真核生物蛋白质生物合成的起始及真核生物与原核生物转录与复制的区别Word文件下载.docx

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elF2与GTP有很高的亲和力，因此能再进入活性状态并再与Met-tRNAMet结合。

在这个循环过程中，elF2的三个亚基之一elF2α对磷酸化敏感。

磷酸化的elF2与elF2B形成的复合物甚稳定，不易解离，从而降低了elF2的可利用性。

真核细胞蛋白质生物合成的起始步骤可概括为：

（1）形成43S核糖体复合物;

由40S小亚基与elF3和elF4c组成。

（2）形成43S前起始复合物:

即在43S核糖体复合物上，连接elF2-GTP-Met-tRNAMet复合物。

　　（3）形成43S前起始复合物:

由mRNA及帽结合蛋白1（CBP1）、elF4A、elF4B和elF4F共同构成一个mRNA复合物。

mRNA复合物与43S前起始复合物作用，形成48S前起始复合物。

　　（4）形成80S起始复合物:

在elF5的作用下，48S前起始复合物中的所有elF释放出，并与60S大亚基结合，最终形成80S起始复合物，即40S亚基-mRNA-Met-tRNAMet-60S亚基。

　　在真核生物蛋白质生物合成的起始阶段，值得一提的是40S核糖体亚基几乎总是选择第一个起始密码子AUG，开始对mRNA翻译，这种选择比原核细胞对起始密码子的选择方式更简单些。

首先，AUG是唯一的起始密码子，而在原核细胞（E.coli）可作为起始密码子的三联体除AUG外，还有GUG，UUG，甚至AUU也可被利用。

其次，定位在mRNA5'

末端的AUG（通常距5'

末端10-100个核苷酸）总被选择。

其最简单的模式是:

40S亚基与带帽的mRNA5'

末端接触，并沿着mRNA"

扫描"

一直到抵达第一个AUG处再开始翻译。

该过程需消耗ATP。

这主要是由于Met-tRNAMet的反密码子与起始密码子AUG互补的结果。

因此正如前述，真核细胞蛋白质生物合成的特点之一是:

tRNAMet先与40S亚基结合，然后再与mRNA结合。

由此看来，"

过程其实是以43S前起始复合物的形式进行的。

在真核细胞tRNAMet中，毗邻它的反密码子3'

端的核苷酸是被一个大集团修饰的A（t6A:

N-[9-β-D-呋喃核糖）嘌呤-6-氨基甲酰]苏氨酸），t6A能通过加强成摞反应（Stackinginteraction），稳定反密码子3'

端核苷酸，不允许在密码子与反密码子的反应中密码子第一位碱基摆动。

原核细胞tRNAMet缺乏该修饰碱基，因此在反应过程中允许密码子有更多可摆动性。

这个结构的存在也有助于解释43S前起始复合物对起始密码子AUG的选择的简单的方式。

所以，在真核mRNA中，附加的上游信号是必要的，例如象原核mRNA的SD顺序那样的信号。

但是，通过深入研究40S亚基对起始部位的选择机制。

发现亦有某些例外情况，即一些mRNA的翻译不是从起始AUG开始，而是从下游AUG处开始开放读框。

研究表明，事实A+1NNAUGG顺序对于40S亚基进行起始是理想的序列。

如果该顺序-3位的A或G和G+1位的G被取代的话，该起始密码子可能就被漏读，或者40S亚基经过AUG继续"

下去。

肽链的延长和终止

　　与真核细胞蛋白质生物合成的起始因子相比较，在延长和终止步骤中所涉及的因子就十分简单。

真核细胞肽链延长和终止过程所涉及的因子

因子

功能

相应的原核细胞因子

EF1α

促使aa-tRNA与核糖体结合

EF-Tu

EF1βγ

使EF1α再循环

EF-Ts

EF2

转位

EF-G

RF

肽链释放

RF1

RF2

　　延长因子（EF）α，分子量约50KD。

EF1α可与GTP和aa-tRNA形成复合物，并把aa-tRNA供给核糖体。

对EF1βγ的研究不象对原核细胞EF-Ts那么清楚，但已证明EF1βγ能催化GDP-GTP交换，有助于EF1α再循环利用，EF2分子量约100KD，相当于原核细胞的EF-G，催化GTP水解和使aa-tRNA从A位转移至P位。

肽链合成的终止仅涉及到一种释放因子（RF），分子量约115KD。

它可以识别所有的三种终止密码子UAA，UAG和UGA。

RF在活化了肽链酰转移酶释放新生的肽链后，即从核糖体解离，解离过程涉及GTP水解，故终止肽链合成是耗能的。

真核生物蛋白质生物合成的特异抑制剂

　　真核细胞蛋白质生物合成的特异抑制剂的作用环节。

毫不惊奇，一些能够抑制原核细胞蛋白质生物合成的抑制剂同样也能抑制真核细胞的蛋白质生物合成。

如aa-tRNA的类似物嘌呤霉素可提前终止肽链翻译。

又如梭孢酸（fusidicacid）不仅可阻止完成功能后的原核细胞EF-G从核糖体释放，也能阻止真核细胞EF2的释放。

有一些抑制剂对真核细胞的翻译过程是特异的，这主要是由于真核细胞翻译系统装置的特殊性。

如7-甲基鸟苷酸（m7Gp）在体外抑制真核细胞的翻译起始，就是因为m7Gp与帽结合蛋白质竞争性地与mRNA5'

