分子生物学 考博真题文档格式.docx

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5、反式作用原件

6、小卫星DNA

7、基因表达

8、逆转录

9、管家基因

10、信号肽

11、基因打靶

12、基因治疗

论述题

1、DNA的复制过程的基本特点和要点。

2、G-蛋白信号介导的信号转导途径。

3、DNA损伤可以分为哪几类？

其相应分类分别是？

4、蛋白质组的概念及其研究意义。

2009年中国海洋大学分子生物学考博试题

第一题，5翻译题，每题8分，共40分。

包括siRNA，Sanger（1953年，其确定了牛胰岛素的一级结构）等

第二题问答题

1、某学生在大肠杆菌的培养基中1）加葡萄糖2）加乳糖3）加葡萄糖和乳糖，详述操纵子调控。

2、请说明分子标记的方法

3、一个功能基因，如果已经知道其序列，如何知道它的功能？

4、一个蛋白酶，要选择什么样的载体，才能高量表达和易纯化？

山东大学2009博分生

一、名词解释：

1、顺式作用元件

2、模序与结构域

3、岗崎片段

4、SouthernBlotting

5、遗传密码的简并性和摇摆性

二、简答：

1、基因治疗中常用病毒载体类型及特点？

2、IP3-PKB介导的受体信号转导途径？

3、蛋白质（酶）活性的快速调节方法有哪些？

举三例说明磷酸/脱磷酸化是酶活性快速调节的重要方式。

4、细胞死亡受体蛋白的分类，组成成员的作用？

5、细胞周期Cdk的调控作用。

6、原核生物DNA复制后随链合成中参与的酶和蛋白质及作用？

7、举出5种类型RNA并简述其作用。

三、论述：

1、原核生物和真核生物表达调控的层次有哪些调控机制。

2、原核生物和真核生物DNA复制的起始、延长和终止有哪些不同点？

复制过程参与的因子及功能？

华中同济2009博分生

一．名词解释

1.genome

2.genemapping

3.housekeepinggene

4.Restrictionendoclease

5.multiplecloningsite

6.Cis-actingelement

7.PCR

8.genetherapy

9.operon

10.原位杂交

二．问答题

1、简述反式作用因子的结构特点。

2、何谓基因克隆？

阐述一下基因克隆的基本过程。

3、PCR的原理及引物设计的原则。

4、简述逆转录病毒的结构特点。

5、人类基因定位的常用方法及其原理

浙大2006博分生题及答案

（25%）

1、RFLP:

限制性片段长度多态性，是由DNA变异（产生新的酶切位点或消除原有的酶切位点）导致在限制性核酸内切酶酶切时产生不同的长度片段。

可借助SouthernBlotting或PCR的方法进行检测。

2、SSR：

简章序列重复多态性，引物是根据微卫星DNA重复序列两翼的特定短序列设计，用来扩增重复序列本身。

由于重复的长度变化极大，所以是检测多态性的一种有效方法。

其特点包括：

一般检测到的是一个单一的多等位基因位点，共显性遗传，故可鉴别杂合子与纯合子；

得到的结果重复性很高。

3、EST：

表达序列标签，是指从不同的组织构建的cDNA文库中，随机挑选不同的克隆，进行克隆的部分测序所产生的cDNA序列。

随着高通量测序技术的进步，使人们越来越相信，大规模地产生EST，结合生物信息学的手段，将为人们提供一种快速有效的发现新基因的方法。

4、STS：

序列标签位点，是由特定引物序列所界定的一类标记的统称，短的在基因组上是可以被唯一操作的序列，因而可以确定在物理图谱上的特定位置。

5、CAP:

CAP即分解代谢物基因活化蛋白是一种激活蛋白，因为细菌的许多启动子为弱启动子，本身与RNA聚合酶的作用较弱，在有CAP蛋白这类活蛋白存在下，可使RNA聚合酶与启动子的亲和力增强，CAP蛋白的活性强烈依赖cAMP。

6、AFLP：

扩增片段长度多态性，其特点是把RFLP和PCR结合了起来。

其基本步骤是：

把DNA进行限制性内切酶酶切，然后选择特定的片段进行PCR扩增（在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的“接头”，用与接头互补的但3?

端有几个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增，只有那些与3?

