学校种子健康教案.docx

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学校种子健康教案

《种子检验技术》教案

授课题目

种子健康测定

知识点

技能点

1、种子健康测定目的和重要性2、种子健康测定方法的特点

1、未经培养的种子健康测定方法2、培养后的真菌检测种子健康测定方法

教学目标

通过种子水分含义及测定的重要性、种子水分测定的理论基础和水分测定方法和仪器设备掌握标准种子水分测定方法和种子水分快速测定方法。

教学重点

未经培养的种子健康测定方法、培养后的真菌检测种子健康测定方法。

教学难点

未经培养的种子健康测定方法、培养后的真菌检测种子健康测定方法。

教学方式与分析

讲授√探究□问答□实验√演示√练习□

本节课程包含三个知识点，种子健康测定目的和重要性、未经培养的种子健康测定方法、培养后的真菌检测种子健康测定方法。

教学中通过视频及实训等形式让同学们认识并掌握种子健康测定目的和重要性、未经培养的种子健康测定方法、培养后的真菌检测种子健康测定方法。

授课类型

理论课□讨论课□实验课√练习课□演示□练习□

参考资料

[1]国家技术监督局．中华人民共和国国家标准。

农作物种子检验规程．GB/T3543.1~3543.7—1995．北京：

中国标准出版社，1998

[2]潘显政．农作物种子检验员考核学习读本．北京：

中国工商出版社，2006

[3]胡晋．种子检验学．北京：

科学出版社，2015

[4]杜红．种子检验技术．北京：

中国农业出版社，2013

[5]颜启传.种子检验原理和技术.杭州:

浙江大学出版社，2012

[6]颜启传，程式华，魏兴华，曹立勇.种子健康测定原理和方法.北京:

中国农业科学技术出版社，2002

知识点1种子健康测定目的和重要性

（一）种子健康测定目的和重要性

1、种子健康测定的目的

种子健康测定主要是测定种子是否携带有病原菌（如真菌、细菌及病毒）以及有害动物（如线虫及害虫）等的健康状况。

种传病害是指在病害侵染循环中的某一阶段和种子联系在一起，其病原物附着、寄生或存在于种子表面和内部，或混杂于种子中间，主要通过种子携带而传播的一类植物病害。

种子害虫是指在种子田间生长和贮藏期间感染和危害种子的害虫。

2、种子健康测定的重要性

（1）种子携带的病原体可引起田间病害并逐步蔓延，通过种子健康测定可以有效防止和控制病虫的传播蔓延，保证作物产量和商品价值。

（2）通过测定种子样品的健康状况，从而获得比较不同种子批种用价值和种子质量的信息。

（3）防止种子流通将病虫害带到新区。

（4）探明室内种子发芽率低的原因，从而弥补发芽试验的不足。

（二）种子健康测定方法的特点

种子健康测定方法很多，如同种子纯度测定一样，分为田间检验和室内检验。

未经培养检验包括直接检验、吸胀种子检验、洗涤检验、剖粒检验、相对密度检验和软X射线检验等；培养后检验包括吸水纸法、砂床法、琼脂皿法等。

田间检验，病虫表现明显，容易进行检查。

有些病害在田间观察很清楚，而有些病原菌需进行室内检验。

如大麦、小麦的散黑穗病在田间检测很容易，在室内检测则很困难或者费用较高；一些病毒病在种子外表无明显症状，又较难以用分离培养的方法来诊断，田间检验就比较容易确定其带的是什么病原。

