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LOGO江香江香薷薷乙酸乙乙酸乙酯提取物提取物对-葡葡萄糖萄糖苷苷酶的抑制作用酶的抑制作用n班班级：

n学学生：

生：

xxxn学号学号：

n指指导教教师：

概述概述江香薷江香薷江香薷江香薷（MoslachinensisMaxmi.cv.jiangxiangruCV.nov.）为唇形科一年生草本植物为唇形科一年生草本植物,以干燥地上部分入药以干燥地上部分入药,用于暑湿感冒、恶寒发热、用于暑湿感冒、恶寒发热、头痛无汗、腹痛吐泻、小便不利、水肿等症头痛无汗、腹痛吐泻、小便不利、水肿等症,是江是江西省的地道药材之一西省的地道药材之一,主产于江西省新余市渝水区、主产于江西省新余市渝水区、分宜县等地。

分宜县等地。

但目前的研究大部分集中在江香薷但目前的研究大部分集中在江香薷挥发油总成分的抗菌、抗炎、抗病毒、对神经系挥发油总成分的抗菌、抗炎、抗病毒、对神经系统的抑制作用等，而对于非挥发性成分尤其是多统的抑制作用等，而对于非挥发性成分尤其是多糖及黄酮类化合物这些具有广泛生物活性的物质糖及黄酮类化合物这些具有广泛生物活性的物质的研究很少。

因此，我们认为，从江香薷的非挥的研究很少。

因此，我们认为，从江香薷的非挥发性成分中分离出新的生物活性物质并深入研究发性成分中分离出新的生物活性物质并深入研究其生物活性作用具有重要的研究意义。

其生物活性作用具有重要的研究意义。

实验材料实验材料材料：

江香薷购自江西省南昌市黄庆仁栈华氏大药房。

材料：

江香薷购自江西省南昌市黄庆仁栈华氏大药房。

u试剂：

试剂：

-葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶（-Glucosidase）；4-硝基苯硝基苯-D-吡喃葡萄糖苷吡喃葡萄糖苷（4-N-trophenyl-D-glucopyranosodide，pNPG）及还原型谷胱甘肽均系美国及还原型谷胱甘肽均系美国Sigma公司产品；拜唐苹（阿卡波糖，每片含公司产品；拜唐苹（阿卡波糖，每片含50mg），拜耳医药保健有限），拜耳医药保健有限公司；公司；PH7.4磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液（Na2HPO412H2O、NaH2PO42H2O）；无水）；无水碳酸钠（碳酸钠（Na2CO3）；二甲亚砜）；二甲亚砜（DMSO）；无水乙醇；石油醚；乙酸乙酯；无水乙醇；石油醚；乙酸乙酯；正丁醇及超纯水均为国产分析纯。

正丁醇及超纯水均为国产分析纯。

u仪器：

仪器：

Uv-2550紫外分光光度计（日本岛津公司），智能恒温电热套及加热紫外分光光度计（日本岛津公司），智能恒温电热套及加热回流装置；回流装置；RE-52A旋转蒸发仪；分液漏斗；圆底烧瓶；旋转蒸发仪；分液漏斗；圆底烧瓶；saroriusBP211D电子天平；电子天平；JJ200精密电子天平；精密电子天平；HH-4数显恒温水浴箱；各种规格移液器数显恒温水浴箱；各种规格移液器及枪头；及枪头；KQ-300DE型数控超声波清洗器；型数控超声波清洗器；JC101型电鼓风干燥箱；冻干机型电鼓风干燥箱；冻干机等等。

实验流程实验流程提取浓缩萃取测定冻干将乙酸乙酯萃取液浓缩后进行冷冻干燥分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取用10倍量80%乙醇、水各提取2小时用旋转蒸发仪浓缩至100200ml测定乙酸乙酯提取物对-葡萄糖苷酶抑制作用实验方案实验方案u江香薷提取物抑制江香薷提取物抑制-葡萄糖苷酶的纯酶活性测定葡萄糖苷酶的纯酶活性测定1.方案原理：

在适宜的条件下，底物方案原理：

在适宜的条件下，底物pNPG在在-葡萄糖苷酶的葡萄糖苷酶的催化作用下生成催化作用下生成pNP和葡萄糖，可表示为和葡萄糖，可表示为:

pNP-Glu-GlucosidasepNP+葡萄糖葡萄糖其中其中pNP在在410nm下有特征吸收峰，而下有特征吸收峰，而pNPG、葡萄糖在、葡萄糖在410nm下的紫外吸收很小，对结果影响可以忽略不计。

下的紫外吸收很小，对结果影响可以忽略不计。

通过酶与底物反应进行实验，对通过酶与底物反应进行实验，对-葡萄糖苷酶与底物反应的底葡萄糖苷酶与底物反应的底物浓度与反应时间进行优化物浓度与反应时间进行优化。

江香薷提取物抑酶活性筛选方案江香薷提取物抑酶活性筛选方案

（1）测定江香薷石油醚提取物及萃取剩余物各需五支微型）测定江香薷石油醚提取物及萃取剩余物各需五支微型离心管，分别为离心管，分别为A管、管、B管、管、C管、管、D管、管、E管管