端严格配对的片段才能得到扩增），再在有高分辨力的测序胶上分开这些扩增产物，用放射性法、荧光法或银染染色法均可检测之。

7、SNP：

单核苷酸多态性，是一种较为新型的分子标记，其依据的是一位点的不同等位基因之间常常只有一个或几个核苷酸的差异，因此在分子水平上对单个核苷酸的差异进行检测是很有意义的。

8、FISH：

荧光原位杂交技术，是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。

它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依据。

9、Genome：

基因组，有机体或细胞中的所有DNA，包括核中的染色体和线粒体中的DNA。

10、RNAinsituhybridization：

RNA原位杂交，是利用cDNA为探针来检测与其互补的mRNA链在细菌或其他真核细胞中的位置，是检测基因组织特性表达的常用方法。

11、单克隆抗体：

每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。

动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，含遗传基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。

当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。

被激活的B细胞分裂增殖形成该细胞的子孙，即克隆由许多个被激活B细胞的分裂增殖形成多克隆，并合成多种抗体。

如果能选出一个制造一种专一抗体的细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。

单克隆细胞将合成一种决定簇的抗体，称为单克隆抗体。

12、基因芯片：

所谓基因芯片，是指将大量探针分子固定于支持物，上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量。

由于用该技术可以将极其大量的探针同时固定于支持物上，所以一次可以对大量的DNA分子或RNA分子进行检测分析，从而解决了传统核酸印迹杂交，技术复杂、自动化程度低、检测目的分子数量少、效率低，等不足，而且，通过设计不同的探针阵列，，用一定的分析方法，还可以用于序列分析，称作杂交测序。

二、描述cDNA文库构建原理与方法（25%）：

（1）cDNA获得方法，

（2）克隆方法，（3）文库质量定义。

答：

cDNA：

以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA（complementaryDNA，cDNA），再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受菌体，扩增为cDNA文库（cDNAlibrary），然后再采用适当方法从cDNA文库种筛选出目的cDNA。

与基因组DNA文库类似，由总mRNA制作的cDNA文库包括了细胞全部mRNA信息，自然也含有我们感兴趣的编码cDNA。

当前发现的大多数蛋白质的编码基因几乎都是这样分离的。

（1）cDNA获得方法：

①TotalRNA的提取；

②mRNA的分离；

③cDNA双链合成：

SupersciptII—RT合成第一链，cDNA第二链的合成，双链cDNA末端补平，EcoRIadaptor加接，双链cDNA末端的磷酸化及XhoI酶切，胶回收cDNA。