印度腥黑穗病很难再田间检验，但在实验室检验时，即使孢子浓度很低也能检验。

具体选择哪种种子健康测定方法主要取决于种子种类、病原的种类以及检测的目的。

例如，对于调查、作出症状处理决定或进行田间评定等目的，只需评定种传病菌感染率；而对于检疫目的或田间高发病率的种传病害，则对种子样品的检测精度要求很高。

由于病虫感染水平和田间发病程度没有直接联系，在许多检测方法中，一般不记录每粒种子的病原数量。

一般要求选用的种子健康测定方法方法具有病原体易于识别、结果有重演性、样品间结果有可比性和简单快速等特点。

但在实际检测过程中，检测结果经常会受到一些因素的影响。

（1）其他病原菌存在，可能干扰被测病原菌。

（2）室内检验结果通常高于田间或温室的检测结果。

（3）有些病原菌对培养条件敏感。

（4）种子已经处理。

（5）种传病原菌生活力随着长时间的贮藏而衰退。

（三）种子健康的标准与处理

种子的健康标准是健康检验的评定依据。

许多国家根据各自的国情，制定了种子生产中各级种子的田间健康标准和室内检验健康标准。

种子经过健康测定后，了解了病原菌的感染情况和程度，可以有针对性地采取措施对种子进行处理，这样既可以大大减轻种传病害的发生，又可以减少农药的使用。

知识点2未经培养的种子健康测定方法

（一）直接检查

直接检查是借助肉眼或低倍放大镜进行检验，此法适用于下列情况：

（1）混杂在种子间的较大病原体如麦角菌、线虫瘿、虫瘿、黑粉菌球、菌核。

（2）感染大量病菌孢子的种子如小麦种子污感染了大量腥黑穗病的孢子。

（3）种子带明显病症的病粒如小麦黑胚病。

测定时将送验样品分出一半试样放在白纸或白色搪瓷盘中，检出麦角菌、线虫瘿、黑粉菌球、菌核及病粒。

称其重量，计算病害感染率。

（4）直接检查也适用于检查明显感染害虫的种子冬季低温时一般先将种子样品放在18~25℃的温度下或保温内加温20~30min，使害虫恢复活动，然后把种子倒在瓷盘内用肉眼或放大镜进行逐粒观察，拣出害虫侵害过的种子，并计算每千克样品中害虫的头数及虫害种子百分率。

（二）吸胀种子检查

为使子实体、病症或害虫更容易被观察到或促进孢子释放，把试验样品浸入水中，或其他液体中，种子吸胀后检查其表面或内部，可用双目显微镜观察。

（三）洗涤检查

洗涤检查用于检验附着在种子表面的病菌孢子或颖壳上的病原线虫。

如玉米种子携带的丝黑穗病菌的冬孢子粘附在玉米种子表面，所以可用洗涤方法检查。

其方法是从送验样品中分取试样2份，每份5g，分别倒入100mL三角瓶内，各加入无菌水10mL，如要使病原体洗涤得更彻底，可加入0.1%润滑剂（如磺化二羧酸酯或肥皂溶液），置振荡机上振荡（光滑种子振荡5min，粗糙种子振荡10min）。

使附着在种子表面的病原孢子洗下来，然后将洗涤液倒入离心管内，在1000～1500r/min离心3～5min。

用吸管吸去上清液，留1mL的沉淀部分，稍加振荡。

用干净的细玻璃棒将悬浮液分别滴于5片载玻片上。

盖上盖玻片，用400～500倍的显微镜检查，每片检查10个视野，并计算每视野平均孢子数，据此可计算病菌孢子负荷量，按下式计算：

式中：

Ｎ―每克种子的孢子负荷量

n1―每视野平均孢子数

n2―盖玻片面积上的视野数

n3―1mL水的滴数

n4―供试样品的重量

（四）剖粒检查

剖粒检查适用于检查隐藏在种子内部的害虫，如豌豆象、蚕豆象。

方法是在送验样品中分取试样5~10g（大粒种子10g，中粒种子5g），逐粒用刀切开种子的被害或可疑部位，检查害虫（包括成虫、幼虫、蛹、卵）头数，计算计算每千克样品中害虫的头数。

（五）染色检查

1、高锰酸钾染色法

适用于检查隐蔽的米象、谷象等危害的禾谷类种子。

方法是取试样15g，除去杂质，倒入洞丝网中，于30℃水中浸泡1min，再移入1%高锰酸钾溶液中染色1min，取出用清水漂洗20~30min，倒在白色吸水纸上用放大镜检查，挑出粒面上带有直径0.5mm左右的黑斑的即为害虫种粒，可结合剖粒检查查出害虫头数，计算害虫含量。

2、碘或碘化钾染色法

适用于检验豌豆象。

取试样50g，除去杂质，放入铜丝网中或用纱布包好，浸入1%碘化钾溶液或2%碘酒溶液中1～1.5min，取出移入0.5%的氢氧化钠溶液中浸30s，取出用清水冲洗15～20s，用放大镜或肉眼检查，如豆粒表面有1～2mm直径的黑圆斑点即为豆象感染种粒，挑出进一步检查，计算害虫含量。

（六）相对密度（比重）检查

被米象、谷蠹、豆象和麦蛾危害过的种子与健康种子间存在相对密度差异，用不同密度的溶液区分沉浮，然后捞取浮种进一步检查。

方法是取试样100g，除去杂质，倒入食盐饱和溶液中（食盐35.9g溶于1000mL水中），搅拌10～15min，静置1～2min，将悬浮在上层的种子取出，结合剖粒检验，计算害虫含量。

