LB培养基的制备.doc

LB培养基的制备.doc

《LB培养基的制备.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《LB培养基的制备.doc（2页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

LB培养基是一种近年来用于培养基因工程受体菌（大肠杆菌）的常用培养基。

LB一般被解释为Luria-Bertani培养基，然而根据其发明人贝尔塔尼（GiuseppeBertani）的说法，这个名字来源於英语的lysogenybroth，即溶菌肉汤。

LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。

它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。

其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。

琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。

琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。

固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。

LB培养基的配方如下：

酵母提取物5g

蛋白胨10g

NaCl5g

琼脂15～20g

水1000mL

pH7.4～7.6

三、器材

酵母提取物，蛋白胨，NaCl，琼脂；

1mol/LNaOH，1mol/LHCl；

试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH5.5～9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。

四、操作步骤

1．称量

按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。

蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。

另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。

2．溶化

在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。

待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。

如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。

最后补足所失的水分。

3．调pH

在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。

反之，则用1mol/LHCl进行调节。

注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。

对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。

4．分装

按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。

分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。

（1）液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。

（2）固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

（3）半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。

5．加塞

培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。

6．包扎

加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。

用记号笔注明培养基名称、组别、日期。

三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。

7．灭菌

将上述培养基以1.05kg/cm2（15磅/英寸2），121.3℃，20分钟高压蒸汽灭菌。

如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。

8．搁置斜面

将灭菌的试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。

9．无菌检查

将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24～48小时，以检查灭菌是否彻底。