无菌检测方法文档格式.docx
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4.设备、器皿、药品的准备
设备的准备
电子天平、干热灭菌箱、高压灭菌箱、洁净工作台、放大镜、移液枪、电热培养箱、霉菌培养箱、冰箱、斜口钳、接种环、酒精灯
器皿的准备
锥心瓶(500ml)、烧杯(1000ml)、试剂瓶(60ml)、量筒(50ml、1000ml)、培养皿(Ф90mm×
15mm)、斜口钳、玻璃棒。
药品的准备
硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基、纯化水、无菌氯化钠溶液。
5.器皿的清洗
将所需的锥形瓶、烧杯、试剂瓶、培养皿、玻璃棒放入超声波清洗机中用纯化水清洗两次,每次15分钟,将清洗完的器皿在180℃条件下进行干热灭菌2小时。
6.取样
按灭菌批次或者生产批次进行取样,随机抽取同一型号的产品4件作无菌检测样品
7.培养基的制备
硫乙醇酸盐流体培养基的制备
取15g硫乙醇酸盐流体培养基和1000ml纯化水于烧杯中混合,加热至微沸(注意加热过程中要不断地搅拌,使其混合均匀)用棉花塞塞紧复用无尘布和绳子绑好后转移至高压灭菌锅内灭菌,灭菌温度为121℃,灭菌时间30分钟。
灭菌后摇均,冷却至45℃待用。
胰酪大豆胨液体培养基的制备
取15g胰酪大豆胨和1000ml纯化水于烧杯中混合,操作方法同。
8.培养基灵敏度检查
菌种的要求
培养基灵敏度检查所用的菌株(金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)传代次数不得超过5代。
菌液的制备
接种金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基上,30-35℃培养24小时;
接种枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基上,20-25℃培养24小时。
将上述经24小时培养后的培养物用﹪无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu(菌落形成单位)的菌悬液。
制备好的菌液应在2-8℃条件下保存,并在24小时内使用。
接种及培养
取每管装量15ml的硫乙醇酸盐流体培养基3支,其中2支接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌,另一支不接种作为空白对照,30-35℃培养3天逐日观察并记录。
取每管装量10ml的胰酪大豆胨液体培养基3支,其中2支接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌,另1支不接种作为空白对照,20-25℃培养5天,逐日观察记录。
灵敏度检测结果判断
空白对照管应无菌生长,若加菌的培养基试管菌落均生长良好,则判定该培养基的灵敏度检查符合规定。
9.供试品的无菌检测
对照试验
取每管装量15ml的硫乙醇酸盐流体培养基3支,接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌,另一支不接种作为空白对照,30-35℃培养14天逐日观察并记录。
取每管装量10ml的胰酪大豆胨液体培养基3支,其中2支接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌,另1支不接种作为空白对照,20-25℃培养14天,逐日观察记录。
供试品的准备及接种
于微生物实验室超净工作台内将样品剪成小碎段(2~3cm),其中2件接种于各培养皿足以浸没供试品的适量硫乙醇酸盐流体培养基中,另外2件接种于各培养皿足以浸没供试品的适量胰酪大豆胨液体培养基中,冷却。
培养
将接种过的硫乙醇酸盐流体培养基的培养皿倒置于电热培养箱中30~35℃条件下培养14天,逐日观察是否有菌落生长并记录;
将接种过的胰酪大豆胨液体培养基的培养皿倒置于霉菌培养箱中20~25℃条件下培养14天,逐日观察是否有菌落生长并记录。
10.供试品无菌检测结果判定
若上述接种后的培养基经14天培养后均无菌落生长,则可判定供试液为无菌,即为合格;
反之,则为不合格。
11.无菌检测报告(见附表1)
无菌检测报告
检测依据
《中国药典》2015版
检测日期
样品数量
样品批号
样品名称
样品规格
培养基的灵敏度检测
硫乙醇酸盐流体培养基(培养3天)
胰酪大豆胨培养基(培养5天)
培养天数
接种金黄色葡萄球菌
空白
接种枯草芽孢杆菌
1
2
3
4
5
结论:
日期:
供试品的无菌检测
硫乙醇酸盐流体培养基(培养14天)
改良马丁培养基(培养14天)
金黄色葡萄球菌
样品1
样品2
白色念珠菌
样品3
样品4
6
7
8
9
10
11
12
13
14
报告日期:
备注
“+”表示有菌生长;
“-”表示无菌生长;
培养基的灵敏度检测中空白试验应无菌生长,接种过菌液的应生长良好,否则培养基不合格;
在培养基灵敏度检测合格的前提下,若供试品的无菌检测中接种过菌液的应生长良好,空白试验和样品的检测应无菌生长;
否则供试品的无菌检测不合格。
检测者
复核者