水飞蓟的药理学研究进展文档格式.docx

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其中水飞蓟宾活性最高，含量占水飞蓟素的50%-70%。

水飞蓟素在整个植物中均有发现，但在果实和种子中较为集中。

水飞蓟素作为抗氧化剂能减少自由基的产生和脂质过氧化作用，作为毒素阻断剂通过抑制毒素向肝细胞受体粘合抗纤维化。

水飞蓟素能减小由于醋氨酚、四氯化碳、放射、铁超载、苯肼、酒精、毒鹅膏等造成的动物肝损伤模型。

水飞蓟素已经用于治疗酒精性肝病、急性和慢性病毒性肝炎、毒素引发的肝病。

另外，通过药理实验研究，水飞蓟还具有降血脂、保护心肌、抗炎、抗过敏、保护脑组织的作用。

1化学成分

水飞蓟原料药包含15-30%的脂类，主要是甘油三酯类；

30%蛋白质和糖（阿拉伯糖、鼠李糖、木糖、葡萄糖）；

维生素E（0.038%），甾醇类（0.063%）包括胆固醇、菜油甾醇、豆甾醇，黄酮木脂素包括槲皮素、紫杉醇、圣草素、甲氧基木犀草素（表），其中黄酮木脂素类有主要活性。

水飞蓟素主要包括：

水飞蓟宾A、B（大约为50-60%），异水飞蓟宾（约5%），水飞蓟亭（约20%），水飞蓟宁（约10%）等。

该药物可以通过薄层色谱法（TLC）或高效液相色谱法（HPLC），分光光度法的一些细微特征来确认。

2药代动力学

人类口服水飞蓟素后有20-50%被吸收，给药量的80%经胆汁排泄，10%进入肝肠循环。

其药代动力学主要是研究其主要成分水飞蓟宾的变化。

水飞蓟宾的生物利用度很低，几个影响生物利用度的因素如下：

（i）药剂中的伴随物的增容性，如其他的黄酮木脂素、苯酚、氨基酸、蛋白质、生育酚、脂肪、胆固醇等；

（ii）药剂本身[2]。

系统性的生物利用度可以通过向提取物中添加增溶剂来提高[3]，也可以通过胶囊材料如磷脂酰胆碱或β-环糊精的络合作用[4，5]。

提高水飞蓟宾的生物利用度是目前的一个研究热点，如制备水飞蓟宾磷脂复合物[6]，水飞蓟宾脂质微球[7]，水飞蓟素羟丙基-β-环糊精包合物[8]等，这些新制剂均能在一定程度上提高水飞蓟宾的生物利用度。

在男性志愿者中，水飞蓟宾标准剂量100-360mg单次口服给药后，水飞蓟宾血浆浓度Cmax约2h，范围在200-400μg/L，将近75%以结合形式出现[9，10]。

水飞蓟宾半衰期估计约为6h。

口服给药剂量的3%-8%从尿中排泄，20-40%以葡萄糖醛酸苷和硫酸盐轭合物的形式从胆汁重吸收，剩余部分通过粪便排泄（没有变化，未吸收）。

水飞蓟宾在胆汁中的浓度比在血清中的浓度高将近100倍，最高浓度在2-9h内出现[11]。

Barzaghi和同伴调查了水飞蓟宾磷脂酰胆碱复合物（IdB1016）的药代动力学，发现人类健康受试者口服生物利用度提高，有可能是复合药物通过胃肠道时药物通路的易化作用。

在肝硬化患者中IdB1016的生物利用度比水飞蓟素高好几倍[12]。

水飞蓟的药代动力学研究有很多，大多数是研究其主要成分水飞蓟宾的变化，有人对水飞蓟宾A和水飞蓟宾B分别进行研究[13]，也有人对其中六种主要成分（水飞蓟亭，水飞蓟宁，水飞蓟宾A、B，异水飞蓟宾A、B）分别进行研究，得到这六个成分游离体、结合体和总量在不同时间在大鼠体内的浓度变化[14]。

