蒸发光散射问题集锦Word格式.docx

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本人只用过ALTECH2000，其他牌子的ELSD只是在展会上见过，遗憾。

见到一个内置工作站的ELSD介绍，觉得不错，但没用过，不知道可有朋友用过，感觉如何？

如果不错，倒可以考虑购置，呵呵

4、法国的蒸发光散射检测器本人用过，Sedex-55型，Sedex-75型，都用过，也有五年多的历史了。

主要用于中药成分的含量测定，也作过麦芽糖。

感觉其重现性RSD达到3%以下没问题。

同时该品牌ELSD采用超地温雾化技术，蒸发室温度一般低于50摄氏度，我一般用40左右，我曾经做过人参皂苷Rg1与Rb1的标准曲线几乎重合，如此也充分证明其为质量型检测器，曾经做过中药注射剂的指纹图谱，在同一机器，同一牌号色谱主的情况下重现性较紫外好得多。

但更换色谱柱峰形变化较大。

ALTECH2000本人也接触过，知道其不是同一天其样品峰面积差异相当大。

5、对于蒸发光散射检测器的别离装置，我了解也不是很多，Alltech2000采用双模式方式即在挥发性溶剂情况下，采用非分流模式；

而水相或大流量情况下采用分流模式，其漂移管较短采用的是高温蒸发模式，蒸发温度90摄氏度以上，同时漂移管较短，是不锈钢材质。

Sedex-75型采用的是低温蒸发模式，由于其雾化室较大采用自然分流效果较前者好，同时其蒸发管〔漂移管〕长度较前者长许多，厂家工程师介绍有2m多长，且为螺旋形可以减缓漂移速度，同时其蒸发温度较低一般为40摄氏度左右，有利于被测物质形成较大结晶。

从而增加测定的准确性。

但Sedex的管路均为玻璃材质，易破损，但我用的有5年了，中间还搬过两次家也没出什麽问题。

6、蒸发光散射检测器〔ELSD〕是一种通用型的检测器，其优势在于能检测无紫外吸收或紫外吸收很弱的物质，如：

碳水化合物、脂类、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、外表活性剂等。

另外，在没有标准品和化合物结构参数的情况下也能检测未知化合物。

理论上，可检测挥发性低于流动相的任何样品；

流动相低温雾化和蒸发，对热不稳定和挥发性化合物亦有较高灵敏度；

广泛的梯度和溶剂兼容性，无溶剂峰干扰；

因此,ELSD应用比拟广泛。

您说的“有些紫外检测器能检测到峰，而在蒸发光散射检测器中无法检测〞情况不难理解:

