GSTπTopoⅡPgpKi67及P53联合测定在结直肠癌中的表达及应用研究Word下载.docx

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　　【关键词】结直肠癌；

生物标志物；

表达；

联合检测；

预后

　　【Abstract】Objective：

ToinvestigatetheexpressionanditsclinicalsignificanceofGST-π，TopoⅡ，P-gp，Ki-67andP53incolorectalcancertissue.Method：

Atotalof24casesofcolorectalcancerwhohadnotbeentreatedbeforesurgeryinourhospitalfromJanuary2014toJune2015wereselectedastheresearchobjects，theyweredividedintotheprognosissurvivallessthan1yeargroupwith8casesandtheprognosissurvivalmorethan1yeargroupwith16casesaccordingtotheprognosis，therelationshipbetweenGST-π，TopoⅡ，P-gp，P53，Ki-67expressionandclinicalpathologicalfeatureswereanalyzedandthepositiveexpressionrateofGST-π，TopoⅡ，P-gp，P53，Ki-67werecompared.Result：

For24casesofcolorectalcancer，GST-πexpressionwaspositivein9cases（lowexpressionin7cases，moderateexpressionin2cases），TopoⅡexpressionwaspositivein23cases（lowexpressionin15cases，moderatein8cases），P-gpexpressionwaspositivein23cases（lowexpressionin8cases，moderatein15cases），Ki-67expressionwaspositivein24cases（lowexpressionin3cases，moderatein11cases，highlyexpressedin10cases），P53expressionwaspositivein10cases（lowexpressionin3cases，moderatein3cases，highlyexpressedin4cases）.Theprognosissurvivalmorethan1yeargroupofGST-πandP53expressionpositiveratewasall12.5%，significantlylowerthanthatoftheprognosissurvivallessthan1yearsgroup，thedifferenceswerestatisticallysignificant（P0.05）.Conclusion：

CombineddetectionofGST-π，P-gp，TopoⅡ，Ki-67andP53contributetocolorectalcancerearlydiagnosisandevaluatetheprognosisofpatients，itisworthyofclinicalpromotion.

　　【Keywords】Colorectalcancer；

Biomarker；

Expression；

Combineddetection；

Prognosis

　　First-author’saddress：

TraditionalChineseMedicineHospitalofZhaoqingCity，Zhaoqing526020，China　　doi：

10.3969/j.issn.1674-4985.2016.12.001

　　结直肠癌是消化道系统常见的恶性肿瘤之一，随着肿瘤生物标记物研究的深入，大量研究证实，正谷胱甘肽-S-转移酶-π（GST-π）、DNA拓扑异构酶（TopoⅡ）、P-糖蛋白（P-gp）、Ki-67抗原（Ki-67）、P53基因（P53）在结直肠癌患者的表达与健康体检者存有差异，为结直肠癌的早期诊断、早期治疗提供了依据[1-3]。

但是，流行病学调查显示，虽然其早期诊断准确率提高，但是结直肠癌患者术后5年生存率较低，而随着对肿瘤标记物认识的加深，发现GST-π、TopoⅡ等可能与结肠癌的形成、发展及预后密切相关[4]。

本研究选取2014年1月-2015年6月本院收治的24例结直肠癌患者作为研究对象，应用免疫组化法检测其结直肠癌组织的GST-π、TopoⅡ、P-gp、Ki-67及P53的表达，分析其表达与临床病理特征的关系，旨在为结直肠癌临床诊断、治疗及预后判断提供依据。

现报道如下。

　　1资料与方法

　　1.1一般资料选取2014年1月-2015年6月本院收治的术前未做化疗的结直肠癌患者24例作为研究对象，所有患者均有完整的随访资料，经病理证实均为腺癌，排除结直肠癌家族史、其他组织或器官的恶性肿瘤、严重精神疾病或依从性较差者。

其中男13例，女11例；

年龄42～84岁，平均（63.41±

7.69）岁；

肿瘤直径1.2～8.5cm，平均（4.76±

1.08）cm；

其中结肠癌12例，直肠癌12例；

病理类型：

黏液腺癌1例，息肉状管状、乳头状腺癌1例，管状、绒毛状腺瘤伴黏膜内癌1例，管状、绒毛状腺瘤局部黏膜重度不典型增生（黏膜内癌变）1例，乳头状腺癌1例，小细胞神经内分泌癌1例，中低分化2例，中分化15例，高分化1例；

淋巴结转移15例，未转移9例。

根据预后将其分为两组，预后生存>

1年组16例中，男9例，女7例；

年龄42～80岁，平均（62.5±

8.07）岁；

预后生存0.05），具有可比性。

　　1.2仪器与材料鼠抗人单克隆抗体GST-π（克隆号LW29）、TopoⅡ（克隆号3F6）、P-gp（克隆号C494）、Ki-67（克隆号MIB-1）、P53（克隆号DO-7）及即用型免疫组化MaxVisionTM检测试剂盒、3，3’-二氨基联苯胺（DAB）显色剂均购自于福州迈新公司。

