农药虫螨腈含量的测定HPLC法检验检疫标准管理信息系统Word格式文档下载.docx
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随着溶剂中甲醇比例的增加，试样溶液浑浊度降低，离心后澄清，容易通过滤膜；
当溶剂为纯甲醇时，试样溶液离心后完全澄清，容易通过滤膜。
处理后的试样溶液在色谱柱为C18柱、柱温为35℃、流速为1.0mL/min、检测波长为260nm、进样体积为5µ
L、流动相为甲醇+水=85+15（体积比）的条件下测定虫螨腈含量，结果见表1。
表1：
（甲醇+水）体积比变化对试样溶解效果的影响
试样名称
称样量
g
甲醇+水
体积比
定容体积
mL
保留时间
min
峰面积mAu*s
10%虫螨腈悬浮剂
0.2552
0+100
25
/
0.2491
60+40
7.298
1236
0.2560
70+30
7.299
2162
0.2508
80+20
7.302
4751
0.2574
90+10
7321
0.2568
100+0
7.272
8430
表1的数据表明，以纯水溶解时，没有虫螨腈色谱峰出现；
随着混合溶剂中甲醇比例的增高，虫螨腈的响应值不断增大；
当溶剂为纯甲醇时，虫螨腈的响应值最大。
说明甲醇的溶解效果最好，本方法选择甲醇为溶剂。
2.仪器条件选择
1）色谱柱的选择：
文献[1]中对C18柱和C8柱的分离效果进行了比较，发现虫螨腈在C18柱上与杂质的分离效果更好。
由于C18通用性更强，本方法选择C18柱作为分离柱，发现其分离虫螨腈的效果满意。
2）检测波长的确定：
本方法参考了文献[1,2]，以0.5µ
g/mL虫螨腈标准溶液在色谱柱为C18柱、柱温为35℃、流速为1.0mL/min、进样体积为5µ
L、流动相为甲醇+水=90+10（体积比）的条件下，分别在205nm和260nm的波长下测定，得到的色谱峰见图1和图2。
205nm下0.5µ
g/mL虫螨腈标准溶液的色谱图
图2：
260nm下0.5µ
从图1和图2可以看出，0.5µ
g/mL虫螨腈标准溶液在205nm下响应值高，但基线不稳定，干扰杂质多；
在260nm下，该溶液基线平稳，无杂质干扰。
本方法选择260nm为检测波长。
3）流动相比例的确定：
改变流动相中甲醇和水的体积比，对20µ
g/mL虫螨腈标准溶液进行测定，结果见表2，色谱峰见图3~图6。
表2：
流动相（甲醇+水）体积比变化的影响
甲醇+水（体积比）
保留时间min
峰高
5.247
45.8
85+15
7.143
31.2
11.030
21.2
75+25
18.567
12.9
图3：
流动相为甲醇+水=90+10（体积比）下的20µ
图4：
流动相为甲醇+水=85+15（体积比）下的20µ
图5：
流动相为甲醇+水=80+20（体积比）下的20µ
图6：
流动相为甲醇+水=75+25（体积比）下的20µ
从测定结果看，随着混合流动相中甲醇比例的减少，虫螨腈的灵敏度降低；
随着水的比例的增加，虫螨腈的保留时间增大。
选择分离条件的原则是色谱峰的保留时间短、峰尖锐、峰形对称性好。
因此本方法选择流动相为甲醇+水=90+10（体积比）。
3.最佳试验条件：
通过上述试验，确定的条件如下：
a）试样溶液的配制：
称取约含0.05g（精确至0.0002g）虫螨腈的试样于100mL容量瓶中，加入80mL甲醇。
将容量瓶放入超声波水浴中超声5min，用甲醇定容至刻度，摇匀。
于4000r/min离心4min，用1mL移液管准确吸取上层清液1mL，转移至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。
经0.45µ
m滤膜过滤，供高效液相色谱测定。
b）溶剂：
纯甲醇。
c）色谱柱：
ODS-3（C18）反相色谱柱。
d）流动相：
甲醇+水=90+10（体积比）。
e）流速：
1.0mL/min。
f）色谱柱温度：
35℃。
g）检测波长：
260nm。
h）进样体积：
5µ
L。
4.方法验证：
1）线性试验：
按照上述所建方法，分别配制浓度为0.5µ
g/mL、5µ
g/mL、20µ
g/mL、100µ
g/mL、
500µ
g/mL、1000µ
g/mL和2000µ
g/mL的虫螨腈标准溶液，在上述所建方法的仪器条件下测定，结果见表3。
标准曲线的线性方程为：
Y=15.195X+157.1（X为虫螨腈标准溶液浓度，Y为峰面积），相关系数r=0.9995，标准曲线见图8。
表3：
线性试验结果
虫螨腈标准溶液浓度
µ
g/mL
峰面积
mAu*s
0.5
7
5
71
20
285
100
1674
500
7987
1000
15996
2000
30170
图7：
虫螨腈标准曲线
2）精密度试验：
按照上述所建方法分别配制虫螨腈原药溶液、10%虫螨腈悬浮剂溶液和8%虫螨腈悬浮剂溶液各12份，经过离心、过滤后测定，结果见表4。
