生物化学实验内容.docx
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生物化学实验内容
《生物化学实验》内容
课程类型:
制药工程专业必修
实验总学时:
32课时
开设实验项目数:
8个
适用对象:
2017制药工程1、2班
实验教师:
段志芳
一、实验目标及基本要求
生物化学实验是一门独立的实验课程,培养学生生物化学实验基本操作技能、实验数据处理能力、分析问题解决问题的能力和实事求是的科学态度。
二、实验内容
序 号
实 验 项 目
学 时
实 验 要 求
实 验 类 别
1
植物组织中可溶性总糖的提取
4
必 修
验证性实验
2
蒽酮比色定糖法
4
必 修
验证性实验
3
卵磷脂的提取和鉴定
4
必 修
验证性实验
4
皂化价的测定
4
必 修
验证性实验
5
牛乳中酪蛋白的制备
4
必 修
验证性实验
6
蛋白质浓度测定(考马斯亮蓝结合法)
4
必 修
验证性实验
7
酵母RNA的提取
4
必 修
验证性实验
8
RNA的定量测定(苔黑酚法)
4
必 修
验证性实验
三、成绩
包括实验时的表现(实验出勤、安全卫生、操作对错、损坏器皿情况等,占50%)及实验报告的完成情况和完成质量(占50%),每个实验按总分为100分为满分进行打分,共8个实验,总评取平均值。
四、要求
(1) 实验过程中同组人可以配合进行;
(2) 实验报告独立完成,同组人数据相同,不得抄袭他组数据;
(3) 实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做;
(4) 对实验结果进行简单的分析.
实验一植物组织中可溶性总糖的提取
一、实验目的
1.掌握可溶性总糖的概念和性质。
2.掌握可溶性总糖提取的基本原理。
3.掌握溶解、过滤、洗涤、定容等基本操作技术。
二、实验原理
可溶性糖是指易溶于水的糖,包括绝大部分的单糖、寡糖,常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖等。
它们在植物体内可以充当能量的储存、转移的介质、结构物质和功能分子如糖蛋白的配基。
总糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖、麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。
可溶性总糖提取方法包括:
热水提取法、酶提取法、超声波提取法等。
其溶于热水,不溶于60%以上乙醇,所以用热水提取、乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质。
本实验利用可溶性糖溶于水的特性,将植物磨碎,用热水将组织中的可溶性糖提取出来,结合实验二得到总糖浓度,已知溶液体积和原料重量,可以求出总糖含量。
三、实验用品
1.仪器设备:
电子天平(精确到0.0g,配称量纸若干);可控温电加热板或电炉或电热套或水浴锅均可。
可共用。
2.玻璃器皿:
研钵1套;100mL锥形瓶1个;25mL量筒1个;玻璃棒1根;100mL烧杯2个;胶头滴管1支;过滤装置1套(铁架台1台+铁圈1个+玻璃漏斗1个+100mL容量瓶1个+洗瓶1个);不锈钢刮勺1个;剪刀1把。
此部分为每组所用,集中到小框里,放置各实验台上。
3.药品试剂:
新鲜植物叶片;蒸馏水。
4.其他:
9cm滤纸若干(与玻璃漏斗配套);纸巾若干;标签纸若干。
每个洗手池常规配置烧杯刷、毛巾、洗手液。
四、实验操作
取新鲜植物叶片,洗净表面污物,用滤纸吸去表面水分。
称取0.5g,剪碎,加入5~10ml蒸馏水,在研钵中磨成均浆,转入锥形瓶中,用蒸馏水少量多次冲洗研钵,洗出液也转入锥形瓶中,塑料薄膜封口,于沸水中提取30min,提取液冷却后过滤到100ml容量瓶中,同法残渣再提取2~3次,将提取液合并至容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度。
贴好标签,保存至冰箱中,用于实验二。
五、实验结果与讨论
1、观察产品颜色是否与理论相符,若不符合,分析原因。
2、结合实验二结果计算含量
六、实验注意事项
(1)若有干扰,可滴加饱和中性醋酸铅以除去溶液中的蛋白质,乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质,若色素较多可脱脂。
(2)加热时应小心,避免灼伤皮肤。
七、思考题
1、可溶性糖在植物物质代谢中的作用。
2、用水提取的糖类有哪些?