1、有些物质的挥发性比流动相大，进入飘移管后先于流动相而蒸发，到不了检测池，也就检测不到。

2、有些物质的含量可能很微量，而紫外吸收很强，因此在紫外检测器中可以看到色谱峰。

而在ELSD中，由于很微量的微粒或者液滴散射光的的能力有限，所以检测不到或色谱峰很弱。

7、我第一次使用蒸发光检测器，遇到一个问题跟大家请教下。

色谱条件：

流动相甲醇：

酸水=80：

20，飘移管温度60度，气体压力25psi

仪器：

waters2420

样品浓度3mg/ml，进样量10ul，

存在问题：

连续进样4次，但是峰面积一次比一次小，后来竟然有杂峰出现，而且该杂峰具有一定的规律性，具体请见附件。

请问是哪里出了问题呢？

8、看了如下图，没用过waters2420的，我用的是Alltech的，原理应该相通吧。

感觉上有几点地方可以注意下：

1.不知道你的漂移管温度和喷雾器温度为什么那么低。

还有压力换算成流速是多少。

按气体流速2.5，80％甲醇来说，温度最少也得80度吧，喷雾器温度也低了点，容易造成污染并堵塞喷雾器的。

从你的图上看，很象这个原因。

可以适当提高温度试试。

2.样品浓度感觉高了点，虽说蒸发光灵敏度低，但和watersDAD〔2996〕比也差不了多少，基线不会那么杂的。

3.样品浓度低时为了提高灵敏度会采用降低温度和气体流速的方法，但你浓度很高，温度适当提高不至于有那么大影响，相反就容易堵塞喷头了。

4.以前曾遇到过一种特殊情况造成杂峰，仪器清洗，检查好久，发现是特殊原因：

气体不纯。

你换瓶气试试看。

特别是气快没时特别容易产生杂峰。

9、1、飘移管温度确实有些低，设置成75度，杂峰少了很多。

气体流速也增大到30个压力，大约2.2吧

2、原来的流动相是仪器混合的，改成人工混合后，杂峰就完全消失了。

峰行也漂亮了。

据说是泵不稳定

看来要多积累阿

10、我现在遇到一个问题让我很头痛,就是用蒸发光散射检测器测不准含量.我的样品含量总是测得比实际投料高.

做回收率结果明确浓度为0.5mg/ml的回收率为220%,浓度为1.0mg/ml的回收率为150%,浓度为1.5mg/ml的回收率为130%.

对照品进5ul和10ul,进10ul和20ul计算的同一个样品含量都相差很远.我的样品的浓度都在线性（外标2点）X围内,并且基线很稳定.我怀疑是因为进样量太低了,我的样品浓度为0.5mg/ml,进样20ul,各位大虾,麻烦帮助想一下,到底是哪里出了错.

11、进样量

ELSD的检测器的检测限一般为2—5ng，由于ELSD在不同剂量段的响应曲线存在差异，尤其在较低剂量段响应曲线非线性，而且其最低检测能力较低〔即最低检测限较大〕，所以要想取得准确的定量结果，以与提高微量组分的检测能力，进样量也是HPLC-ELSD实验条件的优化因素之一。

通常，在建立HPLC-ELSD含量测定方法时，可以在色谱柱承受限度X围内采用较高进样量，以有利于获得较好线性和减小定量分析误差。

在建立HPLC-ELSD有关物质含量测定方法时，一方面要通过色谱柱、流动相、流动相流速、载气流速、漂移管温度等多个条件的优化，以提高信噪比，另一方面也要考虑加大进样量，进一步提高有关物质或小组分的检测能力。

实验明确，进样量增大4倍，ELSD响应值漂移可减小40％。

样品浓度

ELSD用于较高浓度的常量分析，流动相引起的响应漂移误差较小，在较高浓度X围，ELSD的剂量响应关系为直线，在低浓度X围，ELSD的剂量响应关系呈二项式曲线。

根据经验，样品浓度的跨度应不大于二个数量级。

首先要感谢楼上,但是我的绝对进样量已经达到10ug,比检测限高多了.

"

进样量增大4倍，ELSD响应值漂移可减小40％。

到底要提高到多大的量,ELSD的剂量响应关系才为直线呢?

12、ELSD不要用外标两点法计算线性与含量，都应该用外标两点对数法

lnA＝a＋b×

lnC

13、各位前辈,本人用蒸发光散色检测器时出现一个问题,请大家帮助分析.分析同一浓度的样品,同一流动相不同的比例,漂流管\流速不变样品峰面积相差一倍,

不知什么原因,可能是ELSD参数问题,另外求助漂流管温度的设置遵循的公式是什么.

14、你的流动相比例变动，应该是水的比例增大蛮多吧，问题可能是水比例增大后，你原来的漂移温度无法把溶剂完全蒸干，溶剂和样品在一齐就增大了体积，当然散射的光强度就会增大，峰面积也会增大，试试提高温度或增大气流量。