表4：
虫螨腈含量精密度测定结果
平行试样
测定次数
虫螨腈原药浓度
%
10%虫螨腈悬浮剂浓度
8%虫螨腈悬浮剂浓度
1
93.30
10.24
7.08
2
92.63
10.20
7.03
3
93.08
10.26
6.93
4
93.52
93.74
7.05
6
7.07
8
9
10
11
7.01
12
7.00
算术平均值
93.39
10.25
标准偏差SD
0.348
0.018
0.040
相对标准偏差
RSD%
0.37
0.18
0.57
由表4可以看出，虫螨腈原药测定结果的相对标准偏差为0.37％，10%虫螨腈悬浮剂测定结果的相对标准偏差为0.18％，8%虫螨腈悬浮剂测定结果的相对标准偏差为0.57％。
本方法的精密度试验结果符合《基本规定》的要求。
3）准确度试验：
取一定量虫螨腈原药溶于甲醇，经测定溶液中虫螨腈含量为4.69µ
g/mL，吸取1mL该溶液并添加0.5mL的5µ
g/mL的虫螨腈标准溶液（含虫螨腈2.5µ
g），混匀，过滤后测定。
按照同样方法向1mL上述试样溶液中添加1.0mL和1.5mL的5µ
g/mL的虫螨腈标准溶液（分别含虫螨腈5.0µ
g和7.5µ
g）。
每个添加水平分别测定12次，结果见表5。
表5：
虫螨腈原药的回收率和精密度测定结果
添加水平
2.5μg
5.0μg
7.5μg
测得值
μg
回收率
％
7.09
96.0
9.68
99.8
12.15
99.5
7.02
96.4
12.01
97.6
97.2
9.65
99.2
12.03
97.9
96.8
9.66
99.4
12.28
101.2
7.06
98.4
9.67
99.6
12.23
100.5
12.35
102.1
9.64
99.0
12.12
99.1
12.30
101.5
100.4
9.69
100.0
12.11
98.9
7.04
101.6
9.70
100.2
12.33
101.9
平均值
7.14
98.2
99.63
12.18
99.9
标准偏差
SD
0.044
0.017
0.114
0.62
0.94
取一定量10%的虫螨腈悬浮剂溶于甲醇，经测定溶液中虫螨腈含量为5.40µ
每个添加水平分别测定12次，结果见表6。
表6：
10%虫螨腈悬浮剂的回收率和精密度测定结果
8.01
104.4
10.41
12.78
8.03
105.2
10.36
12.72
7.99
103.6
10.33
98.6
12.80
98.7
7.98
103.2
10.35
12.83
8.05
106.0
10.38
12.85
99.3
8.07
106.8
10.30
98.0
12.82
7.97
102.8
10.37
12.79
98.5
7.95
102.0
12.73
97.7
7.93
10.39
12.88
99.7
7.96
102.4
10.42
12.87
103.4
12.81
98.8
0.046
0.034
0.051
RSD（%）
0.58
0.33
0.40
取一定量8%虫螨腈悬浮剂溶于甲醇，经测定溶液中虫螨腈含量为5.42µ
每个添加水平分别测定12次，结果数据见表7。
表7：
8%虫螨腈悬浮剂的回收率和精密度测定结果
10.45
100.6
12.98
100.8
12.90
10.51
101.8
12.95
10.49
101.4
12.93
100.1
7.89
12.84
13.05
10.43
13.08
102.2
7.85
10.40
13.04
101.7
7.88
12.92
10.52
12.99
101.0
7.82
10.47
13.13
102.9
12.97
100.7
0.066
0.064
0.084
0.84
0.61
0.64
由表5～表7可以看出，虫螨腈原药的平均回收率的相对标准偏差为0.18％～0.94％；
10%虫螨腈悬浮剂的平均回收率的相对标准偏差为0.33％～0.58％；
8%虫螨腈悬浮剂的平均回收率的相对标准偏差为0.61％～0.84％。
本方法的回收率试验结果符合《基本规定》的要求。
4）实验室间验证试验：
5）结论
综上所述，该方法快速简便，步骤少，试剂消耗低，适用于市场上常见的虫螨腈原药、10%的虫螨腈的悬浮剂和8%的虫螨腈悬浮剂的含量测定。
经过条件试验、精密度试验、线性试验、回收率试验和试验时间验证试验，各项技术指标均满足含量检测的需要和《基本规定》的要求。
五、参考文献
[1].高巍,武中平.溴虫腈高效液相色谱分析方法的研究[J].现代农药,2007,6（5）:
24-25.
[2].刘育清.虫螨腈的高效液相色谱分析方法[J].农药科学与管理,2002,23（4）:
14-15.
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