实验对象有小鼠、大鼠、犬[15]、人等，动物实验主要是研究一些新剂型的水飞蓟宾的药代动力学，人体志愿者主要是研究现有市售的水飞蓟制剂的药代动力学[16，17]。

实验对象不同，药代动力学参数也不相同，相互之间没有可比性。

3药理学研究

目前的一些药理研究已经表明水飞蓟素有保肝，抗氧化，抗炎，抗纤维化作用，另外，它还能刺激蛋白质生物合成和肝脏再生，增加泌乳和免疫调节活性。

下面将分别介绍这些作用的研究。

3.1抗炎和免疫调节活性

水飞蓟素在细胞的不同结构和通路中显示抗炎和免疫调节活性。

位于细胞膜的肿瘤坏死因子受体（TNFα-R）超家族和同源的胞浆区被称为死亡结构域（DD），其在细胞凋亡初期和受体与配体结合后的信号通路很重要[9]。

临床前试验表明水飞蓟素能保护α-鹅膏菌素诱导的肝细胞中TNF-α[18]，可能是通过从属活性氧族（ROS）机制[19]。

给用烟曲霉毒素B1（神经酰胺合酶抑制剂）造模小鼠以750mg/kg/day水飞蓟素灌胃治疗，水飞蓟素能防止烟曲霉毒素B1诱导的肿瘤坏死因子受体1（TNF-R1）表达增加，淋巴毒素β和干扰素-γ的诱导的TNF-R1相关的细胞凋亡（半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶通路）[20]。

一些迹象表明水飞蓟素能抑制粘附分子如E-选择蛋白的表达[21]，另外一些跨膜分子家族在白细胞表面独特表达和相关的炎症通路。

在离体细胞，水飞蓟素能减少依赖凝集素和自然杀伤细胞介导的细胞毒性，但对抗体依赖性细胞介导诱变细胞毒性无作用（ADCC）[22]。

在体内水飞蓟宾达到一定高浓度能抑制细胞质中5-脂氧合酶途径，尤其是白三烯B4（LTB4）的减少，很好表现了水飞蓟素中枢药理性质。

有研究表明，在离体的枯否细胞中，水飞蓟宾的IC50为15μmol/L时对LTB4群系有强烈的抑制作用[23]。

在猪的基部动脉（IC50=100μmol/L），人的血细胞和网膜内皮细胞有相似的结果[24]。

水飞蓟素抗炎药细胞核内DNA/RNA介导作用包括核因子κB（NF-κB），它一种在炎症细胞中普遍存在的迅速反应的转录因子。

同时肝脏急相反应许多基因编码蛋白在转录因子NF-κB的控制下[25]。

非活性NF-κB存在细胞质中，复杂伴随抑制蛋白I-κB、NF-κB在一些来自细胞表面的输入信号下有活性。

I-κB抑制的释放，NF-κB转移到细胞核和与靶基因的κB基序结合。

NF-κB的活化过程每一步都能在药理制剂下抑制，如糖皮质激素类、环孢菌素、他克莫司和抗氧化剂[26]。

在体外发现水飞蓟素抑制NF-κBDNA的κ基序结合活性，依赖肝瘤细胞基因表达。

另外，水飞蓟素阻滞NF-κBp65蛋白（通过磷酸化作用）向没有能力结合DNA的细胞核转化[27]。

水飞蓟素可以抑制TNF-α诱导胞外信号调节激酶和c-JunN-terminal的激活，阻断TNF-α诱导的细胞毒性和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶活性[9]。

Kang等报道在相对高浓度（12.5–25μg/mL）下，水飞蓟素抑制一氧化碳产物巨噬细胞中一氧化氮合酶基因表达[28]。

脂多糖（LPS）治疗的小鼠，口服剂量为100mg/kg时通过腹膜巨噬细胞减弱一氧化碳产物。

鼠离体腹膜巨噬细胞中，水飞蓟素抑制LPS诱导产物作用与浓度相关。

另外，在LPS受激的鼠类的RAW264.7细胞中，水飞蓟素能完全取消iNOSmRNA和其蛋白表达。

这些结果表明，水飞蓟素通过抑制NF-κB/Rel活性抑制一氧化碳产物和iNOS基因表达。

Chü

mann用水飞蓟宾在伴刀豆球蛋白A（ConA）诱导的T细胞相关肝炎的试验，也证实了同一结论[29]。

在体内已证实，水飞蓟宾是免疫应答修饰基因，抑制肝内的表达肿瘤坏死因子，干扰素，白介素（IL）-4，IL-2和iNOS，扩张合成IL-10，另外水飞蓟宾抑制肝内NF-κB活性。