（2）各管作用如下：

）各管作用如下：

A管管B管管E管管C管管D管管江香薷提取物测定管江香薷提取物测定管阳性对照管阳性对照管调零管调零管测定提取物吸光度测定提取物吸光度未被抑制酶活性反应管未被抑制酶活性反应管测定方法测定方法磷酸钾缓冲液磷酸钾缓冲液谷胱甘肽溶液谷胱甘肽溶液+相应提取液相应提取液-葡萄糖苷酶溶液葡萄糖苷酶溶液磷酸钾缓冲液磷酸钾缓冲液谷胱甘肽溶液谷胱甘肽溶液+蒸馏水蒸馏水-葡萄糖苷酶溶液葡萄糖苷酶溶液磷酸钾缓冲液磷酸钾缓冲液谷胱甘肽溶液谷胱甘肽溶液+蒸馏水蒸馏水-葡萄糖苷酶溶液葡萄糖苷酶溶液磷酸钾缓冲液磷酸钾缓冲液谷胱甘肽溶液谷胱甘肽溶液+阿卡波糖阿卡波糖-葡萄糖苷酶溶液葡萄糖苷酶溶液磷酸钾缓冲液磷酸钾缓冲液谷胱甘肽溶液谷胱甘肽溶液+相应提取液相应提取液-葡萄糖苷酶溶液葡萄糖苷酶溶液加入PNPG反应10min加入Na2CO3溶液终止反应A管B管C管D管E管加入PNPG反应10min加入PNPG反应10min加入Na2CO3溶液终止反应加入Na2CO3溶液终止反应加入Na2CO3溶液终止反应加入蒸馏水反应10min加入Na2CO3溶液终止反应加入蒸馏水反应10min结果与讨论结果与讨论u实验条件优化结果实验条件优化结果

（1）底物浓度优化）底物浓度优化-葡萄糖苷酶与底物反应对底物浓度进行优化的结果见表葡萄糖苷酶与底物反应对底物浓度进行优化的结果见表1与图与图1。

底物浓度底物浓度吸光度吸光度1吸光度吸光度2吸光度吸光度3平均值平均值0.020mg/mL0.0950.0950.1050.0980.050mg/mL0.2090.2090.2070.2080.100mg/mL0.3130.3160.3140.3140.200mg/mL0.5650.5660.5630.5650.500mg/mL1.4021.3921.4031.399表表1图图1（22）反应时间优化）反应时间优化-葡萄糖苷酶与底物反应对反应时间进行优化的结果见表葡萄糖苷酶与底物反应对反应时间进行优化的结果见表22与图与图22。

时间时间吸光度吸光度1吸光度吸光度2吸光度吸光度3平均值平均值5min0.3630.3690.3670.36610min0.4830.4910.4980.49115min0.3280.3260.3320.32920min0.4420.4320.4380.43725min0.3350.3570.3610.35130min0.3800.3900.3940.388表表2图图2由以上实验确定最佳底物浓度确定为为由以上实验确定最佳底物浓度确定为为0.200mg/mL；最佳反应；最佳反应时间确定为时间确定为10min。

u江香薷提取物抑酶活性筛选结果江香薷提取物抑酶活性筛选结果根据优化结果进行实验。

根据优化结果进行实验。

EE管（酶管（酶+底物）底物）pNPpNP吸光度平均值为吸光度平均值为0.630.63；在平行条；在平行条件下测得阳性对照阿卡波糖在浓度为件下测得阳性对照阿卡波糖在浓度为5.0mg/mL5.0mg/mL时抑制率为时抑制率为47.51%47.51%。

-葡萄糖苷酶抑制率计算公式如下葡萄糖苷酶抑制率计算公式如下:

酶活性抑制率酶活性抑制率=A=AEE-（A-（AAA-A-ACC）/A）/AEE100%100%采用几个浓度梯度测定乙酸乙酯萃取组分对采用几个浓度梯度测定乙酸乙酯萃取组分对-葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶的体外抑制活性，各萃取组分在各浓度下对的体外抑制活性，各萃取组分在各浓度下对-葡萄糖苷葡萄糖苷酶的体外抑制活性见表酶的体外抑制活性见表33。

根据表。

根据表33作图，得图作图，得图33。

浓度浓度管号管号吸光度吸光度1吸光度吸光度2吸光度吸光度3平均值平均值A-C差值差值抑制率抑制率8mg/mLA1.5561.5551.5571.556-0.053108.41%C1.611.6071.611.6094mg/mLA0.9260.9280.9290.9280.21266.30%C0.7130.7180.7150.7152mg/mLA0.8230.8250.8250.8240.45228.31%C0.3730.3720.3730.3731mg/mLA0.7350.7350.7320.7340.53614.87%C0.1980.1980.1970.1980.5mg/mLA0.6720.6750.6760.6740.56111.01%C0.1150.1160.110.114表表33图图33实验结果表明，江香薷乙酸乙酯提取物具有较高的抑制活性，实验结果表明，江香薷乙酸乙酯提取物具有较高的抑制活性，浓度为浓度为4.0mg/mL呈现呈现66.30%的抑制率，浓度为的抑制率，浓度为8.0mg/mL呈现呈现108.41%的抑制率，强于阳性对照市售的抑制率，强于阳性对照市售-葡萄糖苷酶抑制剂阿卡葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖（浓度波糖（浓度5.0mg/mL抑制率为抑制率为47.51%），浓度），浓度2.0mg/mL时具时具有较好的抑制活性，但其抑制率已经低于阳性对照市售有较好的抑制活性，但其抑制率已经低于阳性对照市售-葡萄糖葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖。

苷酶抑制剂阿卡波糖。

u大学本科的学习生活即将结束。

在此，我大学本科的学习生活即将结束。

在此，我要感谢所有曾经教导过我的老师和关心过要感谢所有曾经教导过我的老师和关心过我的同学，他们在我成长过程中给予了我我的同学，他们在我成长过程中给予了我很大的帮助。

本文能够顺利完成，要特别很大的帮助。

本文能够顺利完成，要特别感谢我的感谢我的指导老指导老师师xxx老师老师和和xx副教授副教授，感谢各位系的老师的关心和帮助。

感谢各位系的老师的关心和帮助。

u最后向所有关心和帮助过我的人表示真心最后向所有关心和帮助过我的人表示真心的感谢。

的感谢。

致谢致谢