胞、表面细胞、红细胞、白细胞、肿瘤细胞及细菌；
（1）基细胞：
初期的上皮细胞非常少见，胞质内含有少量嗜碱性颗粒。
（2）副基细胞：
阴道涂片中最小的上皮细胞；
核/质比率高，核圆，胞质中含有少量的嗜碱性颗粒，也可能含有液泡，形态和大小不规则。
（3）中间细胞：
核/质比低，角化程度高。
大小不一，形状不一，但比副基细胞的直径大2～3倍。
（4）表面细胞：
涂片中最大的上皮细胞，老化程度高，核固缩或缺失（角化）多边扁平。
（5）其他细胞：
发情前期可见大量红细胞，会持续到发情期末甚至间情早期，在间情期可见较多中性粒细胞，其他少见。
A、乏情期
（1）母犬乏情期不会出现阴道肿胀，也不会吸引公犬。
（2）阴道涂片：
主要发现未角化的磷状上皮细胞（带有圆形边缘的大细胞、丰富的嗜碱性细胞浆和一个大而圆的细胞核）；
根据大小，将其分为中间细胞、副基底或基底上皮细胞；
涂片可能含一些嗜中性粒细胞，但不会出现红细胞。
乏情期的时间长度不等，但通常持续时间不超过4.5个月。
B、发情前期
（1）母犬外阴肿胀，伴有红色分泌物，持续4～13天，平均9天。
发情前期，又可分为发情前早期和发情前晚期。
（2）阴道涂片
发情前早期：
大量RBC伴随基底和副基底上皮细胞一起出现，随着发情前期的继续，RBC的数量逐渐减少，而上皮细胞出现角化迹象，如细胞核固缩。
发情前晚期：
几乎所有的上皮细胞都表现为伴有核固缩的中间细胞，少量嗜中性粒细胞有时会出现在发情前期的样品中，特别早期。
C、发情期
（1）母犬应该在近期出现发情前期的迹象和外阴肿胀，可能伴有粉色或淡黄色分泌物，随着发情间期的接近，颜色会变白。
显示所有的鳞状上皮细胞为角化状态，通常无核；
无中性粒细胞，可能会有少量的RBC；
发情末期，RBC继续下降，同时嗜中性粒细胞急剧上升，发情期一般持续4～13天，平均9天。
D、发情间期
（1）外阴肿胀消失，无血。
角化的鳞状上皮细胞被未角化的鳞状上皮细胞和细胞碎屑代替。
发情期后的大约10天，所有的上皮细胞均是未角化的。
嗜中性粒细胞数量的增加，直到发情间期的第3天，然后至第10天下降至少量，一般无RBC。
关于母犬的性周期教你适时配种
母犬的发情与配种是繁殖工作的一个重要环节。
只有正确地掌握母犬的性周期性变化和排卵时期，才能做到适时配种，提高受孕率和繁殖力。
一、母犬的性周期
在繁殖学上，根据犬的不同性生理变化，把犬性周期分为四个阶段，即发情前期、发情期、发情后期和乏情期。
1、发情前期：
从阴户滴出带有鲜血的粘液开始，到接受公犬爬跨，约8日左右（8.2土2.5日）。
在这个时期，卵巢中上一个发情周期所产生的黄体逐渐萎缩，新的卵细胞开始生长；
子宫腺体略有生长，生殖道轻微充血肿胀，腺体逐渐增加。
其外部表现阴户逐渐充血肿大，排尿次数增加而量少，尿液吸引公犬嗅闻。
母犬兴奋不安，喜欢接近公犬并与其戏耍，但无性欲表现（不接受公犬爬跨）。
阴道涂片检查时，主要有核上皮细胞和多量红细胞和少量嗜中性白细胞。
2、发情期：
从接受公犬爬跨开始到不接受爬跨为止，即从阴户滴血的8－18日。
母犬的外阴呈现充血肿胀状态，随着时间的增长，充血肿胀程度逐渐加强，到发情盛期达到最高峰；
子宫角和子宫体呈充血状态，肌层收缩加强，腺体分泌活动增加；
子宫颈管道松弛；
卵巢的卵泡发育很快，多数在发情中期排卵。