保肝药主要的活性表现在抑制肝内的NF-κB活性，其能阻止TNF，IFN-g，IL-2andiNOS的后续合成。

而且，当IL-10合成增加时，IL-4的产物会抑制。

3.2增加蛋白质合成

不管是急性还是慢性肝炎，肝细胞再生是肝脏恢复必然条件。

在慢性病中，纤维化和细胞再生是同时发生的，最后结果取决于哪种占主导地位。

Zetl等报道，在腹膜内给水飞蓟宾，大鼠肝脏内核糖体核糖核酸合成有显著增加（聚合酶Ⅰ增加），水飞蓟宾还能刺激部分肝切除大鼠的DNA合成，但在健康或肝细胞瘤、肿瘤细胞则不然[30，31]，这种作用的确切机制尚不清楚，可能是聚合酶Ⅰ的激活作用。

一些临床试验发现水飞蓟宾能激活核糖核酸、聚合酶Ⅰ、核糖体核糖核酸，这种作用促使更快速的核糖体形成，依次增加蛋白质形成。

这种作用在修复被损坏的肝细胞和恢复正常肝脏功能有重要的治疗性意义。

3.3抗纤维活性

肝纤维化可导致肝脏结构重塑从而导致肝功能不全，门静脉高压症，肝性脑病，这些过程涉及复杂的细胞相互作用[32]。

初始阶段肝实质细胞增殖发展，肝星状细胞（HSC）转化为肌成纤维细胞被认为是在纤维化最重要事件。

大量的动物研究表明水飞蓟素有抗纤维活性，其能抑制NF-κB和减慢HSC活性，同时抑制蛋白激酶类和其他有关信号传导激酶类，可能干扰细胞内信号通道。

有报道称对慢性四氯化碳肝损伤大鼠，口服给水飞蓟素（50mg/kg）可以减少肝脏胶原蛋白含量至55%（模型组比对照组含量高4-6倍），给胆道堵塞大鼠可以减少胶原质和前胶原质Ⅲ至30%。