15、增益值就是信号放大的倍数

增益越大，峰面积就越大，当然这是相对的

dalansong战友说的溶剂比例问题在ELSD中也比拟常见，但我觉得是蒸发不完全，你可以试着提高漂移管温度

漂移管温度的设定一般是经验值吧，不同品牌的检测器温度要求不一样，比如纯水，奥泰的需要溶剂完全气化，100摄氏度以上；

而Waters的是局部气化，估计80摄氏度以上就可以了

16、漂移管温度是由流动相的比例按公式计算出来的，不知道你的流动相是什么

17、如果现在这个问题还没搞清楚，我告诉你原因〔可能的〕吧！

1.流动相比例发生变化了，是不是保存时间和峰宽也发生变化了？

如果是，请继续往下看；

如果不是，我就不知道什么原因了~

2.如果峰宽变窄意味着——单位时间内漂移管内的物质浓度变高了。

如果常用ESLD的话，头脑中马上反响出来：

响应值A的对数和浓度C的对数呈线性，且截距不为零~，所以，这里浓度稍微有些差异，响应值差异可就大了，各个响应值的和〔峰面积〕就有显著变化。

PS：

这种情况如果用UV，峰面积也有差异，但不会很大，因为峰面积是对响应值和时间的积分，UV响应值和浓度成正比。

对于ELSD，同样的柱子和流动相组成，保存时间越长，往往峰越宽，所以峰面积就很快变的很小——比如你改变流速试试

不知道我有没有讲清楚，没讲清的话和我联系，我们讨论讨论~

18、对于同一流动相、同一比例时〔ELSD的参数一致时〕

1、ELSD的峰面积与组份的质量成指数关系。

2、ELSD的瞬间峰高同样与瞬间质量成指数关系。

3、对于同一种物质的同质量时，如果峰宽越大，峰面积就会约小。

4、在色谱流出物中，保存时间/保存体积越大，那组份的展宽就越大。

对于同一流动相、不同比例时〔ELSD与不挥发性组份一致时〕

峰高与流动相各种组份的粘度、外表X力等性质相关。

19、蒸发光散射检测器〔ELSD〕

蒸发光散射检测器是一种通用型的检测器，可检测挥发性低于流动相的任何样品，而不需要样品含有发色基团。

蒸发光散射检测器灵敏度比示差折光检测器高，对温度变化不敏感，基线稳定，适合与梯度洗脱液相色谱联用。

蒸发光散射检测器已被广泛应用于碳水化合物、类脂、脂肪酸和氨基酸、药物以与聚合物等的检测。

主要优势：

1）可检测挥发性低于流动相的任何样品；

2）流动相低温雾化和蒸发，对热不稳定和挥发性化合物亦有较高灵敏度；

3）广泛的梯度和溶剂兼容性，无溶剂峰干扰；

4）辅助载气提高了检测灵敏度，保持检测池内的清洁，防止污染；

5）高精度雾化和蒸发温度控制，保证高精度检测；

6）可与任何HPLC系统连接。

ELSD与几种常用的检测器之间的比照

1、ELSD

2、UV

3、RID

4、MS

应用X围：

1、通用

2、有光吸收的化合物

3、通用

4、通用

响应：

1、质量相关

2、化学相关

3、折光度相关

4、质量相关

灵敏度：

1、高

2、高

3、低

4、高

未知物检测：

1、能

2、不能

3、能

4、能

流动相影响/梯度：

1、不影响

2、本底影响

3、影响

4、不影响

基线稳定性：

1、好

2、较好

3、差

4、好

ELSD工作原理：

雾化：

液体流动相在载气压力的作用下在雾化室内转变成细小的液滴，从而使溶剂更易于蒸发。

液滴的大小和均匀性是保证检测器的灵敏度和重复性的重要因素。

蒸发光散射检测器，通过对气压和温度的准确控制，确保在雾化室内形成一个较窄的液滴尺寸分布，使液滴蒸发所需要的温度大大降低。

蒸发：

载气把液滴从雾化室运送到漂移管进展蒸发。

在漂移管中，溶剂被除去，留下微粒或纯溶质的小滴。

UM3000蒸发光散射检测器采用低温蒸发模式，维持了颗粒的均匀性，对半挥发性物质和热敏性化合物同样具有较好的灵敏度。

检测：

光源采用激光，溶质颗粒从漂移管出来后进入光检测池，并穿过激光光束。

被溶质颗粒散射的光通过光电倍增管进展收集。

溶质颗粒在进入光检测池时被辅助载气所包封，防止溶质在检测池内的分散和沉淀在壁上，极大增强了检测灵敏度并极大地降低了检测池外表的污染。

关键技术指标

Ø

操作条件15°

C～35°

C，相对湿度<

90%

蒸发区温度X围室温～130°