端帽结合。

同样，其它多数真核细胞蛋白质生物合成的特异性抑制剂亦可与不同的翻译装置（成份）结合。

　　上述这些特异性抑制剂大多数是小分子，有的是多肽，如蓖麻蛋白（ricin）。

蓖麻蛋白是一种特异的核酸酶，能够通过使60S亚基水解失活而中止延长步骤。

由白喉杆菌（Corynebacteriumdiptheriae）所产生的致死性毒素是研究得较为清楚的真核细胞蛋白质合成抑制剂。

白喉毒素是一种65KD的蛋白质，它不是由细菌基因组编码的，而是由一种寄生于白喉杆菌体内的溶源性噬菌体β（phageβ）编码的。

该毒素只是经白喉杆菌转运分泌出来，然后进入组织细胞内。

一旦进入真核内，白喉毒素就催化ADP-核糖与EF2连接。

ADP-核糖由NAD+提供，它与EF2分子中修饰的组氨酸残基结合。

在体外，这种结合很容易被加入尼克酰胺而逆转。

一旦EF2被ADP-核糖化，EF2就完全失活。

由于白喉毒素是起催化作用，因此只需微量（也许少至一个分子）就能有效地抑制细胞的整个蛋白质合成，而导致细胞死亡。

EF2中修饰的组氨酸残基亦称为白喉酰胺（diphthamide）。

假如在EF2中不存在白喉酰胺，白喉毒素就不会杀死哺乳动物细胞。

蛋白质合成后的分泌

　　不论原核核还是真核生物，在细胞浆内合成的蛋白质需定位于细胞的特异区域，或者分泌出细胞。

将蛋白质分泌出细胞，在真核细胞比原核细胞更困难，因为真核细胞胞体大，而且还有大量的膜性间隔。

　　一些蛋白质被合成后分泌到细胞外，这些蛋白质统称分泌蛋白。

人们发现，将某些分泌蛋白质mRNA在体外进行翻译时，其翻译产物的分子量比预计的要大的多。

例如胰岛素由５１个氨酸残基组成，但胰岛素mRNA的翻译产物在兔网织红细胞无细胞翻译体系中为８６个氨基酸残基，称为胰岛素原（proinsulin）。

在麦胚无细胞翻译系统中为１１０个氨基酸残基组成的前胰岛素原。

后来证明，在前胰岛素原的M－末端有一段富含疏水氨基酸的肽段作为信号肽（signalpeptide），使前胰岛素原已成为胰岛素原。

然后胰岛素原被运到高尔基复合体，切去C肽成熟的胰岛素，最终排出胞外。

后来发现，几乎各种分泌蛋白质（如真核细胞的前清蛋白，免疫球蛋白轻链，催乳素等，原核细胞的脂蛋白、青霉素酶等）均含有信号肽，约由１５－３０个疏水氨基酸残基构成。

近年来，人们才提出了信号肽假说去解释分泌蛋白质的分泌。

其机理是:

当新生肽链正在跨越膜时，信号序列和其后段折成两个短的螺旋段，并曲成一个反向平行的螺旋发夹，该发夹结构可插入到疏水的脂质双层中。

一旦分泌蛋白质的N端锚在膜内，后续合成的其它肽链段部分将顺利通过膜。

疏水性信号肽对于新生肽链跨越膜及把它固定在膜上起了一个拐棍作用。

信号肽在完成功能后，随即被一种特异的信号肽酶水解。

哺乳类动物的信号识别颗粒（SRP）可见蛋白质与折叠的RNA的二个结构域缔合，Alu表示７SLRNA的序列（7SLRNA的序列与脊椎动物基因的Alu重复序列家族的的序列同源）。

S代表特殊的中心区。

真核细胞蛋白质生物合成的特异抑制剂的作用环节。

杆形颗粒的长度约相当于核糖体直径。

　　在80年代中期，Walter等人已提出了肯定的证据表明:

在启动分泌和控制分泌方面，有一小分子RNA-蛋白质反复合物起关键作用。

由于该复合物能与新生的信号肽特异性反应，故被命名为信号识别颗粒（SignalRecognitionParticle，简写为SRP）。

SRP由7SLRNA（约300个碱基）和6种不同的蛋白质紧密结合组成。

蛋白质的分子量从9-72KD不等。

SRP的作用是能与核糖体结合并停止蛋白质结合，阻止翻译发生在肽链延长至约70个氨基酸残基长时。

这个长度正好是信号肽完全从核糖体出来时的长度（随信号肽后的30-40个氨基酸残基此时被埋在核糖体内）。

当SRP）与内质网膜上的船坞蛋白（dockingprotein）接触后，翻译阻滞逆转，SRP扩散开再去启动另一蛋白质转运。

　　上述SRP对翻译起负调节作用具有极重要的生物学意义。

SRP在胞浆内含量很高，约有106个拷贝（约占哺乳动物细胞核糖体数量的1/10）。

哺乳动物分泌蛋白质中的许多种都是降解酶类（如核酸酶、蛋白酶等），即使它们偶然出现在胞浆内也会造成细胞内的大灾难。

通过用SRP暂时中止这些蛋白质的翻译，确保这些蛋白质未到达内质网膜之前不能完成翻译。

这样，在信号肽和SRP的共同作用下，使得这些分泌蛋白能及时进入膜性腔内，完成转运和分泌。

不同点

真核生物和原核生物复制的不同点：

1.真核生物DNA的合成只是在细胞周期的S期进行，而原核生物则在整个细胞生长过程中都可进行DNA合成

2.原核生物DNA的复制是单起点的，而真核生物染色体的复制则为多起点的。

真核生物中前导链的合成并不像原核生物那样是连续的，而是以半连续的方式，由一个复制起点控制一个复制子的合成，最后由连接酶将其连接成一条完整的新链。

3.真核生物DNA的合成所需的RNA引物及后随链上合成的冈崎片段的长度比原核生物要短。

4.原核生物中有DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三种聚合酶，并有DNA聚合酶Ⅲ同时控制两条链的合成。

真核生物中有α、β、γ、ε、δ五种聚合酶。

聚合酶α、δ是DNA合成的主要酶，分别控制不连续的后随链以及前导链的生成。

聚合酶β可能与DNA修复有关，聚合酶γ则是线粒体中发现的唯一一种DNA聚合酶.

5.染色体端体的复制不同。

原核生物的染色体大多数为环状，而真核生物染色体为线状。

末端有特殊DNA序列组成的结构成为端体。

真核生物和原核生物转录的不同点：

1.真核生物的转录在细胞核内进行，原核生物则在拟核区进行。

2.真核生物mRNA分子一般只编码一个基因，原核生物的一个mRNA分子通常含多个基因。

3.真核生物有三种不同的RNA聚合酶催化RNA合成，而在原核生物中只有一种RNA聚合酶催化所有RNA的合成。

4.真核生物的RNA聚合酶不能独立转录RNA，三种聚合酶都必须在蛋白质转录因子的协助下才能进行RNA的转录，其RNA聚合酶对转录启动子的识别也比原核生物要复杂得多。

原核生物的RNA聚合酶可以直接起始转录合成RNA。

真核生物和原核生物翻译的不同点：

氨基酸的活化：

原核起始氨基酸是甲酰甲硫氨酸，真核是从生成甲硫氨酰-tRNAi开始的。

翻译的起始：

原核的起始tRNA是fMet-tRNA（fMet上角标），30s小亚基首先与mRNA模板相结合，再与fMet-tRNA（fMet上角标）结合，最后与50s大亚基结合。

真核中起始tRNA是Met-tRNA（Met上角标），40s小亚基首先与Met-tRNA（Met上角标）相结合，再与模板mRNA结合，最后与60s大亚基结合生成起始复合物。

肽链的延伸：

没有区别

肽链的终止：

原核含有三种释放因子RF1,RF2,RF3。

真核只有eRF1和eRF3。

蛋白质前体的加工蛋白质的折叠蛋白质的合成抑制这三步过程过于复杂，因具体物种而异

相同点

真核生物和原核生物复制的相同点：

DNA复制

都是半保留复制、半不连续复制、双向复制，在复制中需要的原料、模板、引物都相同，都有前导链和滞后链，都分为起始、延伸、终止三个过程。

RNA转录：

RNA合成方向都是从5’到3’，都需要DNA链作为模板，都需要RNA聚合酶和其他蛋白因子，原料都是四种核苷酸

翻译:

原料都是氨基酸，tRNA，都需要消耗能量，都需要氨基酰—tRNA聚合酶，都是从5’到3’端翻译，氨基酸翻译完成后都需要进行加工。

转录和复制的相同点：

1、都以DNA链作为模板

2、合成的方向均为53

3、聚合反应均是通过核苷酸之间形成的3，5-磷酸二酯键，使核苷酸链延长。

复制

转录

模板

两条链均复制

模板链转录

（不对称转录）

原料

dNTP

NTP

酶

DNA聚合酶

RNA聚合酶

产物

子代双链DNA

（半保留复制）

mRNA，tRNA，rRNA

配对

A-T；

G-C

A-U；

T-A；

引物

RNA引物

无