（七）软Ｘ射线检查

软Ｘ射线检查是利用种子害虫组织与种子组织密度及对X射线吸收的差异，检查种子内隐匿的害虫（如蚕豆象、玉米象、麦蛾等），通过照片或直接从荧光屏上观察。

害虫主要由蛋白质和脂肪等有机成分组成，其组织密度比种子小，X射线透过量较多，而正常种子组织的透过量较少。

经X射线照射，隐匿在种子内部的成虫、幼虫、蛹、粪便和虫蛀孔清晰可辨，据此可确定种子虫害的类型及其部位。

知识点3培养后的真菌检测种子健康测定

试验样品经过一定时间培养后，检查种子内外部和幼苗上是否存在病原菌或其症状。

根据培养基不同，可分为以下3类。

（一）吸水纸法

吸水纸法适用于许多类型种子的种传真菌病害的检验，尤其是对于许多半知菌，有利于分生孢子的形成和致病真菌在幼苗上症状的发展。

为了促进孢子形成，建议在培养期间给与12h黑暗与12h近紫外灯（NUV）的交替处理。

建议光源使用“黑光”荧光灯（波长为360nm），日光荧光灯效果也好。

操作程序为：

①在培养皿中放入3层吸水纸，用无菌蒸馏水湿润，沥去多余水分；②数取试样400粒，重复4次，把种子排列在纸上，保持一定距离（约1cm），盖好培养皿；③放在20℃条件下让种子吸胀1d；④在-20℃下冷冻过夜，杀死种子；⑤在18~20℃和每天12h黑暗与12h近紫外灯光照交替处理下培养（培养的时间视所培养的真菌种类而定，一般为5~7d），培养皿位于距光源40cm处；⑥在体视显微镜下观察，观察时用冷光，以防止孢子结构脱水。

检查种子内部病菌时，种子应进行表面消毒，即把种子浸入1％有效氯的次氯酸钠溶液中10min，置于消毒过的培养皿内。

1、水稻稻瘟病检测

取试验样品400粒种子，将培养皿（9.5cm）里的吸水纸用水湿润，每个培养皿播入25粒种子加盖保湿；将播好的种子在22℃用12h黑暗和12h近紫外光照的交替周期培养7d。

在12~50倍放大镜下检查每粒种子上的稻瘟病分生孢子，稻瘟病菌会在颖片上产生小而不明显的灰色至绿色的分生孢子，成束地着生在短而纤细的分生孢子梗的顶端。

菌丝很少覆盖整粒种子。

如有怀疑，可在200倍显微镜下检查分生孢子来核实。

典型的分生孢子是倒梨形，透明，基部饨圆，具有短齿，分两隔，通常具有尖锐的顶端，大小为（20~25）μm×（9~12）μm。

2、水稻胡麻叶斑病检测

取试验样品400粒种子，将培养皿（9.5cm）里的吸水纸用水湿润，每个培养皿播入25粒种子加盖保湿；将播好的种子在22℃用12h黑暗和12h近紫外光照的交替周期培养7d。

在12~50倍放大镜下检查每粒种子上的分生孢子，胡麻叶斑病菌会在种子上严生真菌的分生孢子梗，也可在种子上产生淡灰色气生菌丝，并全部或部分覆盖其上，有时病菌会蔓延到吸水纸上。

如有怀疑，可在200倍显微镜下检杳分生孢子来核实。

其分生抱子为月牙形，（35~170）μm×（11~17）μm，淡棕色至棕色，中部或近中部最宽，两端渐渐变细变圆。

3、十字花科的黑胫病（即甘蓝黑腐病）检测

取试样种子1000粒，每个培养皿垫入3层滤纸，加入5ml0.2%（m/V）的2,4-二氯苯氧基乙酸钠盐（2，4-D）溶液，以抑制种子发芽。

沥去多余的2，4-D溶液，用无菌水洗涤种子后，每个培养皿播50粒种子。

在20℃用12h黑暗和12h光照交替周期下培养11d。

经6d后，在25倍放大镜下检查长在种子和培养基上的甘蓝黑腐病松散生长的银白色菌丝和分生孢子器原基。

经11d后进行二次检查，即检查感染种子及其周围的分生孢子器。

记录已长有甘蓝黑腐病分生孢子器的感染种子。

（二）琼脂皿法

琼脂皿法主要适用于发育较慢的、潜伏在种子内部的致病真菌，也可用于检验种子外表的病原菌。

操作程序为：

①将试验样品用1％~2％的次氯酸钠溶液作表面消毒后，用无菌水洗涤；②把己经灭菌的琼脂到入培养皿（9cm）中，待其凝固并冷却后，把预处理过的种子间