生物参考资料化学习题Word文档格式.docx
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蛋白质是具有特定构象的大分子,为研究方便,将蛋白质结构分为四个结构水平,包括一级结构、二级结构、三级结构和四级结构。
一般将二级结构、三级结构和四级结构称为三维构象或高级结构。
一级结构指蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序。
肽键是蛋白质中氨基酸之间的主要连接方式。
由于肽键是指由一个氨基酸的α-氨基和另一个氨基酸的α-羧基之间脱去一分子水形成的相互连接,肽键具有部分双键的性质,使得肽键两侧的6个原子位于一个刚性平面,这个平面叫肽平面。
在多肽链的含有游离氨基的一端称为肽链的氨基端或N端,而另一端含有一个游离羧基的一端称为肽链的羧基端或C端。
肽链中的氨基酸由于形成肽键失去一份子水式的按键算成为不完整的分子形式,这种不完整的氨基酸叫氨基酸残基。
肽单元是指肽键中的4个原子及相邻的2个α-C原子相连所形成的长链结构。
二级结构是指多肽链骨架盘绕折叠所形成的有规律性的结构。
最基本的二级结构类型有α-螺旋结构和β-折叠结构,此外还有β-转角和自由回转。
右手α-螺旋结构(天然蛋白质)是在纤维蛋白和球蛋白中发现的最常见的二级结构,每3.6个氨基酸残基上升一圈,每圈高度为0.54nm,每个氨基酸残基上升0.15nm,沿轴旋转100º
,螺旋直径为0.5nm。
螺旋中的每个肽键均参与氢键的形成以维持螺旋的稳定。
β-折叠结构也是一种常见的二级结构,在此结构中,多肽链以较伸展的曲折形式存在,肽链(或肽段)的排列可以有平行和反平行两种方式。
氨基酸之间的轴心距为0.35nm,相邻肽链之间借助氢键彼此连成片层结构。
二级结构中,两个相邻平面之间,可以以共同的α-C旋转,绕α-C和N轴旋转形成的角为Ψ角,绕α-C和-C之间旋转的角为ψ角,这两个旋转角度叫做二面角。
结构域是介于二级结构和三级结构之间的一种结构层次,是指是指在较大的球状蛋白质中,蛋白质亚基形成明显分开的紧密的球状结构区域。
超二级结构是指蛋白质分子中的多肽链在三维折叠中形成有规则的三级结构聚集体。
三级结构是是整个多肽链的三维构象,它是在二级结的基础上,多肽链进一步折叠卷曲形成复杂的球状分子结构。
具有三级结构的蛋白质一般都是球蛋白,这类蛋白质的多肽链在三维空间中沿多个方向进行盘绕折叠,形成十分紧密的近似球形的结构,分子内部的空间只能容纳少数水分子,几乎所有的极性R基都分布在分子外表面,形成亲水的分子外壳,而非极性的基团则被埋在分子内部,不与水接触。
蛋白质分子中侧链R基团的相互作用对稳定球状蛋白质的三级结构起着重要作用。
四级结构指指数条具有独立的三级结构的多肽链通非共价键相互连接而成的聚合体结构。
在具有四级结构的蛋白质中,每一条具有三级结构的皑链/多肽链称为蛋白质亚基或亚单位,缺少一个亚基或亚基单独存在都不具有活性。
四级结构涉及亚基在整个分子中的空间排布以及亚基之间的相互关系。
维持蛋白质空间结构的作用力主要是氢键、离子键、疏水作用力和范德华力等非共价键,又称次级键。
此外,在某些蛋白质中还有二硫键,二硫键在维持蛋白质构象方面也起着重要作用。
蛋白质的空间结构取决于它的一级结构,多肽离岸主链上的氨基酸排列顺序包含了形成复杂的三维结构(即正确的空间结构)所需要的全部信息。
(四)蛋白质结构与功能的关系
不同的蛋白质,由于结构不同而具有不同的生物学功能。
蛋白质的生物学功能是蛋白质分子的天然构象所具有的性质,功能与结构密切相关。
1.一级结构与功能的关系
蛋白质的一级结构与蛋白质功能有相适应性和统一性,可从以下几个方面说明:
(1)一级结构的变异与分子病
(2)一级结构与生物进化
(3)蛋白质的激活作用
2.蛋白质空间结构与功能的关系
蛋白质的空间结构与功能之间有密切相关性,其特定的空间结构是行使生物功能的基础。
以下两方面均可说明这种相关性。
(1).核糖核酸酶的变性与复性及其功能的丧失与恢复
(2)血红蛋白的变构现象
别构效应由于一个亚基构象的改变而引起其余亚基以及整个分子构象、性质和功能的变化的现象。
波尔效应质子和二氧化碳促进氧合血红蛋白释放氧的现象。
协同效应指一个亚基与其配体结合后,能够影响此寡聚体中的另一个亚基与其配体的结合能力的现象。
血红蛋白是一个四聚体蛋白质,具有以上效应,曲线为S形,具有氧合功能,可在血液中运输氧。
肌红蛋白不是别构蛋白质,氧合曲线为双曲线。
存氧。
(五)蛋白质的重要性质
蛋白质是两性电解质,它的酸碱性质取决于肽链上的可解离的R基团。
不同蛋白质所含有的氨基酸的种类、数目不同,所以具有不同的等电点。
当蛋白质所处环境的pH大于pI时,蛋白质分子带负电荷,pH小于pI时,蛋白质带正电荷,pH等于pI时,蛋白质所带净电荷为零,此时溶解度最小。
蛋白质分子表面带有许多亲水基团,使蛋白质成为亲水的胶体溶液。
蛋白质颗粒周围的水化膜(水化层)以及非等电状态时蛋白质颗粒所带的同性电荷的互相排斥是使蛋白质胶体系统稳定的主要因素。
在外界因素影响下,蛋白质分子失去水化膜或被中和所带电荷,导致溶解度降低从而使蛋白质变得不稳定而沉淀的现象称为蛋白质的沉淀作用。
高浓度中性盐可使蛋白质分子脱水并中和其所带电荷,从而降低蛋白质的溶解度并沉淀析出,即盐析。
但这种作用并不引起蛋白质的变性。
这个性质可用于蛋白质的分离。
蛋白质受到某些物理或化学因素作用时,引起生物活性的丧失,溶解度的降低,易被酶消化以及其它性质的改变,这种现象称为蛋白质的变性作用。
变性作用的实质是由于维持蛋白质高级结构的次级键遭到破坏而造成天然构象的解体,但未涉及共价键的断裂。
有些变性是可逆的,有些变性是不可逆的。
当变性条件不剧烈时,变性是可逆的,除去变性因素后,变性蛋白又可从新回复到原有的天然构象,恢复或部分恢复其原有的生物活性,这种现象称为蛋白质的复性。
变性不一定沉淀,沉淀不一定变性,变性不一定凝固,凝固一定变性。
(六)测定蛋白质分子量的方法
1.凝胶过滤法
凝胶过滤法分离蛋白质的原理是根据蛋白质分子量的大小。
由于不同排阻范围的葡聚糖凝胶有一特定的蛋白质分子量范围,在此范围内,分子量的对数和洗脱体积之间成线性关系。
因此,用几种已知分子量的蛋白质为标准,进行凝胶层析,以每种蛋白质的洗脱体积对它们的分子量的对数作图,绘制出标准洗脱曲线。
未知蛋白质在同样的条件下进行凝胶层析,根据其所用的洗脱体积,从标准洗脱曲线上可求出此未知蛋白质对应的分子量。
2.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法
蛋白质在普通聚丙烯酰胺凝胶中的电泳速度取决于蛋白质分子的大小、分子形状和所带电荷的多少。
SDS(十二烷基磺酸钠)是一种去污剂,可使蛋白质变性并解离成亚基。
当蛋白质样品中加入SDS后,SDS与蛋白质分子结合,使蛋白质分子带上大量的强负电荷,并且使蛋白质分子的形状都变成短棒状,从而消除了蛋白质分子之间原有的带电荷量和分子形状的差异。
这样电泳的速度只取决于蛋白质分子量的大小,蛋白质分子在电泳中的相对迁移率和分子质量的对数成直线关系。
以标准蛋白质分子质量的对数和其相对迁移率作图,得到标准曲线,根据所测样品的相对迁移率,从标准曲线上便可查出其分子质量。
3.沉降法(超速离心法)
沉降系数(S)是指单位离心场强度溶质的沉降速度。
S也常用于近似地描述生物大分子的大小。