（2）克隆方法：

①载体制备：

pBlueScriptII的提取，pBlueScriptII的双酶切消化，载体去磷酸化，载体效率检测；

②cDNA双链和载体的连接：

连接，检测（PCR方法）；

③电转化：

电转化感受态细胞的制备，连接产物纯化，电转化；

④快速鉴定、菌落PCR⑤pBlueScriptcDNA文库扩增。

（3）文库质量定义：

评价一个文库是否有实用价值主要在于文库的含量和插入片段的大小两个方面。

所构建的文库中必须有足够多的克隆数,这样才能确保基因组cDNA中的每一个序列至少有一个拷贝存在于重组文库中,为达到这一要求,文库的容量应不小于1.7×

105,同时为保证cDNA片段的完整性,插入片段的平均大小应不小于1kb。

三、阐述基因突变的概念及引起突变的可能途径（25%）：

（1）化学诱变，

（2）物理诱变，（3）T-DNA插入，（4）缺失、插入，（5）无意突变概念，（6）碱基修复概念1l>

9|+T`

基因突变属分子水平上的变异,是指染色体上个别基因所发生的分子结构的变化，基因突变在自然界普遍存在。

基因突变的方式很多，主要有：

（1）化学诱变，基因突变可以由某些化学物质所引起，这些化学物质称为化学诱变剂。

现已知很多的化学诱变剂，它们诱变的机制是不同的。

在DNA复制过程由于碱基类似物的取代，碱基的化学修饰以及碱基的插入和缺失都会引起突变。

（2）物理诱变，利用物理因素引起基因突变的称物理诱变，如X射线、紫外线、电离辐射等物理因素可造成

（3）T-DNA插入，改变读码或变成假基因。

（4）移码突变：

基因中插入或者缺失一个或几个碱基对，会使DNA的阅读框架（读码框）发生改变，导致插入或缺失部位之后的所有密码子都跟着发生变化，结果产生一种异常的多肽链。

移码突变诱发的原因是一些像吖啶类染料分子能插入DNA分子，使DNA复制时发生差错，导致移码突变。

（5）无意突变，由于一对或几对碱基对的改变而使决定某一氨基酸的密码子变成一个终止密码子的基因突变。

（6）碱基修复：

DNA损伤的修复系统主要有以下几个：

①损伤碱基的直接修复；

②切除修复，包括碱基切除修复、核苷酸切除修复和DNA交链的切除修复；

③错配修复；

④重组修复，又称复制后修复；

⑤跨损伤DNA合成，这是一种利用损伤核苷酸为模板，通过DNA聚合酶I使碱基掺入到复制终止处进行DNA合成，从而延长DNA链的修复。

基因突变的特点为：

第一，基因突变在生物界中是普遍存在的。

第二，基因突变是随机发生的。

第三，在自然状态下，对一种生物来说，基因突变的频率是很低的。

第四，大多数基因突变对生物体是有害的，由于任何一种生物都是长期进化过程的产物，它们与环境条件已经取得了高度的协调。

第五，基因突变是不定向的。

四、阐述一条反向遗传克隆功能基因的途径（25%）

反向遗传学是相对于经典遗传学而言的。

经典遗传学是从生物的性状、表型到遗传物质来研究生命的发生与发展规律。

反向遗传学则是在获得生物体基因组全部序列的基础上，通过对靶基因进行必要的加工和修饰，如定点突变、基因插入\缺失、基因置换等，再按组成顺序构建含生物体必需元件的修饰基因组，让其装配出具有生命活性的个体，研究生物体基因组的结构与功能，以及这些修饰可能对生物体的表型、性状有何种影响等方面的内容。

比较典型的反向遗传克隆功能基因的途径如RNAi。

RNAi的机制可能是细胞内双链RNA在Dicer酶的作用下，可形成-22bp大小的小干扰RNA（smallinterferingRNAs，siRNAs），siRNAs可进一步掺入多组分核酸酶并使其激活，从而精确降解与siRNAs序列相同的mRNA，完全抑制了该基因在细胞内的翻译和表达（下略）