C

温度调节增量1°

温度控制精度±

1°

气体要求氮气或空气

溶剂流速10µ

l～3mL/min

气体输入压力2～5bar

气体压力测量精度0.01bar

气体消耗量1～4L/min

电源要求220VAC,50Hz

光源650nm激光二极管

检测元件光电倍增管

检测极限<

1ng〔葡萄糖，直接进样〕

典型定量X围0.2～10μg〔葡萄糖，HPLC〕

噪音水平<

0.1mV（1ml/min）

信号输出0-10mVDC,或0-1VDC

计算机接口RS232

检测角度120°

显示LCD

20、蒸发光检测器检测的原理是

影响检测器的信噪比：

1、雾化气流的纯度和压力2、流动相，在不使被测物质蒸发的前提下，温度越高，流动相蒸发越完全，色谱图基线越好、信噪比越高。

因此选择流动相时最好是沸点低的。

3、所有进入到散射池的物质都可被检测，而且响应值只与物质的质量有关。

所以要保证流动相干净无杂质！

21、流动相，在不使被测物质蒸发的前提下，温度越高，流动相蒸发越完全，色谱图基线越好、信噪比越高。

但是温度过高的话，会使流动相爆沸，也会影响基线。

22、ELSD主要是是针对UV无吸收或吸收很小而且与溶剂挥发性差异较大的样品的测试蒸发光散射检测器〔ELSD〕的原理与特点蒸发光散射检测器〔EvaporativeLight-scatteringDetector〕是通用型检测器，可以检测没有紫外吸收的有机物质，如人参皂苷、黄芪甲苷等。

1993才由Alltech公司商业化生产。

一、ELSD原理恒定流速的色谱仪〔高效液相、逆流色谱、高效毛细管电泳等〕洗脱液进入检测器后，首先被高压气流雾化，雾化形成的小液滴进入蒸发室（漂移管，drifttube），流动相与低沸点的组分被蒸发，剩下高沸点组分的小液滴进入散射池，光束穿过散射池时被散射，散射光被光电管接收形成电信号，电信号通过放大电路、模数转换电路、计算机成为色谱工作站的数字信号——色谱图。

二、特点1.洗脱液需要雾化，所以雾化气流的纯度和压力会影响检测器的信噪比。

2.流动相要蒸发掉，a/所以不能使用不易挥发的物质来调节流动相的pH值。

b/可以通过蒸发温度的调节来使比被测物质沸点低的组分蒸发。

c/在不使被测物质蒸发的前提下，温度越高，流动相蒸发越完全，色谱图基线越好、信噪比越高。

d/如果被测物质沸点接近或低于流动相的蒸发温度，如此无法检测；

不过，100%的水做流动相，蒸发室温度也才设为150摄氏度，沸点比水低的有机物质完全可以用气相色谱仪进展别离检测了。

e/由于流动相和溶剂蒸发了，使用ELSD检测器收集的色谱图一般没有溶剂峰；

而且梯度洗脱没有折光视差效应，一般不会出现基线漂移。

3.检测光散射变化，所有进入到散射池的物质都可被检测，而且响应值只与物质的量〔？

质量〕有关。

4.浓度跟峰面积不成线性，分别取自然对数后成线性。

23、ELSD主要是是针对UV无吸收或吸收很小而且与溶剂挥发性差异较大的样品的测试蒸发光散射检测器〔ELSD〕的原理与特点蒸发光散射检测器〔EvaporativeLight-scatteringDetector〕是通用型检测器，可以检测没有紫外吸收的有机物质，如人参皂苷、黄芪甲苷等。

ELSD主要是是针对UV无吸收或吸收很小而且与溶剂挥发性差异较大的样品的测试。

可能的原因有

1、漂移管温度可能太低了。

2、可能是流动相，或柱子的问题（固定相脱落、柱子上吸附的杂质病产生的信号）。

3、使用时间过长，电路上有灰尘，造成了信号的接触不良。

4、ELSD主要是是针对UV无吸收或吸收很小而且与溶剂挥发性差异较大的样品的测试，既然UV检测更好，那何必非得用ELSD呢？

5、可能的原因是其中挥发性较强的组分随流动相一起蒸发而去，因此在ELSD上没有信号；

但这样的组分有可能因为有紫外吸收而在UV上有信号。

如果是这样的问题，并不能通过调整雾化气体流速和漂移管温度而得到根本性的改善。

6、ＵＶ的检测器对有ＵＶ吸收的化合物的物质检测的灵敏度高．而对于近紫外吸收和无紫外吸收的化合物，在ＥＬＳＤ上的响应就比ＵＶ高〔当然挥发性较强的组分不一定〕，反之，在ＵＶ上的响应一般比ＥＬＳＤ高，所以检出的峰比ＥＬＳＤ多啊