从外部表现看，早期阴户肿大，未期有所消退，滴出的带血粘液减少，色由鲜红变为淡红，母犬排出的气味显著诱惑公犬追逐和爬跨，当公犬舔其阴户或爬跨时，其四肢站立不动，尾翘起并偏向一侧，阴户屡屡上提，出现性欲要求，交配易成攻。
阴道涂片检查时，主要为角质化上皮细胞，缺乏嗜中性白细胞，红细胞早期较多，末期减少。
3、发情后期：
发情期过后，即进人发情后期，约持续10日左右，母犬由发情的性欲激动状态逐渐转入安静状态；
子宫颈管道逐渐收缩，腺体分泌活动渐减，粘液分泌量少而粘调；
子宫内膜逐渐增厚，表层上皮较高，子宫腺体逐渐发育，卵泡破裂，排卵后开始形成黄体。
其外部表现为，阴户滴出带血粘液进一步减少，色由淡红变成暗红或无色，肿大消退，多数犬不接受爬跨。
阴道涂片检查时，重新出现有核上皮细胞和嗜中性白细胞，缺乏红细胞和角质化细胞。
4、乏情期：
指发情后期之后到下次发情前期之间，约6个月左右（7.0土1.5月）。
此时母犬的性欲已完全停止，其精神状态已完全恢复正常。
在早期，子宫内膜增厚，表层上皮呈高柱状，子宫腺体高度发育，增大弯曲，腺体分泌活动旺盛；
在后期，增厚的子宫内膜回缩，呈矮柱状，腺体变小，分泌活动停止；
卵巢的黄体已发育完全，因此这个时期为黄体活动时期。
其外部表现为阴户干瘪，无带血粘液滴出，不愿接近公犬，不容许公犬爬跨，公犬对其尿液和身体气味不感兴趣。
阴道涂片检查时，主要有核上皮细胞和少量嗜中性白细胞，缺乏红细胞。
二、影响母犬性周期的因素
1、季节：
犬有季节性繁殖的特点。
一般情况下，母犬一年发情两次，每次间隔约6个月左右。
单养犬多数在春秋两季发情（3－5月，9－11月）；
群养犬（如比格犬）四季各阶段都有发情，季节性不明显，另外，据
Marshall（1906）和
heape（1900）报道，在南美的野生犬和北极圈饲养的犬，也有一年发情一次的，季节性也不明显。
2、年龄：
由于年龄增大，老龄犬身体代谢机能下降，发情周期出现紊乱，往往使乏情期延长，而发情前期和发情期缩短。
3、初情期：
一般小型犬初情期来的早些（如比格犬初情期时间为6－7月龄），大型犬初情期晚些（如德国牧羊犬初情期则在8－10月龄）。
初情的犬，发情前期和发情期都较长。
另外，营养和环境温度也影响初情，营养水平高的较营养水平低的早，热带的较寒带或温带的早。
4、营养：
由于营养缺乏或过剩（肥胖），也会延长乏情期或导致异常发情。
5、疾病：
由于卵巢囊肿、子宫蓄脓等生殖器官疾病往往导致乏情期时间过长，或不发情。
还有，上一窝产仔过多、连产几窝等，母犬机体没能很好地得到调整恢复，也会导致乏情期过长。
6、母犬异常发情：
（1）安静发情。
母犬缺乏发情表现，但其卵巢的卵泡仍发育成熟而排卵。
三、排卵时期与排卵数
1、排卵时期。
母犬发情期，即从接受公犬交配开始，39－48小时，未排卵的犬仍占大多数，到90小时后，未排卵的犬就占少数了，排卵过程一直持续到96小时，才全部结束。
左右卵巢在排卵时无时间差异。
总之，母犬排卵时期从发情初期就开始，一般用以下两点进行判断：
①发情滴血第8－14日开始排卵（11.2土3.0天），②从母犬接受公犬爬跨的第2日或第3日开始排卵。
2、排卵数。
犬是多胎动物，在一次发情中左右卵巢可排几个到十几个卵子（6.0士1.7）。
小型犬排卵数少些，大型犬排卵数多些，老龄犬、过肥犬排卵数少些，青壮年犬排卵多些。
犬的排卵数可根据出生胎儿数进行推断，也可通剖解检查卵巢黄体位点，进行准确判断。
一般情况下，排卵数约89％受孕、妊娠，极少在受孕后胚胎死亡或融解。
四、适时配种