实验二蒽酮比色法测定可溶性总糖含量
一、实验目的
1、掌握蒽酮比色法测定可溶性总糖的原理和方法
2、掌握标准曲线的绘制
3、掌握分光光度计的使用方法
二、实验原理
糖在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比,故可用于糖的定量测定。
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物,不但可以测定戊糖与己糖含量,而且可以测所有寡糖类和多糖类,其中包括淀粉、纤维素等(因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应),所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量,实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620nm,故在此波长下进行比色。
三、实验材料、试剂与仪器设备
1、仪器
分光光度计(配玻璃比色皿、擦镜纸、注明废液回收的具塞广口瓶、洗瓶);电子天平(配称量纸);离心机(配离心管),恒温水浴锅。
2、玻璃器皿
0.5mL、1mL、5mL刻度吸管各2支(配合适大小吸耳球);10mL具塞具刻度试管10支(应干净干燥,放到试管架上);100mL烧杯2个;10mL量筒1个;玻璃棒1根;长胶头滴管1根。
此部分为每组所用,放置各实验台上。
3、试剂:
(1)~(3)由实验员配制,贴好标签
(1)80%乙醇
(2)葡萄糖标准溶液(100μg/mL):
准确称取100mg分析纯无水葡萄糖,溶于蒸馏水并定容至1000mL。
(3)蒽酮试剂:
称取1.0g蒽酮,溶于80%浓硫酸(将98%浓硫酸稀释,把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中)1000mL中,冷却至室温,贮于具塞棕色瓶内,冰箱保存,可使用2~3周。
(4)样品贮备液:
学生实验一所得可溶性总糖提取物水溶液。
四、实验步骤
1、标准曲线制作
取6支试管,从0~5分别编号,按下表加入各试剂:
表蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量
管号
0
1
2
3
4
5
100μg/mL葡萄糖溶液(mL)
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
蒸馏水(mL)
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0
蒽酮试剂(mL)
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
葡萄糖量(μg)
0
20
40
60
80
100
将各管快速摇动混匀后在沸水浴中煮10min,取出冷却,在620nm波长下用空白调零测定光密度,以光密度为纵坐标,含葡萄糖量(μg)为横坐标绘制标准曲线。
2、样品测定
将样品贮备液用蒸馏水稀释到合适范围,取该溶液1.0mL加蒽酮试剂5mL,同以上操作显色测定光密度。
重复3次。
按照下式计算可溶性总糖的含量:
w=nm1/m2100%
式中:
w---表示总糖含量
n---稀释倍数
m1-----从标准曲线查得糖量,μg.
m2------样品重(g).
v1------提取物总体积(ml)
v2------测定时样品体积(ml)
五、结果与讨论:
1.绘制出标准曲线
2.含量的计算
六、实验注意事项
(1)加浓H2SO4时应缓慢加入,以免产生大量热量而爆沸,灼伤皮肤,如出现上述情况,应迅速用自来水冲洗。
(2)水浴加热时应打开试管塞。
七、思考题
1、植物组织中糖的测定方法还有哪些?
举例说明其原理和优缺点?
2、制作标准曲线时应注意哪些问题?
