荧光物质稀溶液的激发发射和同步荧光光谱测定Word格式文档下载.docx

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不变，扫描得到的荧光强度与发射波长

的关系曲线，称为荧光发射光谱；

反之，保持

不变，扫描得到的荧光强度与

的关系曲线，则称为荧光激发光谱。

在一定条件下，荧光强度与物质浓度成正比，这是荧光定量分析的基础。

荧光分析的灵敏度不仅与溶液的浓度有关，而且与紫外光照射强度及所选测量波长等因素有关。

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苯酚由于其共轭结构，有荧光活性，可以用荧光分析法测定。

它们的激发光谱和发射光谱有互相重叠的现象。

对于复杂组分，当激发光谱和发射光谱有互相重叠的现象时，可以用同步荧光扫描，同步扫描荧光光谱技术可以简化、窄化光谱，提高选择性。

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三.实验仪器和试剂

1.LS-55型发光谱仪。

2.移液枪（德国BRAND公司生产>

。

3.50ml容量瓶，25ml容量瓶10支。

4.苯酚储备液：

960mg/L

5.去离子水。

四.实验内容

1.预扫描（pre-scan>

用储备液配制浓度为10ppm<

mol/L）的工作液，设定仪器参数，进行全波长预扫描，并记录扫描结果，得出最大激发和发射波长，同时查看其瑞利散射波长、以及双倍频峰波长。

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2．激发光谱、发射光谱和同步荧光扫描

①设定合适的参数，分别对苯酚溶液进行荧光激发、发射和同步荧光光谱扫描。

②取浓度为0.010<

mol/L）的工作液，扫描发射光谱，加水稀释后再在同样波长下扫描发射光谱，观察荧光猝灭效应。

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发射光谱参数：

扫描波长范围200—750nm；

Ex=214nm、270nm，扫描速度=1000nm/min,Ex-Slit=10nm,Em-slit=5nm,，记住取文件名。

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激发光谱参数：

扫描波长范围200-750nm，

=300nm、586nm，扫描速度=1000nm/min,Ex-Slit=10nm,Em-slit=5nm,记录信息。

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同步荧光光谱：

扫描波长范围250-750nm,Δλ（

-

>

=30nm、86nm,扫描速度=1000nm/min,Ex-Slit=10nm,Em-slit=5nm,记录信息。

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3．三维荧光光谱扫描

设定发射波长范围，激发开始波长，步长，测定数目，开始进行苯酚三维荧光光谱扫描。

五．数据处理

1、<

1）苯酚发射光谱

<

2）苯酚的激发光谱

3）苯酚的同步荧光光谱

2、对比不同浓度下的苯酚的最大激发波长和最大发射波长处的峰高，了解荧光猝灭效应。

浓度为0.01<

mol/L）的苯酚溶液，所得曲线如下：

将溶液稀释为0.01<

mol/L）再以同样的条件扫描荧光强度与发射光波长的关系曲线，所得曲线如下：

3、不同狭缝宽度对光谱图的影响：

减小狭缝宽度，所得曲线如下：

4、不同参数设置对光谱图的影响：

升高电压值：

减小浓度值：

255nm：

5、三维荧光光谱

六．讨论与思考

1．对待测溶液进行预扫描的有何作用？

答：

可以找出最大峰强的适宜波数，检测出待测样品的出峰范围，查看倍频峰的干扰情况。

2．观察激发光波长的整数倍处荧光发射光谱有何特点？

该波长是否适合于进行定量分析？

激发光波长的整数倍处出现倍频峰，该波长不适合用于进行定量分析，因为那是激发光的散射峰，可以通过增加高通滤光片来去除。

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3．同步荧光技术有哪些优点？

比较激发、发射和同步荧光光谱中的峰值及对应波长，比较他们的不同，并解释原因。

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同步扫描荧光光谱技术可以窄化谱带，减小光谱的重叠，减小散射光的影响，提高选择性。

激发光谱在220nm处有峰值480，发射光谱在305nm处有峰值550，Δλ=51nm的同步荧光光谱在270nm处有峰值350，Δλ=80nm的同步荧光光谱在220nm处有峰值690。

在激发光谱和发射光谱重叠波长处同步荧光光谱才产生信号。

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4．比较紫外分光光度法和荧光分析法的区别和各自的优缺点。

荧光分析法的灵敏度和选择性较高，与紫外分光光度法相比，其灵敏度可高出2~4个数量级，其检测下限通常可达0.1~0.001μg/cm3。

荧光分析法是测量荧光强度，紫外分光光度法是测量吸光度A。

对于很稀的溶液，由于吸收光的强度IA值很小，lg（I0/（I0-IA>

接近于零，其浓度就不能从lg（I0/（I0-IA>

反映出来，因此测定灵敏度受到一定限制。

另外，即使将光信号放大，比值I0/（I0-IA>

仍然不变。

而荧光强度的灵敏度取决于检测器的灵敏度，即只要改进光电倍增管和放大系统，使极微弱的的荧光也能被检测到，就可以测定很稀的溶液浓度。

但需要注意的是，荧光分析法的应用范围比较小，必须是具有共轭π键结构或刚性平面结构的荧光物质。

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