母犬发情后，要想做到适时配种，就必须掌握排卵受孕的最佳时期。
据报道，在排卵前54－41小时交配，卵子受孕率为79％；
在排卵开始到120小时之间交配，卵子受孕率为83％，这是卵子受精最佳时间。
因此，交配时机不能过迟或过早。
过迟卵子失去受精能力，过早精子失去活力或死亡。
在母犬接受交配后2-4日间（即接受交配后60－108小时）交配，受孕率和产仔率最高。
五、母犬发情时应注意的事项
1、加强饲养管理，不能随意散放，严防乱配，导致品种混杂。
2、加强卫生消毒工作，保证周围环境和阴户卫生，防止生殖道感染。
3、如果正在训练中的母犬发情，一般不宜再进行训练，要停训半个月左右。
因为发情的母犬兴奋不安，寻求公犬，易产生外抑制，服从性也下降。
4、每日要认真观察记录发情征候，准确掌位发情进入的阶段，以便做到适时配种。
六、配种时应注意的事项
1、初情母犬一般不宜配种，因此时只是性成熟，身体未达到完全成熟，否则会导致自身生长发育受阻，同时也会使繁殖力下降。
2、初配年龄。
一般母犬为1.5岁（以第2次发情时交配为宜），公犬为2.0岁。
3、交配次数。
母犬在一次发情中，配l－2次，两次间隔以48小时为好。
公犬一年配种40－6O次，一周之内不超过2次为佳。
4、交配的时间与地点。
南方夏季在早晚进行，北方冬季应上午或下午进行。
地点应选择清静的环境，最好是公母犬都熟悉的地方，这对胆小的母犬尤为重要，避免人群影响交配。
5、性经验。
初配的母犬，由于缺乏性经验，特别是从小单养的又没接触过公犬的，即使已到发情时，也不让交配，这时只有主人辅助进行（一手抓脖圈一手托下腹部）。
初配的公犬，由于缺乏性经验，一旦与母犬接触，往往慌张犹豫，或不经勃起即行爬跨，或出现不完全的性行为，经过几次才能进行正常的性行为。
为此应温和对待，否则容易造成性抑制。
最好是先让一头有性经验母犬与其配种。
6、公犬性抑制。
营养和运动不足、性经验缺乏、公犬连配数头母犬等，都会导致公犬性抑制。
除此之外，通常都是由于错误或粗暴的管理导致性抑制。
在采精时某些不正确的操作也会造成性抑制。
因为性抑制往往是由于交配或采精时的恐惧、痛感和干扰引起的，结果还会变成阳萎。
7、配前性刺激。
在交配前不久，通过感觉的性刺激对配种很有利。
应当让公母犬一块游戏、追逐一段时间，适当地牵制公犬的性行为。
几次的空爬跨，不会因此引起性抑制，经过5－10分钟和4—6次这样的起落的徒劳爬跨，最后反而能提高公犬的射精量和精液浓度，精子活力也良好。
配前性刺激不但能提高射精的容量，改进精子密度和活力，而且能引起释放促黄体素，随即提高血中膏酮的浓度。
8、三配三不配和一早一迟：
有相同优点、青年犬之间、公犬等级高于母犬的配；
三不配：
有相同或相反缺点的、老龄犬之间、公犬等级低于母犬的不配；
一早一迟：
老龄母犬宜早配（以滴血8-10日配），青年母犬宜迟配（以滴血12－14日配）
交配时的注意事项
确定女生狗处于排卵高峰期后．饲主就应该赶紧把握狗狗交配的‘‘黄金周”，也就是要在5天之内让女生狗与男生狗进行交配。
但是，即使狗狗处于排卵的高峰期，也不见得交配一次就能成功，还要看双方的意愿及狗狗是不是有这方面的经验。
如果两只狗狗真的无法顺利交配，就只好劳烦饲主出场助阵或请有经验的亲友及动物医师协助。
如何把握徘卵的高峰期
想让狗狗受孕，一定要等到它达到排卵的高峰期，才有机会成功。