蛋白质溶液经高速离心分离时,由于比重关系,蛋白质分子趋于下沉,沉降速度与蛋白质颗粒大小成正比,应用光学方法观察离心过程中蛋白质颗粒的沉降行为,可判断出蛋白质的沉降速度。
根据沉降速度可求出沉降系数,将S带入公式,即可计算出蛋白质的分子质量。
凝胶电泳(gelelectrophoresis)以凝胶为介质,在电场作用下分离蛋白质或核酸等分的分离纯化技术。
(二)填空题
1.蛋白质多肽链中的肽键是通过一个氨基酸的氨基和另一氨基酸的羧基连接而形成的。
2.大多数蛋白质中氮的含量较恒定,平均为16%,如测得1克样品含氮量为10mg,则蛋白质含量为62.5%。
3.在20种氨基酸中,酸性氨基酸有谷氨酸;
天冬氨酸种,具有羟基的氨基酸是丝氨酸和苏氨酸,能形成二硫键的氨基酸是半胱氨酸。
4.蛋白质中的苯丙氨酸;
酪氨酸;
色氨酸3种氨基酸具有紫外吸收特性,因而使蛋白质280nm处有最大吸收值。
三者的吸收能力依次减小。
5.精氨酸的pI值为10.76,将其溶于pH7的缓冲液中,并置于电场中,则精氨酸应向电场的负方向移动。
6.组成蛋白质的20种氨基酸中,含有咪唑环的氨基酸是组氨酸,含硫的氨基酸有半胱氨酸;
蛋氨酸。
7.蛋白质的二级结构最基本的有两种类型,它们是α-螺旋结构;
β-折叠结构。
8.α-螺旋结构是由同一肽链的C=O和N-H间的氢键维持的,螺距为0.54nm,每圈螺旋含3.6个氨基酸残基,每个氨基酸残基沿轴上升高度为0.15nm。
天然蛋白质分子中的α-螺旋大多属于右手螺旋。
9.在蛋白质的α-螺旋结构中,在环状氨基酸脯氨酸;
羟脯氨酸存在处局部螺旋结构中断。
10.球状蛋白质中有极性侧链的氨基酸残基常位于分子表面而与水结合,而有疏水性侧链的氨基酸位于分子的内部。
11.氨基酸与茚三酮发生氧化脱羧脱氨反应生成蓝紫色色化合物,而脯氨酸与茚三酮反应生成黄色化合物。
12.维持蛋白质的一级结构的化学键有肽键;
二硫键;
维持二级结构靠氢键键;
维持三级结构和四级结构靠次级键键,其中包括氢键;
离子键;
疏水键;
范德华力。
13.稳定蛋白质胶体的因素是表面的水化膜;
同性电荷。
14.GSH的中文名称是谷胱甘肽,它的活性基团是巯基,它的生化功能是抗氧化功能以及作为某些酶的辅酶因子。
15.加入高浓度的中性盐,当达到一定的盐饱和度时,可使蛋白质的溶解度减小并沉淀析出这种现象称为盐析,蛋白质的这种性质常用于蛋白质分离。
16.用电泳方法分离蛋白质的原理,是在一定的pH条件下,不同蛋白质的带电荷量;
分大小;
分子形状不同,因而在电场中移动的方向;
速率不同,从而使蛋白质得到分离。
17.氨基酸处于等电状态时,主要是以两性离子形式存在,此时它的溶解度最小。
18.鉴定蛋白质多肽链氨基末端常用的方法有FDNB法(2,4-二硝基氟苯法);
Edman解法(苯异硫氢酸酯法)。
19.测定蛋白质分子量的方法有沉降法;
凝胶过滤法;
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE法)。
20.今有甲、乙、丙三种蛋白质,它们的等电点分别为8.0、4.5和10.0,当在pH8.0缓冲液中,它们在电场中电泳的情况为:
甲不动,乙向正极移动,丙向负极移动。
21.当氨基酸溶液的pH=pI时,氨基酸以两性离子离子形式存在,当pH>
pI时,氨基酸以负离子形式存在。
23.天然蛋白质中的α—螺旋结构,其主链上所有的羰基氧与亚氨基氢都参与了链内氢键的形成,因此构象相当稳定。
24.将分子量分别为a(90000)、b(45000)、c(110000)的三种蛋白质混合溶液进
行凝胶过滤层析,它们被洗脱下来的先后顺序是C;
a;
b。
26.一个α-螺旋片段含有180个氨基酸残基,该片段中有50圈螺旋?