南开大学2005年分子生物学考博试题

一、选择题

1、Ⅱ型核酸内切酶的产物是？

①5’粘末端②3’粘末端③平末端④以上都有

2、基因工程诞生的时间？

3、限制性内切酶产生5’PO4,3’OH

4、cDNA合成需要反转录酶

5、T4-DNA连接酶连接的最适温度是？

6、将TcR基因用pBR322运载，受体细胞将产生的基因型？

7、Cosmid怎么产生？

8、将phageDNA转入宿主的方法

9、DNA探针标记的方法

10、用杂交来筛选重组子的优点

11、蛋白质分泌的介导序列

12、Mini-Cell中含有：

DNA、RNA、蛋白质中的哪几种

13、酵母的4种载体

14、λphage基因表达的重要特征

15、纯化或抽提DNA时，DNA存在于哪一相中

16、DNA在琼脂糖凝胶电泳中用什么染色

17、从乙醇中得到DNA，最重要的条件是什么

18、用pUC19将克隆插入lacZ,选择克隆子时，要求宿主的基因型是什么

19、琼脂糖凝胶电泳中DNA被降解的特征

20、λphage的Cossite能被下列哪个基因的产物切割：

geneA,E,J,W

21、EMBL4载体是插入型还是取代型

22、酵母的哪个载体在非选择培养基上最稳定：

YIp,YEp,YCp,YRp

23、E.coli有哪三个天然质粒载体

24、哺乳动物基因组转移的方法

25、基于conjugativetransfer,质粒分为哪两类

26、植物原生质体转化的方法

27、plasmid中含有复制起始位点的是plasmid还是phage

28、质粒转化B.subtilis的要求

二、问答题（共70分）

1、Tat蛋白激活HIV表达的全过程

2、从分子水平上解释多抗、单抗的产生？

怎样理解产生抗体的多样性

3、（互补实验）根据两个图说明E.coli操纵子的二倍体表型，并解释原因

4、利用λphage　A、B两个点突变株，证明E.coli中甲基介导的错配修复系统有存在

5、用实验证明原核生物和真核生物基因结构的差别

6、病毒感染引发的宿主细胞应答的有关基因或蛋白

7、基因A序列已知（其上游序列亦已知），在它上游（-370bp）存在-GGTCAT-的调控元件，证明该调控元件中每个碱基在调控中贡献可能不同

中科院医药与健康所2008博分生

1、表观遗传，及调控方式，还有蛋白质通过哪些共价修饰调控其功能？

2、蛋白质与DNA结合的方法和比较，EMSA和DNase1足迹法？

3、密码子改造研究新蛋白药物，原理，关键和方法

4、设计研究未知基因（预测两个跨膜区域）功能的实验方案（不低于4个）

5、质粒改造原则

6、诱导全能干细胞的方法，实验方案等

中科院2005博生化和分生

三、简答题：

1、简诉SH2与SH3结构域的功能。

2、某一酶催化单一底物反应。

S1,S2都是该酶的底物，已知他们的Kcat（或Vmax）和Km值,在S1,S2同时存在并且浓度相同的情况下，请给出该酶催化S1和S2反应速度之间的表达式。

3、依次写出三羧酸循环中的酶。

4、解释下列非编码RNA（non-codingRNA）名词：

（1）核仁小RNA（smallnucleolarRNA,snoRNA）;

（2）干扰小RNA（smallinterferingRNA,siRNA）;