24、很有可能是检测器被污染了，如果自己不会清洗，联系仪器公司来帮助清洗。

为防止检测器被污染，平时就要注意仪器的维护：

1.使用含水量较大的流动相时，漂移管温度在不影响基线的情况下尽量升高，建议高于105度。

否如此流动相来不急挥发残留在漂移管中，会出现杂峰。

还要注意排气管要高于仪器，废液半满时要与时倒掉。

2.进样完毕时不要急于降温，至少维持温度15分钟再降温，同时通氮气，将检测器中的残留物冲洗干净。

最好能用甲醇冲洗。

3.以前我们用的是压缩空气，没有氮气干净，容易污染检测器。

基线噪音也大。

建议使用纯净的氮气。

25、蒸发光散色检测器，model200这个型号没用过，但实用须知事项应该差不多，要注意：

A、开机，先开氮气5min左右再进流动相；

关机，先关流动相5min左右再关氮气。

B、注意把废气导到室外。

C、如果载气供给中断，马上停泵。

D、流动相中含有盐、酸或碱，管与之前用水和甲醇冲洗系统。

2、exhausttube一般直接通室外大气。

3、一罐氮气（压力2.0bar）大约用30~35hr

4、基线起伏很大，a、没有接地线，b、漂移管有异物

26、我用蒸发光检测法做多糖中单糖的含量测定

请问

1、样品含量测定的RSD要控制在多少以内。

2、重现性、精细度、稳定性、加样回收都要怎么做，RSD分别要控制在多少以内。

现在的问题是，柱子每天做出来的峰面积差很多，一天一个样，同一天内还可以。

流动相是乙睛和水，每天我用甲醇冲洗后保存，发现第二天的柱压都要增大，但是对测定可能影响不大。

请教原因和解决方法。

27、一般控制在2%以内.

对于ELSD,由于采用对数法进展计算,控制在2%以内是很容易的.

柱子每天做出来的峰面积差很多，一天一个样，同一天内还可以"

可能原因:

1、流动相手工配置，差异较大；

2、建议检查一下ELSD。

另外，甲醇冲洗，可能使多糖聚凝在柱子上，引起柱压增大。

如果流动相中乙腈比例较大〔如大于30%〕，可以不用甲醇冲洗。

以前做过黄芪含量测定，通常几个月不冲柱子，重现性很好。

不知道多糖是否适用。

28、1糖柱最好能够使用保护住，也需要经常冲洗，这种柱子一堵就全部over了

2某品牌的ELSD重现性确实不好，特别是室温不稳定的情况下，相差10%都有可能，据推测应该是飘逸管温度控制不好

3流动相的问题，如果是在线混合请检查混合器

29、大家好，我要测一个成分的含量，该成分是糖醇，195纳米才有紫外吸收，现正在用蒸发光散射测，发现同一份标准品溶液，测出来的重复性不太好，做标准曲线有点难，请问有什么方法可以解决？

我用的仪器是waters2420ELSDetector

气体压力：

30

漂移管：

45.0C

30、在保证样品稳定、进样量一样的情况下考虑一下流动相在此温度下是否能充分挥发，保证栽气流速稳定。

但并不是漂移管温度越高越好，因为温度太高会使流动相沸腾，反而会增加背景噪音，同时还有可能导致溶质的局部挥发，降低信噪比。

故最优温度应为在流动相〔包括其中所含的盐〕根本挥发的根底上，产生可承受噪音的最低温度。

在其它条件不变的情况下，载气流速越小，形成的物质粒子半径越大，对激