石蜡组织切片机（LICA2245型）。

　　1.3方法制作结直肠癌组织石蜡切片9张，其中1张用于常规HE染色，其余8张用于免疫组化及备用。

应用免疫组化检测GST-π、TopoⅡ、P-gp、Ki-67及P53的表达，各项操作严格按试剂盒说明书进行，批内变异<

6.0%。

一般流程：

（1）切片室温脱蜡2次，以不同浓度酒精梯度脱苯、水化各

　　3min，以自来水冲洗3min，PBS浸泡2次；

（2）切片置入3%过氧化氢溶液，孵育15min，PBS浸泡2次；

（3）加入一抗，置入4℃冰箱过夜；

（4）PBS浸泡2次；

（5）加入二抗，室温下孵育10～15min；

（5）PBS浸泡2次；

（6）滴入DAB显色液，显色4～10min后以自来水水洗；

（7）经复染、盐酸酒精分化、返蓝后封片并判断结果。

结果选择10个高倍镜视野计算阳性比例，分级标准：

阴性指无阳性细胞染色；

弱阳性指阳性细胞1%～25%；

阳性指阳性细胞26%～50%；

强阳性指阳性细胞>

50%。

　　1.4统计学处理采用SPSS19.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±

s）表示，比较采用t检验，计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验，多组多分类资料采用秩和检验，以P<

0.05为差异有统计学意义。

　　2结果

　　2.1GST-π、TopoⅡ、P-gp、Ki-67及P53的表达及与临床病理特征的关系24例患者中，GST-π表达阴性15例，阳性9例（低度表达7例，中度表达2例）；

TopoⅡ表达阴性1例，阳性23例（低度表达15例，中度表达8例）；

P-gp表达阴性1例，阳性23例（低度表达8例，中度表达15例）；

Ki-67表达阴性0例，阳性24例（低度表达3例，中度表达11例，高度表达10例）；

P53表达阴性14例，阳性10例（低度表达3例，中度表达3例，高度表达4例）。

GST-π表达与分化程度有关（P<

0.05），TopoⅡ表达与发病部位有关（P<

0.05），P-gp表达与性别有关（P<

0.05），Ki-67表达与与肿瘤大小有关（P<

0.05），P53表达与发病部位有关（P<

0.05），见表1。

GST-π、TopoⅡ、P-gp、Ki-67及P53免疫组织化学染色结果见图1。

　　2.2两组不同指标表达阳性率比较预后生存>

1年组结直肠癌患者GST-π、P53的表达阳性率均为12.5%，明显低于预后生存0.05），见表2。

　　3讨论

　　结直肠癌是恶性程度高的消化道肿瘤之一，流行病学调查显示，其在我国人群中的发病率高达（20～30）/万人次，严重威胁着患者生命安全。

随着结直肠的基础和临床研究的进步，提高了结直肠癌的早期诊断准确度，但是由于肿瘤细胞耐药性导致结直肠癌的化疗疗效并不理想[5-7]。

近年来，随着分子生物学的发展，从癌基因、抑癌基因及肿瘤耐药基因研究癌症的发病原因、发病机制、治疗措施选择及影响预后的因素等成为临床关注的热点[8-11]。

　　GST-π是GST五个亚形中与肿瘤关系最密切的，其具有谷胱甘肽结合位点和一个亲电子物质结合位点，能够催化谷胱甘肽与化学药物、亲电性化合物结合降低化疗药物细胞毒性，且能够与亲电性药物结合促进药物外排，导致肿瘤细胞对化疗药物，如阿霉素、顺铂等产生耐药性[12]。

TopoⅡ作为拓扑异构酶抑制剂，能够调节核酸空间结构动态变化，其高表达使肿瘤复制加快，增加肿瘤的恶性程度，同时其还是胺丫啶、蒽环类和鬼臼毒素等药物的靶蛋白，活性降低会使抗癌药的靶点减少或丧失，与多药耐药性密切相关[13]。

P-gp由多药耐药基因1编码产生，其作为ATP结合盒转运蛋白超家族的一员，通过药物转运泵模式、疏水性真空清除泵模式将化疗药物从细胞内泵到细胞外，降低细胞内药物浓度，其表达程度与耐药程度成正比[14-15]。

此外，P53基因被认为是与人类肿瘤相关性最高、突变最频发的一种基因，其突变型作为致癌基因会促进细胞恶性转化、增殖，而Ki-67蛋白被认为是检测肿瘤细胞增殖动力学的最佳指标，其表达可诊断和预测肿瘤对治疗的敏感度及其结局。