该α-螺旋片段的轴长为27nm.
(三)选择题
1.在生理pH条件下,下列哪种氨基酸带正电荷?
A.丙氨酸B.酪氨酸C.赖氨酸
D.蛋氨酸E.异亮氨酸
5种氨基酸中只有赖氨酸为碱性氨基酸,其等电点为9.74,大于生理pH值,所以带正电荷。
2.下列氨基酸中哪一种是非必需氨基酸?
A.亮氨酸B.酪氨酸C.赖氨酸
D.蛋氨酸E.苏氨酸
3.蛋白质的组成成分中,在280nm处有最大吸收值的最主要成分是:
A.酪氨酸的酚环B.半胱氨酸的硫原子
C.肽键D.苯丙氨酸
A:
酪氨酸和苯丙氨酸在280nm处的克分子消光系数分别为540何120,所以酪氨酸比
苯丙氨酸有较大吸收
4.下列4种氨基酸中哪个有碱性侧链?
A.脯氨酸B.苯丙氨酸C.异亮氨酸D.赖氨酸
D:
在此4种氨基酸中,只有赖氨酸的R基团可接受氢质子,作为碱,而其它3种氨
基酸均无可解离的R侧链。
5.下列哪种氨基酸属于亚氨基酸?
A.丝氨酸B.脯氨酸C.亮氨酸D.组氨酸
B:
氨基酸的α-碳上连接的是亚氨基而不是氨基,所以实际上属于一种亚氨基酸,
而其它氨基酸的α-碳上都连接有氨基,是氨基酸。
6.下列哪一项不是蛋白质α-螺旋结构的特点?
A.天然蛋白质多为右手螺旋
B.肽链平面充分伸展
C.每隔3.6个氨基酸螺旋上升一圈。
D.每个氨基酸残基上升高度为0.15nm.
天然蛋白质的α-螺旋结构的特点是,肽链围绕中心轴旋转形成螺旋结构,而不
是充分伸展的结构。
另外在每个螺旋中含有3.6个氨基酸残基,螺距为0.54nm,每个
氨基酸残基上升高度为0.15nm,所以B不是α-螺旋结构的特点。
7.下列哪一项不是蛋白质的性质之一?
A.处于等电状态时溶解度最小B.加入少量中性盐溶解度增加
C.变性蛋白质的溶解度增加D.有紫外吸收特性
C:
蛋白质处于等电点时,净电荷为零,失去蛋白质分子表面的同性电荷互相排斥的
稳定因素,此时溶解度最小。
8.下列氨基酸中哪一种不具有旋光性?
A.LeuB.AlaC.GlyD.SerE.Val
甘氨酸的α-碳原子连接的4个原子和基团中有2个是氢原子,所以不是不对称碳
原子,没有立体异构体,所以不具有旋光性。
9.在下列检测蛋白质的方法中,哪一种取决于完整的肽链?
A.凯氏定氮法B.双缩尿反应C.紫外吸收法D.茚三酮法B:
双缩脲反应是指含有两个或两个以上肽键的化合物(肽及蛋白质)与稀硫酸铜的
碱性溶液反应生成紫色(或青紫色)化合物的反应,产生颜色的深浅与蛋白质的含
量成正比,所以可用于蛋白质的定量测定。
茚三酮反应是氨基酸的游离的α-NH与
茚三酮之间的反应;
凯氏定氮法是测定蛋白质消化后产生的氨;
紫外吸收法是通过
测定蛋白质的紫外消光值定量测定蛋白质的方法,因为大多数蛋白质都含有酪氨酸,
有些还含有色氨酸或苯丙氨酸,这三种氨基酸具有紫外吸收特性,所以紫外吸收值
与蛋白质含量成正比。
11.下列有关蛋白质的叙述哪项是正确的?