（3）微RNA（microRNA,miRNA）。

5、生物体存在大量的mRNA前体的选择性剪切（alternativesplicing）过程。

什么是选择性剪接，有几种方式？

四、问答题：

1、阐诉磷脂酶A2催化的反应与信号转导的关系。

2、在纯化某一蛋白质的过程中，有一个分子量比目标蛋白质小的蛋白质与目标蛋白一同被纯化，请举例两种办法来证明或排除这个分子量小的蛋白质是目标蛋白质的部分降解产物。

3、试诉非离子型去垢剂增容膜蛋白的机制。

4、阐诉逆转录转座子与逆转录病毒的异同点。

5、阐诉酵母转录激活因子GAL4的调控方式及其在酵母双杂合系统（yeasttwohybridsystem）中的应用

湘雅2006博分生

一、问答题

1、简述逆转录病毒的生活周期及其在基因治疗中的应用

2、什么是DNA指纹图谱，阐述DNA指纹图谱的产生机制及其在医学生物学中的应用

3、什么是质粒？

简述质粒的结构特点及其用途

4、什么是RNAi？

简述RNAi技术的原理及其在恶性肿瘤治疗中的应用前景

5、什么是基因定位诱变技术？

举例说明基因定位诱变技术的应用

6、简述真核生物基因表达的调控机制

二、名词解释

1、无义突变

2、基因家族

3、顺式作用元件

4、人类基因组计划

5、多顺反子

6、蛋白质工程

7、Klenow片断

8、转座子

9、proteomics

10、反义RNA

11、real-timePCR

12、同工异源酶

13、基因表达酶

14、splitgene

15、功能基因组学

16、锌指结构

17、基因打靶

18、DNA聚合酶

19、EST20启动子

中国疾控中心2005博分生

一、名词解释

1.EST

2.YAC

3.SenseDNA

4.RNAi

5.Race

二、问答题

1、乳酸操纵子的结构。

IGPT如何诱导结构基因表达

2、正向突变、抑制突变及回复突变的定义及与突变的关系

3、PUC18克隆载体的结构特征

4、在做PCR过程中，常遇到的问题及解决方法

5、已知蛋白A、B之间相互作用，C、D分别与A、B相似，如何签定C、D之间的相互作用，用两种方法说明之

6、试用分子生物学相关知识建立动物模型的方法，如何建立病原生物学的动物模型。

2008协和博分子生物学

第一部分：

填空

疯牛病的致病原因

什么是原病毒

SD序列

信号肽识别序列的组成-----部分和-----部分

乳糖操纵子的调控序列——————————————————————

第二部分：

大题，2道

1.给了一段序列要求涉及合适的引物，扩增出改序列，（考点为引物设计原则）

2.给了一个质粒序列，和一段待插入的基因组DNA片段，然后酶切后电泳，酶切后电泳，三个泳道有三种不同的条带，分析其产生情况（考点为克隆部分）

第三部分：

1.紫外线过度照射后容易引发皮肤癌，正常机体通过何种机制修复

2.介绍酵母双杂交的原理和应用

3.举例说明小RNA在发育中的作用和意义

3.什么是转录后加工？

目前认为这一提法欠妥，为什么？

4.人类基因组当中存在许多非编码序列，如转座子和内含子，

（1）请问这些非编码序列是没有价值的垃圾吗？

为什么？

（2）近年来，小分子RNA的研究与表观遗传学进展迅速，是否表明中心法则已经过时，已经被新的理论取代？

协和2005博分生

一、名词

1.Kozaksequence

2.SDsequence

3.attenuator

4.亲和层析

二、问答

1、是关于Z-DNA和回文序列的结构特点和功能的；

2、转录过程中进行起始定位的因子是什么？

该因子在转录全过程是否都存在？

现已经体外科隆并

纯化该蛋白，它能否单独与DNA结合？

4、什么是“epigeneticmutation”？

如何导致的？

三、试验设计题：

1、已知某基因与某蛋白能够相互作用，设计实验证明并找出作用位点。

2、已知某蛋白存在翻译后磷酸化修饰，设计实验证明并找出磷酸化位点。

华中科大2008分生试题

1.蛋白质的结构原则

2.进化中为什么选择蛋白和RNA作为酶

3.关于盐浓度对蛋白与DNA结合能力的影响4.基因功能的研究方法，简述3类及原理

5.真核与原核细胞的启动子的结构和功能及翻译起始的差异与共同点

6.关于基因CDNA克隆和蛋白表达的方法的实验设计题！

有一植物中共有的基因与某重要功能有关。

请设计试验并叙述相关试验技术和方法，在烟叶中克隆该基因的CDNA全长，并获得用于获取抗体的蛋白

7.基因靶向技术的原理和意义

协和2003博生物化学与分子生物学试题

一、名词解释（每题2分，共10分）

1、糖原脱支酶

2、酮体

3、氧化磷酸化

4、RNAINTERFERENCE

5、ATTENATOR

二、说明下列酶的作用特点与性质（每题2.5分，共10分）

1、DNA连接酶

2、DNA内切酶

3、光复合酶

4、大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ

三、简答题（每题10分，共50分）

1、PH=8.0时,核酸与蛋白质电泳泳动有何不同特点？

2、1953年4月25，发生了什么让生物学界震动的事情？

请说明其意义？

3、下面两句话对么？

请分别说明理由：

1）Trp操纵子只有衰减作用一种负调节方式。

2）Cro蛋白与λ阻遏蛋白结合与不同位点调节溶菌性循环与溶源循环。

4、2002年SCIENCE评出年度十大，说ｍicroRNA是重要发现，说明ｍicroRNA的意义。

5、为什么DNA合成必须有引物而RNA合成不需引物可以直接将两个核苷酸连接？

四、问答题（每题15分，共30分）

1、近年来人们对真核基因调控理论有了深入的认识，现在大家普遍接受“unifiedtheory”的理论，请你谈谈你对该理论的理解及你的观点。

2、用微球菌核酸酶酶解染色质，然后进行电泳，发现200bp、400bp、600bp、800bp…的条带，试问从该现象可以得出什么结论？

图1所示的条带不是非常狭窄，试解释其原因？

协和2004博生化与分生

一、名词解释（每题2分，共30分）

1、复合脂质

2、糖原脱支酶

3、酮体

4、氧化磷酸化

5、结构域

6、同工酶

7、染色体核骨架

8、染色质重塑

9、核基质

10、转导

11、密码子的偏嗜性

12、基因簇

13、逆转座子

14、表观遗传学改变（Epigeniticchange）

15、双向电泳

二、填空题（每题1分，共5分）

1、协和生化的老主任是。

2、谁用什么实验证明了核酸是遗传物质。

3、可以磷酸化的氨基酸是、、。

4、带苯环的氨基酸是、、。

5、DNA在nm有最大的光吸收，原因是：

?

三、简答题（每题8分，共40分）

1、为什么