　　本研究24例结直肠癌患者中，GST-π表达阴性15例，阳性9例，TopoⅡ表达阴性1例，阳性23例，P-gp表达阴性1例，阳性23例，Ki-67表达阴性0例，阳性24例，P53表达阴性14例，阳性10例，与文献[6]报道相一致。

对GST-π、TopoⅡ、P-gp、Ki-67及P53的表达与临床病理特征的关系进行研究，结果显示GST-π表达与肿瘤分化程度有关，TopoⅡ表达与年龄、发病部位有关，P-gp表达与年龄、性别有关，Ki-67与肿瘤大小有关，P53与发病部位有关。

因此，联合检测GST-π、TopoⅡ、P-gp、Ki-67及P53可以有效评估结直肠癌自然病程、恶性程度等。

1年组结直肠癌患者GST-π、P53的表达阳性率均为12.5%，明显低于预后生存0.05）。

考虑是由于样本量较少，患者个体差异较大，本研究仅为初步探索，需要更大样本量的研究来得出一个更为稳定和确切的结论。

　　综上所述，联合检测GST-π、TopoⅡ、P-gp、Ki-67及P53的表达有助于结直肠癌早期发现和评估患者预后。

　　参考文献

　　[1]LiY，HuP，CaoY，etal.Predictingtheoutcomeofplatinum-basedchemothcrapiesinepithelialovariancancerusingthe8092C/ApolymorphismofERCC1：

ameta-analysis[J].Biomarkers，2014，19

（2）：

128-134.

　　[2]李正贤，任伟耀，陈德明.85例结肠癌临床外科治疗近期疗效分[J].现代中西医结合杂志，2013，22（18）：

2000-2002.

　　[3]KarachaliouN，PapadakiC，LagoudakiE，etal.PredictivevalueofBRCA1，ERCC1，ATP7B，PKM2，TOPOI，TOPOⅡA，TOPOⅡBandC-MYCgenesinpatientswithsmallcelllungcancer（SCLC）whoreceivedfirstlinetherapywithcisplatinandetoposide[J].PLoSOne，2013，8（9）：

e74611.

　　[4]陈琼，刘志平，程兰平，等.2003～2007年中国结直肠癌发病与死亡分析[J].中国肿瘤，2012，21（3）：

179-182.

　　[5]姜慧员，梁小波，侯生槐，等.结直肠癌肝转移灶首次切除和复发后第二次切除对比的Meta分析[J].中华普通外科学文献（电子版），2011，5

（2）：

50-53.

　　[6]陈文海，田逸，师彦敏，等.中西医结合治疗晚期结肠癌疗效观察[J].现代中西医结合杂志，2014，23（11）：

1172-1174.

　　[7]张波平.142例结肠癌术后远期疗效观察[J].中国医学创新，2011，8（8）：

187-188.

　　[8]HealeyE，SfillfriedGE，EckermannS，etal.Comparativeeffectivenessof5-fluorouracilwithandwithoutoxaliplatininthetreatmentofcolorectalcancerinclinicalpractice[J].AnticancerRes，2013，33（3）：

1053-1060.

　　[9]吴久鸿，史宁，李冠群，等.肿瘤上皮间质转化中TGF-β作用机制及其活化酶抑制剂研究进展[J].中国药学杂志，2011，46（9）：

1461-1465.

　　[10]何涛.结肠癌患者根治术前后血清TSGF、CEA及AFP的变化与意义[J].中国医学创新，2012，9（7）：

30-31.

　　[11]李金淼，周桂台.P53蛋白表达在直肠肿瘤中病理意义[J].中国当代医药杂志，2012，19（20）：

118-119.

　　[12]夏国盛，王亚东，张文静，等.结肠癌细胞中TS、TP、GST-1T、PgP、MRPl表达对奥沙利铂化疗敏感性的预测价值[J].现代消化及介入诊疗，2010，15（3）：

147-150.

　　[13]王欣，傅仲学.CD44V6、P-gp、Top-Ⅱ在结直肠癌中的表达与临床病理的关系及其临床意义[J].重庆医科大学学报，2011，36

（2）：

163-167.

　　[14]黄炳臣，覃忠卫，罗春英，等.大肠腺癌中拓扑异构酶Ⅱα和Ki67的表达及意义[J].实用医学杂志，2012，28（10）：

1637-1639.

　　[15]师卫华，马微春，金晓菲.p-糖蛋白在乳腺癌组织中的表达及与患者预后的相关性分析[J].宁夏医科大学学报，2012，34（12）：

1302-1304.

　　（收稿日期：

2015-12-01）（本文编辑：

李颖）