光皮木瓜总三萜化合物提取和含量测定图文精Word格式.docx
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表明,在无水乙醇体系中浸提温度为80℃,浸提时间为3h,料液比为1∶16时提取效果最好,总三萜化合物提
取率为2.83%。
关键词:
光皮木瓜;
总三萜化合物;
浸提;
分光光度法中图分类号:
Q94-331 文献标识码:
A
Extractimatifrom
（ThouinKoehne
Yan-ping,YINZhong-ping,SHANGGUANXin-chen,YANGWu-ying,JIANGYan,SHENYong-gen
（CollegeofFoodScienceandEngineering,LaboratoryofPlantResourceExploitationandUtilization,
JAU,Nanchang330045,China
Abstract:
TheextractiontechnologyfortotaltriterpenesfromChaenomelessinensis（ThouinKoehnewithethanolasextractingliquid,andthetotaltriterpeneswasdeterminedthroughultravioletspectrophotometry.Theeffectfactorsoftemperature,treatmenttimeandmass/volumeratioofsolventwerestudiedthroughorthog2
4
onaltestsL9（3onthebasisofsinglefactortest.Theresultsshowedthattheextractionrateoftotaltriterpe2neswas2.83%intheoptimalextractingconditionsasfollows:
16timesofamountofanhydrousalcohol,80℃ofextractiontemperatureand3hoursofextractiontime.
Keywords:
Chaenomelessinensis（ThouinKoehne;
totaltriterpenes;
extraction;
spectrophotometry光皮木瓜[Chaenomelessinensis（ThouinKoehne]又名海棠、梗楂、木李、山木瓜,为蔷薇科木瓜属植物 楂的干燥成熟果实,由于其干燥后果皮光滑不皱缩,故有光皮木瓜之称。
其味酸、涩,性平,药理活性试验表明其提取物具有舒筋活络、健脾开胃、舒肝止痛、祛风湿、消痰止渴的功效,主治吐泻、转筋、风
[1～3]
湿痹痛、咳嗽痰多、泄泻、痢疾等症,由于形状、功用与作为药用正品的皱皮木瓜相近,因而在临床上
[4]
常作为木瓜替代品使用。
近年来对光皮木瓜成分的研究发现,其含有大量具有广泛生物活性的五环三萜化合物,如齐墩果酸、熊果酸、乙酰熊果酸、羟基熊果酸、马斯里酸、白桦脂酸、羟基白桦脂酸等多种
[5～11]
三萜酸和古柯二醇、白桦脂醇、香豆酰基白桦脂醇、羽扇三醇等多种三萜醇等共计达20余种。
光皮木瓜为城市绿化和观赏苗木木瓜树的副产品,产量十分丰富,由于其木质化如用于加工一般性产品,附加值低且浪费较大,大量的木瓜急待进行深加工,本文通过乙醇浸提法提取其总三萜化合物,以分光光度法测定其含量,旨在为光皮木瓜的进一步开发和综合利用提供理论依据。
收稿日期:
2007-01-03
基金项目:
江西省科技厅农业攻关项目（200305001
作者简介:
洪艳平（1974-,男,硕士,讲师,研究方向:
天然活性化合物提取与分离;
3通讯作者:
上官新晨,教授,E
-mail:
shangguanxc_818@sina.com。
・226・江西农业大学学报 第29
卷
1 材料与方法
1.1 试验材料
光皮木瓜:
由新余市雨林园艺有限公司木瓜种植基地提供。
取新鲜木瓜洗净切成0.5cm×
0.5cm,
在65℃条件下鼓风干燥5h,冷却后使用粉碎机粉碎,过80目筛后用石油醚按料液比1∶10脱色2次,挥干溶剂放于密封容器中备用。
φ=95%乙醇、试验药品:
无水乙醇、冰乙酸、高氯酸、香草醛、浓硫酸等均为分析纯试剂;
熊果酸标
准对照品（中国药品生物制品检定所。
1.2 仪器
RE-52AA旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂;
DHG-9070A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实
验设备有限公司;
QT-1旋涡混合器（上海琪特分析仪器系统有限公司;
AR2140电子天平（奥豪斯国际贸易有限公司;
HH-4数显恒温水浴锅（国华电器有限公司;
UV-754紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司。
1.3 试验方法
1.3.1 木瓜总三萜含量测定方法 （1。
精确