实验三卵磷脂的提取与鉴定
一、实验目的
1、掌握磷脂类物质的结构和性质。
2、掌握卵磷脂的提取鉴定的原理和方法。
3、掌握乙醇做溶剂提取的操作技术。
二、实验原理
磷脂是生物体组织细胞的重要成分,主要存在于大豆等植物组织以及动物的肝、脑、脾、心等组织中,尤其在蛋黄中含量较多(10%左右)。
卵磷脂和脑磷脂均溶于乙醚而不溶于丙酮,利用此性质可将其与中性脂肪分离开;此外,卵磷脂能溶于乙醇而脑磷脂不溶,利用此性质又可将卵磷脂和脑磷脂分离。
新提取的卵磷脂为白色,当与空气接触后,其所含不饱和脂肪酸会被氧化而使卵磷脂呈黄褐色。
卵磷脂被碱水解后可分解为脂肪酸盐、甘油、胆碱和磷酸盐。
甘油与硫酸氢钾共热,可生成具有特殊臭味的丙烯醛;磷酸盐在酸性条件下与钼酸铵作用,生成黄色的磷钼酸沉淀;胆碱在碱的进一步作用下生成无色且具有氨和鱼腥气味的三甲胺。
这样通过对分解产物的检验可以对卵磷脂进行鉴定。
三、仪器和试剂
1、仪器设备
电子天平(精确到0.00g,配9cm称量纸);减压蒸馏装置(旋转蒸发仪+水循环真空泵+相应橡胶管,用前由实验员检查是否正常;配500mL24#磨口蒸馏和接收圆底烧瓶,2500mL磨口具塞广口瓶上标注回收乙醇,与仪器同台放置,提取时重复使用)。
此部分共用。
2、玻璃器皿
回流装置一套(500mL恒温磁力搅拌电热套(配2cm磁子)1台+250mL24#磨口圆底烧瓶1个+24#磨口球形冷凝管1根+橡胶管2根+铁架台1个+铁夹2个);过滤装置一套(铁架台1个+铁圈1个+玻璃漏斗1个+250mL24#具塞磨口锥形瓶1个+18cm定性滤纸若干);100mL量筒各一个;100mL烧杯一个;玻璃棒1根;长胶头滴管1个;长药勺1个;试管2支;蒸发皿1个。
此部分为每组所用,放置各实验台上。
3、药品试剂(3)由实验员配制,贴好标签。
(1)鸡蛋黄
(2)95%乙醇
(3)10%氢氧化钠溶液
4、其它:
红色石蕊试纸若干;剪刀2把;一次性手套若干;纸巾若干;标签纸若干。
每个洗手池常规配置烧杯刷、毛巾、洗手液。
四、操作步骤
1、卵磷脂的提取
取250mL24#磨口圆底烧瓶,放入2cm的磁力搅拌子,加入蛋黄20g和95%乙醇60mL,搅拌加热,稍冷后过滤到250mL具塞磨口锥形瓶中,盖好塞子,滤渣同法提取2~3次,合并提取液,如滤液仍然混浊,可重新过滤直至完全透明。
提取液减压蒸馏至少量,回收乙醇(放入回收瓶中),将剩余物用长胶头滴管转移置于蒸发皿内,水浴锅中蒸干,所得干物即为卵磷脂。
称重并计算得率。
2、卵磷脂的鉴定
取干燥试管一支,加入少量提取的卵磷脂以及2~5mL氢氧化钠溶液,放入水浴中加热15min,在管口放一片红色石蕊试纸,观察颜色有无变化,并嗅其气味。
五、结果与分析
1、观察产品的颜色外观
2、计算产率
3、鉴定结果
六、思考题:
1、卵磷脂的生物学功能有哪些?
2、卵磷脂提取过程中,加入95%乙醇的作用是什么?
实验四脂肪皂化价的测定
一、目的
1、掌握油脂的主要理化性质
2、掌握油脂皂化价的测定原理和方法。
3、掌握滴定分析法的操作
二、原理
脂肪的碱水解称皂化作用。
皂化1g脂肪所需的KOH的毫克数称为皂化价。
脂肪的皂化价与相对分子质量成反比,由皂化价的数值可知混合脂肪的平均相对分子质量。
三、仪器、试剂和材料
1、仪器设备:
电子天平(精确到0.000g,配5ml称量瓶)。
2、玻璃器皿:
回流装置一套(500mL恒温磁力搅拌电热套(配2cm磁子)1台+250mL24#磨口圆底烧瓶1个+24#磨口球形冷凝管1根+橡胶管2根+铁架台1个+铁夹2个);酸碱滴定管1支;50ml量筒1个;磨口具塞锥形瓶2只;100ml烧杯1只;玻棒1根。
此部分为每组所用,放置各实验台上。
3、药品试剂:
(2)~(5)由实验员配制,贴好标签。
(1)豆油
(2)0.100mol/L氢氧化钠乙醇溶液:
以0.100mol/L标准盐酸溶液标定。
(3)0.100mol/L标准盐酸溶液:
取浓盐酸8.5ml,加蒸馏水稀释至1000