胆管纤维化大鼠中，水飞蓟素可能通过下调大鼠TGF-β1mRNA的表达抑制前纤维化前胶原α1（Ⅰ）和TIMP-1的表达[33]。

给酒精诱导肝纤维化狒狒3年水飞蓟素能使病情发展缓慢[34]。

3.4抗氧化作用

肝病中涉及到的自由基包括超氧阴离子（O2-）、羟自由基（OH-）、过氧化氢（H2O2）和次亚氯酸阴离子（HOCl-）[35]。

自由基在双分子细胞膜内ROS诱导的多不饱和脂肪酸过氧化反应，这是造成脂质过氧化的主要反应，其还能破坏细胞膜造成细胞膜、脂质、蛋白进一步氧化[36]。

通过水飞蓟宾对相关的ROS或氧化剂如O2-、H2O2、HO-、HOCI反应的研究来评价其抗氧化性[37]。

一些临床前实验报道水飞蓟对O2-不是很好的清除剂，对H2O2没作用（IC50%>

200μmol/L）。

但游离溶液的扩散控制率IC50%=1.2–7μmol/L时对HO-自由基有快速的反应。

据报道在体外培养的酒精性肝硬化患者的淋巴细胞，给相当于通常的治疗剂量浓度的水飞蓟素能显着增加超氧化物歧化酶的表达（SOD）[38]。

水飞蓟素对乙醇代谢并没有直接影响，对降低乙醇水平或乙醇是从人体清除率也没有作用。

事实上，没有水飞蓟素或水飞蓟宾与细胞色素P450-2E1有相互作用的证据，只能表明这些抗毒作用是由于其抗氧化和清除自由基的性能[39]。

水飞蓟素中酚的构象被认为是允许稳定化合物的羟基和氧自由基的形成[40]。

在大鼠体内的研究表明，水飞蓟素可减少自由基的负荷。

对于暴露于对乙酰氨基酚在有毒的剂量中的大鼠，用水飞蓟素治疗组与对照组相比，能增加超氧化物歧化酶和谷胱甘肽的含量[41]。

此外其他研究表明，通过判断谷丙转氨酶变化水平，水飞蓟素能抑制暴露于四氯化碳和半乳糖中分离的肝细胞的细胞溶解[42]。

在体外实验中，对乙酰氨基酚，顺铂，长春新碱猿而受损的猴肾细胞，在药物诱导的损伤之前或之后给于水飞蓟宾，证实可以减少或避免毒性影响。

预防性给水飞蓟素治疗可以阻止顺铂的肾毒性，而后给药在一定程度上减少一些毒性。

3.5毒素阻断作用

水飞蓟素是合适的可选药物来治疗医源性和毒性肝脏疾病。

它对膜和细胞线粒体通透性有调控功能，能增加膜的稳定性对抗异物损害。

它通过占领结合位点防止毒素吸收进入肝细胞，以及抑制膜上很多运输蛋白质。

以竞争的方式抑制鬼笔环肽系统，其属于肝细胞特定的有机负离子的吸收转运OATP2[43]，水飞蓟素对膜流动性的没有影响[44]。

OATP2能代表部分肝功能，清除由引起胆汁酸，脂溶性激素或外来物质肝门静脉血。

运输系统混合毒伞七肽类进入肝细胞，导致细胞死亡。

鬼笔环肽（双环七肽）和蕈环十肽（毒鹅膏中单环十肽）与肝细胞膜上胆汁盐结合多肽相互作用。

所以，水飞蓟宾能减少细胞吸收有害外源物（如蘑菇毒），从而发挥细胞保护作用。

3.6并发症及不良反应

据报道水飞蓟素有很好的安全性。

志愿者单次口服水飞蓟素（剂量相当于254mg水飞蓟宾）后，未观察到副作用[45]。

各种原因的肝功能紊乱患者，口服水飞蓟素（600-800mg/day）6个月，没有不良反应[46]。

临床试验涉及约3500例，其中2637肝疾病，利加隆（560mg/day）8周治疗报告说水飞蓟素不良反应约为1%。

不良反应是暂时的，如胃肠不适腹胀，恶心，消化不良和腹泻[47]。

研究表明，成人在240-900mg/day剂量范围内单次口服，水飞蓟素无毒且无副作用。

在超过1500mg/day的高剂量下，水飞蓟素可能会产生轻微腹泻的作用伴随有胆汁流动和分泌的增加。

尚没有随机最优控制的研究，也没有最大治疗剂量的界定。

大多数试验报道，合理的水飞蓟素每日剂量为420-600mg[错误！

未定义书签。

]。

然而，有报告描述水飞蓟素的不良反应。

这些症状包括严重出汗，腹部痉挛，恶心，呕吐，腹泻和虚弱[48]。

另一份报告中报告一个即时型猕猴桃过敏的54岁男子有过敏性休克反应[49]。

临床前数据没有记录水飞蓟素和水飞蓟宾的急性毒性。

尤其是水飞蓟素，小鼠和狗口服给药剂量为20或1g/kg不产生不良反应或死亡。

给大鼠长期口服水飞蓟素（100mg/kg/day）22周没有不良反应[错误！

水飞蓟素对菊科过敏的人禁忌。

根据现有数据，上述提到的研究一些问题可以部分验证。

不同的问题通常是发生在不同的试验中，虽然这些问题是相互关联的，但它们必须被视为个体差异而不能合并成一个整体问题。

食管静脉曲张出血症是肝硬化最严重的并发症之一。

在两个最大的试验中，上消化道出血总发病率（UGBs）报道为：

水飞蓟素4.6%和6.3%，安慰剂9.6%和13.5%，显示积极治疗差异[p=0.042；

优势比（OR）为0.44（95%CI为0.20，0.97）][50]。

这些结果表明，UGBs率下降反映了患者整体的改善，也证明了水飞蓟素不是低肝脏相关死亡率的直接影响。

4未来展望

最近报道，水飞蓟黄酮木脂素类有癌症化学预防作用[51]。

水飞蓟素调节细胞的存活和凋亡的失衡，通过干扰细胞周期调控因子和蛋白质的表达参与细胞凋亡。

此外，还发现水飞蓟素抗炎，抗血管生成和抗转移效果[52]。

特别是水飞蓟素及其主要活性成分水飞蓟宾，在各种体外和体内包括肝癌的癌症模型研究保护作用，建议他们应当建立在治疗的附属品在这些患者的临床应用，以防止或减少化疗以及放疗引起的毒性。

水飞蓟宾介导的抗增殖作用的分子机制主要是通过受体酪氨酸激酶，雄激素受体，核因子-κB，细胞周期在各监管及凋亡信号通路癌细胞。

进一步研究水飞蓟素化疗效果十分必要。

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