第02周 微生物的培养和应用一试题君之周末培优君Word格式文档下载.docx

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A．操作者的双手B．玻璃器皿C．涂布器

D．固体培养基

【答案】A

【解析】双手可用酒精擦拭来进行消毒，A正确；

玻璃器皿（吸管、培养皿）需要进行灭菌处理，一般采用干热灭菌，B错误；

涂布器是通过酒精引燃灭菌，C错误；

固体培养基需要使用高压蒸汽灭菌，D错误。

点睛：

消毒和灭菌的方法与示例：

消毒

灭菌

概念

使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）

使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物（包括芽孢和孢子）

常用方法

煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法

灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌

适用对象

操作空间、某些液体、双手等

接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等

4．关于从土壤中分离出分解尿素的细菌，相关描述正确的是

A．细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，取样时要在酒精灯火焰旁铲去3~8cm表层土B．取土样的小铁铲、盛土样的信封在使用前都要采取干热灭菌措施C．称取土样时不能在酒精灯火焰旁，因为会使分解尿素的细菌死亡

D．某些细菌将尿素分解后产生氮气和二氧化碳

【答案】B

5．某实验学校的科技小组为了调查小清河（济南段）水中细菌的污染情况进行了实验。

实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养菌落、观察计数。

下列与此实验相关的叙述正确的是

A．培养基中含有的蛋白胨、淀粉、水、无机盐等，其中可为细菌提供氮源的是淀粉B．为使该实验结果可靠，有必要同时在另一平板上接种无菌水一同培养C．对培养基进行灭菌，应该采用加热煮沸法

D．为尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于4℃冰箱中培养

【解析】淀粉的组成元素只有C、H、O，不能为细菌提供氮源，A错误；

要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种无菌水作为对照进行实验，B正确；

对培养基进行灭菌，应该采用高压蒸汽灭菌法，C错误；

为尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于37℃恒温箱中培养，D错误。

6．如图为分离和纯化分解甲醛细菌的实验过程，其中LB培养基能使菌种成倍扩增，以下说法正确的是

A．需要对活性污泥作灭菌处理B．②中LB培养基应以甲醛为唯一碳源C．目的菌种异化作用类型为厌氧型

D．经⑤处理后，应选择瓶中甲醛浓度最低的一组进一步纯化培养

【答案】D

7．下列有关平板划线操作正确的是

A．灼烧接种环后，为避免其他杂菌的干扰，应立即伸入菌液取菌种B．划线结束后，为避免实验菌污染环境和感染操作者，必须再次灼烧接种环C．在第一次划线前灼烧接种环和每次划线前灼烧接种环的目的相同

D．划线时最后一区域一定要与第一区域相连，达到首尾相接

【解析】接种环必须冷却后，才可以伸入菌液中蘸取一环液，否则会烧伤或烧死微生物，A错误；

划线结束后，为避免实验菌污染环境和感染操作者，必须再次灼烧接种环，B正确；

在第一次划线前灼烧接种环是为了消灭杂菌，每次划线前灼烧接种环是为了杀灭残留的目的菌种，C错误；

划线时要避免最后一区的划线与第一区线连，因为最后一区是细菌最稀少的，而第一区是细菌最致密的，如果连在一起则有可能影响单个菌落的分离效果，D错误。

【点睛】解答本题的关键是明确每次操作前都需要灭菌，但是与第一次操作前的灭菌的目的不同，且注意最后一次的划线千万不要与之前的任何一条相连。

8．下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是

A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上C．将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时

D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数

【解析】首先要进行培养基的制备、用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，A正确；

然后进行对土壤稀释液进行涂布于各组平板上，B正确；

将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时，C正确；

确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300间的平板进行记数，求平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数，D错误。

9．下列关于纤维素酶的说法，错误的是

A．纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种酶B．葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖C．植物的根、茎、叶等器官中都含有大量的纤维素

D．棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物

10．用稀释涂布平板法来统计样品中尿素分解菌的数目，为了提高实验结果的可信度，往往要设置对照实验，对于对照组的要求不包括以下哪项

A．对照组培养基也要严格灭菌，且不接种任何微生物B．对照组和实验组培养基放在相同条件下培养C．所用培养基成分及pH大小完全与实验组一致

D．在对微生物进行培养前，需要对菌液和培养基进行灭菌

【解析】对照组培养基也要严格灭菌，且不接种任何微生物，为空白对照，A正确；

对照组和实验组的培养基都要置于相同条件下培养，以保证单一变量，B正确；

对照组所用培养基的成分及pH应与实验组完全一致，C正确；

在对微生物进行培养前，需要对培养基进行灭菌，不能对微生物进行灭菌，D错误。

11．下列有关分解纤维素微生物的分离的叙述，错误的是

A．纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵B．对分解纤维素的微生物进行了初步筛选后，无需再进行其他实验C．纤维素酶的测定方法，一般是对所产生的葡萄糖进行定量测定