整个发情的期间约3周．从狗狗阴部出现出血开始算起为第1天，然后从第9天到第15天是最容易配种的的期。
配种前请动物医帅做一下阴道抹片检查．可以检测出排卵的时期，这是—种发情检查。
如何提高受孕的几率
一般家庭为狗狗配种，参半都是亲朋好友养了一只男生狗．而只—方养了一只女生狗，就想要让它们交配生小狗。
如果狗狗双方都没经验，甚至会出现男生狗没兴趣或女生狗不愿意的情形。
为了避免双方“不来电”的尴尬情形，你可以让女生狗狗在发情的第1天开始就
利男生狗狗多相处，让它们彼此认识、熟悉对方．等到第9天要正式配种的时候，两只狗狗比较容易“情投意台，让它们自己主动交配是最好不过的。
大部分的男生狗一闻到女生狗发情的气味．都会产生强烈的欲望。
但是若不懂怎么做，也是个大问题。
就算双方都有意思，却不知道应该采取什么行动．就会出现男生狗已经趴到女生狗背后了，却怎么样都无法进入正确位置的状况。
有时还会出现男生狗趴在女生狗的头上胡冲乱撞的场面。
当这种不进入状况的现象出现时，就需要饲主的协助．帮男生狗手淫，然后再将男生狗的生殖器放入女生狗的阴道内。
如果能够由有经验的医师来操作，比较不会弄伤狗狗。
你可以询问宠物店或宠物美容院的老板，请他们帮助你。
只要让狗狗有过一次配种经验，下一次就不会那么青涩情懂了。
除了自然支配之外．动物医师也可以帮狗狗人工受孕，方法是用空针筒简取得男生狗的精液．然后用导尿管蘸一点凡士林，放入女生狗的阴道里．间接完成授精的过程。
少了身体直接接触的过程，照样可以生出健康的小宝宝。
想要迎接新的小生命．饲主—定要先了解女生狗的排卵高峰期，然后安排狗狗交配两次。
两次中间要间隔一大．最好不要连续交配，这样受孕变就率提高许多。
母犬发情和适时配种鉴定技术研究现状
公安部南京警犬研究所潘寿文方建强
一、研究现状
母犬发情周期平均为6个月，发情周期的特点与其它家畜有较大区别。
尤其是排卵时间在发情期间的变化范围较大，因而确定其准确的配种时间比较困难。
对此国内外曾有大量研究，Evans等（1933）认为，阴道上皮细胞角质化的变化程度不能说明母犬的排卵时间。
Bouchard等（1991）在正常母犬发情周期中，在检测阴道上皮细胞角化动态的同时连续进行了血浆孕酮、LH的RIA和ELISA法测定，结果发现，两者的变化是一致的，接受交配前4天，角化上皮细胞比例达到80％，LH达到峰值，阴道上皮细胞的动态变化与母犬发情周期中激素内分泌变化呈线性关系。
依据这种相关关系进行适时交配，取得了满意的结果。
Newberry（1952）研究结果得知，当角质上皮细胞达到高峰，缺乏嗜中性白细胞，有核上皮细胞难以看到，红细胞也很少时，母犬进入发情期，开始排卵。
此阶段母犬的外部行为表现为接受公犬爬跨或配种，表明已真正进入发情旺期，此时配种受胎率就高。
公安部南京警犬研究所董君艳等人2004年研究指出，犬的排卵发生于发情期初期，排卵后发情还持续很长一段时间，这是犬不同于其他家畜的特征。
每次排卵数可根据产仔数来推测，排出的卵约89％可受精妊娠，犬的排卵是从允许交配第48小时开始，最迟于第72小时全部结束（12小时之内）。
石河子警犬研究所的试验结果表明，自然发情母犬的阴道上皮细胞角质化变化与Bouchard的报道相似，根据他的试验结果认为，母犬发情出血时间和“立定反射”以及阴道涂片相结合的发情鉴定，可以用于预测和确定母犬最适交配时间。
通过对10只母犬的阴道细胞检查发现，在发情前期向发情期过渡时，浅层细胞增多，且逐渐角质化。
