生物化学实验考试重点.docx

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1.何为离心技术？

它有什么用处？

　离心技术是利用物体高速旋转时产生强大的离心力，使置于旋转体中的悬浮颗粒发生沉降或漂浮，从而使某些颗粒达到浓缩或与其他颗粒分离之目的。

离心机转子高速旋转时，当悬浮颗粒密度大于周围介质密度时，颗粒离开轴心方向移动，发生沉降；如果颗粒密度低于周围介质的密度时，则颗粒朝向轴心方向移动而发生漂浮。

用处：

它是分离细胞器和生物大分子物质基本的必备手段之一，它是测定某些纯品物质的部分性质的一种方法。

2.简述离心机的分类

（1）工业用：

低速，高速，超速离心机

（2）试验用：

1制备：

a普通离心机：

台式普通，台式超速离心机。

B冷冻离心机：

大容量，高速，超速冷冻离心机。

2分析：

分析超速离心机。

3.简述层析法的基本原理及分类

原理：

所有的层析系统都由两个相组成：

一是固定相，另一是流动相。

当待分离的混合物随流动相通过固定相时，由于各组分的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含量比）不同，且随流动相向前移动，各组分不断地在两相中进行再分配。

分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组分，从而达到将各组分分离的目的。

分类;氧化铝柱，活性炭柱，纸上，液相，高效液相，硅胶薄层，聚酰胺薄层，离子交换，凝胶，亲和，金属螯合，疏水，共价层析

4.简述层析技术的一般过程，层析技术可运用在哪些方面？

过程：

1层析柱的制作，2加样，3洗脱，4检测与鉴定

运用：

1小分子有机物质的纸层析及薄层层析。

2用吸附柱层析分离，纯化胡萝卜素。

3用亲和层析法分离青豌豆凝集素。

4凝胶过滤测蛋白质相对分子量。

5用hplc分析维生素

5．分光光度发的基本原理。

运用

　分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。

运用：

1蛋白质含量的测定2氨基酸含量的测定3糖类含量的测定4核酸含量的测定5酶活力测定6其他有色物质的测定

6简述测定谷物样品中赖氨酸含量的意义？

答：

赖氨酸是碱性氨基酸（一羧基二氨基），它是人体不能合成的氨基酸，必须由食物提供，所以称为必需氨基酸。

食物中必需氨基酸含量不高，营养价值就不高；且赖氨酸在人类主食谷物蛋白质中的含量最少（约为0.2%—0.4%），因此它成为营养品质的一个重要指标。

故要测定谷物中赖氨酸含量。

7在实验过程中应注意那些事项？

答：

移液要准确；定容时防止样品粘底；过滤时要干滤；移液要准确；加热时间要足。

8测定赖氨酸含量为什么用亮氨酸做标准曲线？

答：

由于赖氨酸本身有2个NH2，但它在蛋白质中，只有一个ε-NH2可以测定，所以用C原子数与之相同而分子量比值为1.115的亮氨酸来做标准，进行比较。

9薄层层析基本原理是什么？

它与纸层析有何不同？

薄层层析则是根据吸附层析和分配层析两原理将物质分开的；而纸层析主要是根据分配层析的原理进行的。

10Rf值如何计算，意义是什么？

Rf值（比移值）=原点（样品）到层析中心距离除原点到溶剂前沿距离。

意义：

11氨基酸的薄层层析中，固定相和流动相分别是什么？

固定相是水和硅胶G，流动相是有机溶剂。

12试验为什么要加无水乙醇（从蛋白质的结构上考虑）、KOH及碳酸铜？

答：

加无水乙醇的原因:

一是做溶剂，使蛋白质溶解出来；二是破坏蛋白质的空间结构使其次级键断裂，让肽键暴露出来，利于反应进行。

加KOH的原因：

提供强碱条件。

加碳酸铜的原因：

提供反应所需的Cu2+。

13实验中为什么要检验淀粉酶溶液，淀粉溶液或糖溶液?

14温度对酶活性有影响，说明酶具有什么性质？

实验中如何观察？

为说明酶具有易变性。

由于酶是蛋白质，所以易受温度影响，在高温下，酶变性而失去活性；低温下，酶的活性被抑制；适宜温度，酶的活性最强。

实验中通过在冰水、40℃水浴和沸水浴中淀粉底物的消失情况进行观察，即冰水中，酶的活性被抑制，淀粉部分分解，遇碘（I2）显紫红色；沸水浴中，酶变性而失活，淀粉不分解，遇I2变兰色；40℃水浴，酶的活性最大，淀粉完全分解，遇碘不显色。

15PH对淀粉酶活性有影响，其最适PH是多少？

实验中如何判断？

淀粉酶的最适PH值是5。

实验中通过PH为3、5、7检验淀粉酶的最适pH为5，即pH值为3时，酶的活性丧失，淀粉不分解，遇碘（I2）显蓝色；pH值为5时，酶的活性最大，淀粉完全分解，遇碘不显色；PH值为7时，酶的活性被部分抑制，部分淀粉已分解，遇碘显紫红色。

16本实验如何检验淀粉酶的专一性.