称取烘至恒重的熊果酸对照品4.00.08mg/mL。
取,UV-754200～700nm,显示熊果酸在550nm处有最大的吸光度。
然后分别精密吸取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL按相同方法处理,在550nm处测定其吸光度,以吸光度（A与熊果酸质量求得回归方程并绘制出熊果酸对照品的标准曲线。
通过线性回归计算,得出回归方程为:
y=0.1015x+0.0065,线性相关系数r=0.9992,熊
图1 熊果酸对照品的标准曲线
Fig.1 Thestandardcurveoftheursolicacidstandardsample
果酸质量在0.016～0.096mg范围内与吸光度呈现良好的线性关系（图1。
（2木瓜总三萜提取物样品溶液的配制和含量测定。
准确移取按1.3.2中（1方法所得提取液1.0mL于25mL容量瓶中,定容,即为样品待测液,然后准确移取0.5mL待测液按（1方法测定其吸光度,通过回归方程求出吸光度对应的三萜质量并计算提取率。
（3样品溶液含量测定的稳定性实验。
取木瓜提取液1份,按（2所述方法制备,在550nm处间隔10min测定吸光度。
（4样品溶液含量测定的精密度实验。
取同一木瓜提取液5份,按（2所述方法平行制备,在550nm处测定吸光度并计算其测定结果的相对标准偏差。
（5熊果酸对照品加样回收率实验。
准确吸取同体积已知浓度的样品溶液,并分别加入已知质量
的熊果酸,在550nm处测定吸光度,通过回归方程计算出三萜总质量,再分别计算其加样回收率及测定结果的相对标准偏差。
1.3.2 浸提方法的单因素和正交设计试验 （1浸提方法。
于圆底烧瓶中加入木瓜粉3g和无水乙醇,在一定温度下加热搅拌一段时间后得总三萜提取溶液,然后按1.3.1中（2进行含量测定并计算提取率。
（2浸提条件的单因素和正交设计试验。
分别选择不同浓度的乙醇溶液、不同浸提时间、不同浸提温度、不同料液比进行提取条件的单因素试验,然后在此基础上进行正交设计试验,得出木瓜总三萜浸提的最优条件。
第2期洪艳平等:
光皮木瓜总三萜化合物提取和含量测定・227・
1.3.3 优化条件下的浸提级数实验 在正交设计得出的最优条件下分别采用级数为1,2,3做浸提实
验,以确定不同浸提级数对木瓜总三萜提取率的影响。
1.3.4 优化条件下浸提的重复性实验 在正交设计得出的最优条件下做重复性浸提实验,以确定浸提条件的可行性和重现性。
2 结果与分析
2.1 木瓜三萜提取物成分的鉴定试验
取1mL澄清样品提取液于10mL试管中,水浴蒸干,加入1mL乙酸酐使其溶解,然后沿试管壁缓缓加入几滴浓硫酸,在两液面交界处呈现三萜化合物所显示的典型的紫红色。
2.2 木瓜总三萜含量测定的稳定性、精密度、加样回收率实验结果
表1 木瓜总三萜含量测定稳定性、精密度、加样回收率结果
Tab.1 Thedeterminationresultsofstability,recoveryandprecisiontestsonthetotaltriterpenes
精密度
n
回收率实验
样品1
加量/mg实测量
/mg
5
实验
样品23
吸光度
（A
10.193068.0.025680.025680.199
2.2080.0160.0160.0160.0160.016100.197
30.2030.040710.041260.040950.041070.04077200.196
40.202
回收率
/%
93.9497.3795.4496.1994.31300.193
567X±
SDRSD/%
0.199
平均回收率/%
X±
95.4595.45±
1.06
1.46
405060
0.1920.1900.189
0.201±
0.004
2.74
表1数据显示,同一样品处理显色后每隔10min测定吸光度,稳定性结果表明,在1h内稳定性较好,吸光度变化很小;
实测5份样品的平均回收率为95.45%,表明熊果酸在测定过程中基本没有损失,可以保证定量的准确性;
回收率实验和精密度实验的相对标准偏差（RSD分别为2.74%和1.46%,表明以熊果酸测定木瓜提取液中总三萜含量具有良好的重现性。
2.3 浸提方法的单因素和正交设计试验结果2.3.1 不同乙醇浓度、浸提时间、浸提温度、料液比对浸提结果的影响 乙醇具有毒性小、溶解性强、价
格便宜、易回收等特点,是一种最为常用的浸提溶剂。
本文选用不同浓度的乙醇、不同时间、不同温度、不同料液比等条件下进行浸提实验,具体结果见图2～图5。
图2表明,随着乙醇浓度的降低,木瓜总三萜化合物提取率呈明显的下降趋势,这可能与木瓜所含绝大多数三萜化合物极性较大且水溶性差有关;
图3表明,随浸提时间的延长木瓜总三萜提取率逐渐增大,在3h时达最高,而后呈下降趋势,表明三萜化合物在长时间的浸提过程中受到热、光、氧等外界因素的影响可能导致其结构发生改变;
图4中木瓜总三萜提取率随浸提温度升高而增大,在无水乙醇达回流温度时最大,表明在较高温度下有利于所
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