D．纤维素酶是一种复合酶

【考点定位】分解纤维素的微生物的分离

【名师点睛】分离纤维素分解菌的几个关键步骤

（1）分离纤维素分解菌的实验中先用选择培养基，再用鉴别培养基。

选择培养基为液体培养基，以纤维素作为碳源和能源的微生物可以正常生长，而其他绝大多数微生物不能正常生长；

因培养基中无凝固剂，为液体培养基，利用液体培养基能使营养成分充分消耗，以增加纤维素分解菌的浓度。

（2）鉴别培养基含琼脂，为固体培养基，因为要在培养基上形成我们肉眼可见的菌落。

刚果红染色法应用的就是此培养基。

12．在做分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从对应10-6培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。

下列有关叙述，出现科学性错误的是

A．甲同学出现这种结果的原因可能是由于土样不同，也可能是操作过程出了问题B．将甲同学配制的培养基再接种菌种培养作为空白对照，以证明培养基是否受到污染C．让其他同学用与甲同学相同土壤进行实验，结果与甲同学一致，则可以证明甲同学无误

D．可以将甲同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养作为空白对照，以证明培养基是否受到污染

【解析】甲同学获得的菌落远大于其他同学，可能是由于所取的土样不同，也可能操作过程被污染，A正确；

污染可能是培养基灭菌不彻底，或操作过程没有保证无菌操作，将甲同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养作为空白对照，以证明培养基是否受到污染，B错误，D正确；

若是土样不同造成的，让其他同学用与甲同学一样的土壤进行实验，如果结果与甲同学一致，则可以证明甲同学操作正确，C正确。

13．如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。

据图分析正确的是

A．3号试管的稀释倍数为103倍B．4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数恰为5号试管的10倍C．5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×

109个

D．该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高

【考点定位】微生物的分离与计数。

【名师点睛】本题以“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图为情境，考查学生对尿素分解菌的筛选与分离过程的稀释与计数的识记和理解能力。

解决此类问题，需要抓住题图中的关键信息，诸如“5支试管为梯度稀释”、“呈现的菌落数”等，将这些信息与所学知识有效地联系起来，进行图文转换、实现对知识的整合和迁移。

本题的易错点在于对涂布平板法理解不到位：

涂布平板能使单菌落分离，便于计数，但涂布平板法统计样品中菌落的数目往往比实际数目低，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

14．尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制培养基时

A．葡萄糖在培养基中越多越好B．尿素分解菌有固氮能力，故培养基中只需无机氮C．尿素在培养基中越少越好

D．尿素分解菌无固氮能力，故培养基中应加入尿素作为氮源

【解析】尿素既可以作为尿素分解菌的氮源，也可以作为其碳源，葡萄糖在培养基中并不是越多越好，A错误；

尿素分解菌没有固氮能力，故培养基中需要添加尿素作为氮源，B错误；

添加尿素的目的是筛选尿素分解菌，其他微生物不能很好地生活在该培养基上，尿素在培养基中不是越少越好，过少就失去选择作用，过多又会使细胞失水死亡，C错误；

尿素分解菌无固氮能力，故培养基中应加入尿素作为氮源，D正确。

【名师点睛】选择培养基是指通过培养混合的微生物，仅得到或筛选出所需要的微生物，其他不需要的种类在这种培养基上是不能生存的，筛选尿素分解菌需要使用以尿素为唯一碳源的选择培养基。

15．下列有关分解纤维素微生物的分离的叙述，正确的是

A．纤维素酶的发酵方法有液体发酵和半固体发酵B．对分解纤维素的微生物进行了初步筛选后，无需再进行其他实验C．纤维素酶的测定方法，一般是对所产生的葡萄糖进行定量的测定

D．两种刚果红染色法不会出现相同的透明圈

二、非选择题（本大题共5小题，共40分）

16．（8分）聚对苯二甲酸乙二酯（PET）是塑料类水瓶的重要原料，科学家发现了以PET为碳源和能量来源的细菌，该发现对PET类材料的回收利用、环境治理意义重大。

请回答下列问题：

（1）实验小组欲从土壤中获取PET降解菌，需将土壤样品置于________为唯一碳源的培养基中进行选择培养，其目的是______________。

（2）该实验小组选取PET浓度为800mg·

L-1的富集液进行系列稀释，分别取10-3、10-4和10-5倍数的稀释液0.1mL涂布于培养基上，每个稀释倍数涂布三个平板，各平板的菌落数分别为（286、298、297），（35、32、31），（36、7、2），不适合用于计数的为________倍数的稀释液，用另外两组稀释倍数的稀释液进行计数得到的细菌数不一致的原因可能是__________________________。

（3）倒平板时应使锥形瓶的瓶口通过火焰，目的是________。

在倒平板的过程中，如果培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，则这个平板不能用来培养大肠杆菌，原因是____________。