A.蛋白质分子的净电荷为零时的pH值是它的等电点
B.大多数蛋白质在含有中性盐的溶液中会沉淀析出
C.由于蛋白质在等电点时溶解度最大,所以沉淀蛋白质时应远离等电点
D.以上各项均不正确A:
蛋白质的等电点是指蛋白质分子内的正电荷桌能总数与负电荷总数相等时的pH
值。
蛋白质盐析的条件是加入足量的中性盐,如果加入少量中性盐不但不会使蛋白
质沉淀析出反而会增加其溶解度,即盐溶。
在等电点时,蛋白质的净电荷为零,分
子间的净电斥力最小,所以溶解度最小,在溶液中易于沉淀,所以通常沉淀蛋白质
应调pH至等电点。
12.下列关于蛋白质结构的叙述,哪一项是错误的?
A.氨基酸的疏水侧链很少埋在分子的中心部位
B.电荷的氨基酸侧链常在分子的外侧,面向水相
C.蛋白质的一级结构在决定高级结构方面是重要因素之一
D.蛋白质的空间结构主要靠次级键维持
在蛋白质的空间结构中,通常是疏水性氨基酸的侧链存在于分子的内部,因为
疏水性基团避开水相而聚集在一起,而亲水侧链分布在分子的表面以充分地与水作
用;
蛋白质的一级结构是多肽链中氨基酸的排列顺序,此顺序即决定了肽链形成二
级结构的类型以及更高层次的结构;
维持蛋白质空间结构的作用力主要是次级键。
13.列哪些因素妨碍蛋白质形成α-螺旋结构?
A.脯氨酸的存在B.氨基酸残基的大的支链
C.性氨基酸的相邻存在D.性氨基酸的相邻存在
E.以上各项都是
E:
脯氨酸是亚氨基酸,参与形成肽键后不能再与C=O氧形成氢键,因此不能形成α
-螺旋结构;
氨基酸残基的支链大时,空间位阻大,妨碍螺旋结构的形成;
连续出现多
个酸性氨基酸或碱性氨基酸时,同性电荷会互相排斥,所以不能形成稳定的螺旋结
构。
15.持蛋白质二级结构稳定的主要作用力是:
C
A.盐键B.疏水键C.氢键D.二硫键
16.维持蛋白质三级结构稳定的因素是:
E
A.肽键B.二硫键C.离子键D.氢键E.次级键
17.凝胶过滤法分离蛋白质时,从层析柱上先被洗脱下来的是:
A
A.分子量大的B.分子量小的
C.电荷多的D.带电荷少的
18.下列哪项与蛋白质的变性无关?
A.肽键断裂B.氢键被破坏
C.离子键被破坏D.疏水键被破坏
19.蛋白质空间构象的特征主要取决于下列哪一项?
A.多肽链中氨基酸的排列顺序B.次级键
C.链内及链间的二硫键D.温度及pH
蛋白质的一级结构即蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序决定蛋白质的空间构象
20.下列哪个性质是氨基酸和蛋白质所共有的?