在接近排卵时，看到的几乎都是角质化的表皮细胞（80％～90％）。
最大角质化程度持续1～6天，平均为2．6天，这期间阴道粘膜为白色、干燥、浮冰样堆积非常明显，阴道分泌物非常少，主动接近公犬，接受交配。
自然发情的中型母犬在发情出血后的第十一～十三天角化上皮细胞比例均超过80％，可依据阴道涂片法辅助确定母犬发情的适配时间。
Grunnert（1995）还研究指出，阴道上皮的组织学结构受雌激素的影响很大。
在间情期，阴道粘膜由2～3层非角质化的扁平细胞覆盖。
进入发情前期，在雌激素的影响下，细胞层开始增生，且表层细胞逐渐角质化，最大程度的细胞增生可以达到20层。
角质化的过程主要发生在发情期。
从发情后期开始，阴道上皮逐渐退化。
阴道细胞学检查的目的，即在此基础上达到认识发情周期的时间、辅助鉴定排卵时间及卵巢病变等。
目前国内外常用的确定母犬配种时间的方法主要有以下几种，即根据母犬阴道出血时间、接受交配情况、阴道检查、阴道细胞学检查、阴唇的肿胀程度、血液的孕酮测定、通过B超对卵泡发育情况的检查等，但以上方法均很难把握母犬的准确排卵时间。
目前，我们通常根据母犬阴道出血的时间，并在发情期增加配种次数的方法解决犬的繁殖问题。
国外确定母犬的排卵时间更多的是把阴道细胞学检查、B超检查和孕酮检测方法结合起来，以便较准确地确定母犬的排卵时间。
但后两种方法所需仪器设备值较高，一般的单位部门目前还很难满足。
二、研究与展望
（一）阴道细胞学变化规律的运用及其意义：
综合国内外研究表明，在母犬繁殖生理正常的情况下，阴道垢物细胞种类及比率，随不同生理阶段而呈明显的规律性变化，是一个重要的生理指标。
可以作为鉴定发情旺期和确定配种适期的重要参考依据。
综合本文及Simons（1970）、Newberry（1952）研究结果得知，当角质上皮细胞达到高峰，缺乏嗜中性白细胞，有核上皮细胞难以看到，红细胞也很少时，母犬进入发情期，开始排卵。
此阶段母犬的外部行为表现为接受公犬爬跨或配种，表明以真正进入发情旺期，此时配种受胎率就高。
同时，根据阴道细胞学的变化，还可以诊断母犬发情是否正常。
按细胞学的变化规律，可以减少只凭外阴部变化决定输精的误差。
当母犬阴道或子宫发生炎症时，阴道垢物涂片则出现有大量的嗜中性白细胞，当非角质化的上皮细胞有结成团块时，区别炎症和发情前期或发情后期是困难的。
但是，若嗜中性白细胞和角质化上皮细胞同时出现，则表明有炎症。
因为在正常情况下，这两种细胞类型不会一起出现。
国内外阴道垢物涂片研究结果比较见表7。
表7国内外阴道垢物涂片研究结果比较
研究者
发情前期
发情期
发情后期
乏情期
潘寿文等（1989）
大量红细胞、上皮细胞、白细胞
较多红细胞、角质化细胞
上皮细胞、白细胞
Northway
（1972）
上皮细胞、红细胞、少量白细胞
角质化细胞、红细胞
上皮细胞、白细
胞
Harrop
（1960）
红细胞、后期出现角质化细胞
角质化细胞、后期出现白细胞
白细胞增多、少
数上皮细胞
Griffiths（1939）
红细胞、角质化细胞
多数白细胞、少数有核上皮细胞
多数有核上皮细胞、白细胞
（二）阴道垢物的采样及制片应当注意的几个问题
1阴道垢物采样前，应对母犬外阴部及其采样器具进行消毒，以防将尘埃和致病菌带入母犬阴道内。
2采样时，应尽量减少刺激量，器具轻进、轻出，不损伤外阴及阴道壁。
3采样器具插入阴道内10厘米左右处，不得或深或浅，以免引起垢物性状和细胞成分的改变，影响分析结果；