用平板划线法纯化PET降解菌的过程中，在第二次及其后的划线操作时，须从上一次划线的末端开始划线，原因是__________。

（4）在保藏PET降解菌菌种时，可采取____________的方法进行长期保存。

【答案】

（8分，除标明外，每空1分）

（1）PET增加PET降解菌的浓度，以确保能分离得到目的菌

（2）10-5稀释倍数为10-3时，更多的菌落连在一起最终形成单菌落，导致结果小于稀释倍数为10-4组的结果（2分）

（3）灭菌，防止微生物污染空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生使细菌数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而成的菌落

（4）甘油管藏

17．（8分）土壤中的纤维素分解菌能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。

从土壤中分离纤维素分解菌的实验流程如下：

土壤取样→选择培养基→梯度稀释→鉴别培养基

（1）纤维素酶是复合酶，由C1酶、Cx酶和__________组成。

（2）实验室中微生物筛选常应用选择培养基的方法，原理是__________。

为分离得到纤维素分解菌，使用的培养基应以__________作为主要碳源。

（3）梯度稀释前进行选择培养的目的是__________，这一步一般选用__________（填“固体”或“液体”）培养基。

（4）梯度稀释后用__________（仪器）将菌种接种在培养基表面。

（5）用__________染色法鉴定纤维素分解菌时，培养基上的菌落周围会形成透明圈，其大小反映____________________。

（8分，每空1分）

（1）葡萄糖苷酶

（2）根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计纤维素

（3）增加纤维素分解菌的浓度液体

（4）涂布器

（5）刚果红产生纤维素酶能力大小（或产生纤维素酶的多少）

18．（8分）现在大力提倡无纸化办公，但是每年仍然不可避免的要产生大量的废纸，废纸的主要成分是木质纤维，人类正努力将其转化为一种新的资源——乙醇。

下图是工业上利用微生物由纤维素生产乙醇的基本工艺流程，请回答相关问题。

（1）自然界中①环节需要的微生物大多分布在_______的环境中。

将从土壤中获得的微生物培养在以______为碳源、并加入_____的培养基上筛选周围有_______的菌落。

（2）在如上所述的筛选中获得了三个菌落，对它们分别培养，并完成环节②，且三种等量酶液中酶蛋白浓度相同，则你认为三种酶液的活性__________（填“一定相同”“不一定相同”或“一定不同”）。

（3）生产中可以满足④环节的常见菌种是_____，为了确保获得产物乙醇，⑤环节要注意___________________。

（1）富含纤维素纤维素刚果红透明圈

（2）不一定相同

（3）酵母菌发酵装置的密闭性（或保证无氧条件等）（2分）

19．（8分）尿素是一种高浓度氮肥长期施用没有不良影响，但尿素只有通过土壤中某些细菌分解为氨后，才能被植物吸收利用。

分解尿素的细菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解。

某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下：

KH2PO4

Na2HPO4

MgSO4·

7H2O

蛋白胨

葡萄糖

尿素

琼脂

1.4g

2.1g

0.2g

l.0g

10.0g

15.0g

（1）根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌_______（能/不能），原因是_____________________，不能选择出只分解以尿素为氮源的微生物。

（2）接种前要对培养基进行_______。

在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在______条件下进行。

（3）一同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是________________，应当怎样操作才可避免此种现象？

___________________________。

（4）获取分解尿素的细菌后，如要临时保存，可将其接种在___________培养基上，等长成菌落后放在4℃的冰箱中保存。

若要长期保存，可以采用___________的方法。

（1）不能培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源

（2）灭菌无菌

（3）菌液浓度过高对菌液进行梯度稀释（加大稀释倍数）

（4）固体斜面甘油管藏

20．（8分）下图表示研究者从土壤中筛选分解尿素的细菌并计数的相关实验,请据图回答下列问题。

（1）进行过程①和②的目的分别是______和_______________;

图中弧线箭头上“?

”的具体操作是_______。

（2）进行培养基配制和灭菌时,灭菌与调节pH的先后顺序是__________。

倒平板时,待平板冷却凝固后,应将平板倒过来放置,并用记号笔在皿底上标明培养的微生物名称、平板上培养样品的稀释度、制作者姓名、培养日期及培养基种类等信息。

纯化菌种时为了得到单一菌落,常采用的接种方法是___________________。

（3）在以尿素为唯一氮源的培养基中加入______。

培养后,若出现___色,说明其中含有能够分解尿素的细菌。

（4）在实验中,研究者每隔24小时统计一次菌落数目,并选取菌落数目稳定时的记录作为结果,这样可以防止_________________________。

（1）选择培养增加分解尿素的细菌的数量挑出菌落

（2）先调节pH,后灭菌平板划线法、稀释涂布平板法

（3）酚红指示剂红

（4）因培养时间不足导致遗漏细菌数目

【点睛】从土壤中分离尿素分解菌的一般步骤是：

土壤取样、选择培养、梯度稀释、观察与测定，所以①是选择培养，②为梯度稀释，③是稀释涂布平板法接种培养。