17简述聚丙烯酰胺凝胶电泳分离同工酶的原理？

聚丙烯酰胺凝胶电泳分离同工酶的原理——溶质在电泳的作用下，利用凝胶电泳的浓缩效应，将被分离物质缩成一狭窄区带，在具有三维网状结构的聚丙烯酰胺凝胶中移动，通过凝胶电泳的电荷效应和分子筛效应，而将不同同工酶分离。

18电泳中加溴酚蓝、制胶中加过硫酸铵、加样后加蔗糖的作用是什么？

19、简述聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作过程步骤及注意事项？

20植物组织中的可溶性糖包括哪些？

溶于冷水的有哪些？

植物组织中的可溶性糖包括所有的单糖、寡糖和部分溶于热水的多糖（淀粉和果胶）；溶于冷水的有所有的单糖和寡糖。

21总结分光光度法测定可溶性糖的一般操作程序及注意事项。

22RNA和DNA的组成成分有何异同，能否用鉴定用RNA成分的方法鉴定DNA的成分?

答：

不能。

因为RNA和DNA中的核糖不同，但磷酸和嘌呤可以用此法。

23提取RNA时加乙醇的作用什么？

（起沉淀作用）{加乙醚的作用是除去水分}

24离心操作应注意那些问题？

（看教材P13的第5点和P185的第六）

（1）盛量液为离心管的2/3；

（2）离心前需平衡（在离心管和外套之间加水）；

（3）对称放入离心机两边；

（4）离心时逐渐加速；

（5）有特殊响声时立即关机。

25前5min放氧量与后5min放氧量有差异，说明什么问题？

用所学理论进行解释。

说明：

前5min放氧量大于后5min放氧量。

这是因为，在酶含量不变的情况下，放氧量与底物浓度呈正相关；前5分钟的底物浓度大于后5分钟的底物浓度，反应所释放的氧量大于后5分钟。

26影响过氧化氢酶活性测定的因素有那些？

提取酶液时速度要快，提取出来不及时用需冷藏；仪器安装及准备是要细心，注意漏气；测定时要快速，认真等。

27简述紫外分光光度法测定硝酸盐含量的原理？

28紫外分光光度法和可见分光光度法在测定物质含量时有何不同？

最大的不同点：

一是紫外分光光度法要脱色，而可见分光光度法要显色；

二是紫外分光光度法要用石英比色皿比色，而可见分光光度法用玻璃比色皿比色。

（因为紫外光不能透过玻璃）

29如提取液有色，能否测定出硝酸盐含量？

不能。

30．结合试验，总结分光光度法测定物质含量的一般操作过程和注意事项

过程：

1配制标准溶液，制作标准曲线2样品准备和提取3测定4计算

注意事项：

（1）使用过程中比色皿的四个面在槽中保持一定的位置,取用比色皿时手应该捏住四个棱而不能碰到面。

比色皿应该避免磨损透光面。

（2）使用过程中不得打开盖子，保持仪器清洁,为避免溶液洒落对仪器造成的腐蚀，所有溶液的配置、倾倒都不要在仪器附近操作。

比色皿放进样品池之前必须把外表面擦干。

（3）当（仅当）操作者错误操作或其他干扰引起微机错误时，应该立即关断主机电源，重新启动，但无须关断灯源电源。

（4）光学器件和仪器运行环境需保护清洁。

清洁仪器外表时,请勿使用乙醇乙醚等

有机溶剂,请勿在工作中清洁,不使用时请加防尘罩。

31．什么叫电永？

简述电泳的基本原理。

电泳：

带电粒子在直流电场中向着所带电性相反的电极移动的现象。

电泳的原理：

电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。

许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。

电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。

32．什么叫迁移率？

电场强度，ph，温度对迁移率有何影响？

迁移率：

迁移率（或泳动度）是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度

影响：

电场：

在一定大小的电场中，带电颗粒的涌动受所用电压的控制，电压越高，带电颗粒涌动越快，同一带电粒子在不同电场中涌动速度不同。

Ph：

ph值决定带电粒子的解离程度。

温度：

电泳过程中由于通电引起温度升高，致使介质粘度下降，颗粒运动加剧，引起自由扩散，迁移率增加。

33．凝胶电泳技术可运用在哪些方面?

1利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离同工酶，2sds-page测定蛋白质相对分子量3利用聚丙烯酰胺凝胶测蛋白质等电点4高压peag分离dna片段