B
A.胶体性质B.两性性质
C.沉淀反应D.变性性质
E.双缩脲反应
胶体性质是蛋白质所具有的性质,沉淀反应是蛋白质的
胶体性质被破坏产生的现象;
变性是蛋白质的空间结构被破坏后性质发生改变并丧
失生物活性的现象,这三种现象均与氨基酸无关。
21.氨基酸在等电点时具有的特点是:
A.不带正电荷B.不带负电荷
C.A和BD.溶解度最大
E.在电场中不泳动
氨基酸分子上的正电荷数和负电荷数相等时的pH值是其等电点,即净电荷为
零,此时在电场中不泳动。
由于净电荷为零,分子间的净电斥力最小,所以溶解度
最小。
22.蛋白质的一级结构是指:
A.蛋白质氨基酸的种类和数目B.蛋白质中氨基酸的排列顺序
C.蛋白质分子中多肽链的折叠和盘绕D.包括A,B和C
(四)是非判断题
()1.氨基酸与茚三酮反应都产生蓝紫色化合物。
错:
脯氨酸与茚三酮反应产生黄色化合物
()2.因为羧基碳和亚氨基氮之间的部分双键性质,所以肽键不能自由旋转。
对:
在肽平面中,羧基碳和亚氨基氮之间的键长为0.132nm,介于C—N单键和C
=N双键之间,具有部分双键的性质,不能自由旋转。
()3.所有的蛋白质都有酶活性。
错
()5.多数氨基酸有D-和L-两种不同构型,而构型的改变涉及共价键的破裂。
对
()6.所有氨基酸都具有旋光性。
()7.构成蛋白质的20种氨基酸都是必需氨基酸。
必需氨基酸是指人(或哺乳动物)自身不能合成机体又必需的氨基酸,包括8种氨基酸。
其它氨基酸人体自身可以合成,称为非必需氨基酸。
()8.蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序在很大程度上决定了它的构象。
()10.蛋白质的变性是蛋白质立体结构的破坏,因此涉及肽键的断裂。
()11.蛋白质是生物大分子,但并不都具有四级结构。
有些蛋白质是由一条多肽链成的,只具有三级结构,不具有四级结构,如肌红蛋白。
()12.血红蛋白和肌红蛋白都是氧的载体,前者是一个典型的变构蛋白,在与氧结合
过程中呈现变构效应,而后者却不是。
()13..用FDNB法和Edman降解法测定蛋白质多肽链N-端氨基酸的原理是相同的。
()14.并非所有构成蛋白质的20种氨基酸的α-碳原子上都有一个自由羧基和一个自
由氨基。
大多数氨基酸的α-碳原子上都有一个自由氨基和一个自由羧基,但脯氨酸和
羟脯氨酸的α-碳原子上连接的氨基氮与侧链的末端碳共价结合形成环式结构,所以
不是自由氨基。
()15.蛋白质是两性电解质,它的酸碱性质主要取决于肽链上可解离的R基团。
()16.在具有四级结构的蛋白质分子中,每个具有三级结构的多肽链是一个亚基。
()19.盐析法可使蛋白质沉淀,但不引起变性,所以盐析法常用于蛋白质的分离制备。
盐析引起的蛋白质沉淀是由于大量的中性盐破坏了蛋白质胶体的稳定因素(蛋
白质分子表面的水化膜及所带同性电荷互相排斥),从而使蛋白质溶解度降低并沉
淀,但并未破坏蛋白质的空间结构,所以不引起变性。
根据不同蛋白质盐析所需的
盐饱和度分段盐析可将蛋白质进行分离和纯化。
()20.蛋白质的空间结构就是它的三级结构。
()21.维持蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键。
()22.具有四级结构的蛋白质,它的每个亚基单独存在时仍能保存蛋白质原有的生物
活性。
具有四级结构的蛋白质,只有所有的亚基以特定的适当方式组装在一起时才具
有生物活性,缺少一个亚基或单独一个亚基存在时都不具有生物活性。
()23.变性蛋白质的溶解度降低,是由于中和了蛋白质分子表面的电荷及破坏了外层
的水膜所引起的。
蛋白质变性是由于维持蛋白质构象稳定的作用力(次级键和二硫键)被破坏从而使蛋白质空间结构被破坏并山个丧失生物活性的现象。
()24.蛋白质二级结构的稳定性是靠链内氢键维持的,肽链上每个肽键都参与氢键的
形成。
错,但并非肽链中所有的肽键都参与氢键的形成,如脯氨酸与相邻氨基酸形成的肽键,以及自由回转中的有些肽键不能形成链内氢键。
(五)问答题
1.什么是蛋白质的一级结构?
为什么说蛋白质的一级结构决定其空间结构?
答:
蛋白质一级结构指蛋白质多肽链中氨基酸残基的排列顺序。
因为蛋白质分子肽