制片应均匀一致，减少细胞堆集，以免影响对细胞的分类计数。
（三）适时配种鉴定技术方法比较
外阴检查方法简单易行，操作方便，几乎不需要投入仪器设备，实践中多用此法，但对操作人员的经验水平要求较高，一般需要有多年的繁育工作经验才能较准确把握，但即使如此，因犬的个体差异性和生理机能的不同，该方法的准确性、科学性有待进一步提高。
阴道检查法是在专用光源的帮助下，观察阴道黏膜颜色及分泌物等。
判定母犬发情期的不同时期主要根据阴道黏膜的颜色变化、黏膜的肿胀情况及分泌物的多少。
发情期：
阴道粘膜颜色趋白色，阴道粘膜肿胀皱褶增生，分泌物少、呈肉水样，对于确定母犬的发情具有一定的说服力，而且不需投入更多的仪器设备。
但此鉴定方法，多凭经验积累，少量化、主观性强。
阴道细胞学检查借助普通显微镜，观察阴道分泌物的细胞构成比率。
在母犬发情期的前期，有核上皮细胞和嗜中性白细胞几乎完全消失，红细胞约有30%左右；
大量的主要是角质化细胞，约有80%左右；
母犬发情期的后期，大量的仍然是角质化细胞。
与前期比较略许见少，红细胞减少大半，有核上皮细胞逐渐增多，亦见有少量的嗜中性白细胞。
其结果具有快速简便、准确易行等特点，国内目前也多有运用，应该注意，阴道细胞学检查并不能判定出现促黄体素峰和排卵时间，但据此可推断周期阶段。
通过实践，腹腔镜检查法很难实现，因为犬的卵巢不同于其他家畜能看见，多数母犬的卵巢被厚厚的脂肪所包围，很难看到卵泡的发育情况。
在实践中，此方法是否可行，还有待于在以后的工作中作进一步研究论证。
孕酮测定是到目前为止确定母犬排卵时间的范围最可靠的方法，可以比较准确地确定排卵时间，从而提高配种受胎率。
但孕酮测定工作量大、成本较高，多运用于个体研究，实际工作中的运用相对较少。
通过口腔液镜检来鉴定母犬最佳配种时间的方法，可以在一定程度上提高母犬的受孕率和产仔数，是目前在母犬发情配种鉴定上的一种较为简便实用易掌握的方法，与平时的经验判断基本是相吻合的，可以作为经验判断法的补充和确定。
B超检查方法能够较为准确的确定母犬的发情排卵，但因对B超仪器的质量要求及操作人员的技术要求均很高，因而也较多的运用于个体研究，实际工作中很难普及运用。
判断犬的最佳交配时间交配攻略
从发情，到交配这段日子，每天都要细心观察，错过机会，一等就是半年。
1）只要母犬在舔自己的外阴部肯定发情。
2）出血母犬，刚发情外阴有点肿大，外阴底部（接近肛门）有一小节硬管，您用手轻轻的揉几下，会出现很少很浓的黑红色血，可以断定发情。
a、4～5天，血色变成鲜红而多，外阴长大，外阴底部同样大而硬。
b、5～9天，血色微微浅一点，而血少一点，外阴会长得很大，外阴顶部肿得像水蜜桃一样，外阴底部管没有了，但硬度有。
c、9～13天，血色变成很淡很淡，像淡茶水一样，或根本看不见血，外阴顶部已经出现皱纹，根部渐渐变软，这也是母犬的最佳排卵期，母犬可以和公犬交配（初次发情可能晚1～2天）。
d、发情的前6～9天，不让公犬接近，9～13天，才能逐渐让公犬接近，最佳排卵期母犬会主动接近公犬，并以臀部挑逗公犬。
e、9～13天，人工检查，把母犬抱起来用手指头，轻轻触及外阴时，母犬的阴部会动得很厉害，尾巴倒向一侧，您再摸一摸外阴底部，很软，也是最佳交配期。
母犬发情周期介绍及注意事项
一、母犬的性周期
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