植物组织培养实验指导Word文档下载推荐.docx
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一、考核方式：
实验操作。
二、考核时间：
三、考核地点：
四、监考教师：
实验考核以实验操作形式进行，根据实验4或实验5实验的实验结果（失败或成功）决定实验方案，如果失败，分析失败原因，提出改进措施，在重做中进行实验操作考核，如果成功则继续下一步的实验，实施实验操作考核。
二．考核办法：
考核方法主要观察学生的实验操作是否正确，污染率是否高，并要求学生写出实验报告，总结实验中常出现的问题。
在3个课时内小组协作完成实验内容。
包括以下几个方面：
1．对实验仪器设备的选择及操作。
湿热灭菌操作过程；
无菌操作过程。
2.培养基的配制
试剂的配制；
母液的移取；
实验配方计算。
3.培养条件的设置。
4.实验报告的规范性与科学性。
一、实验的目的和要求
掌握植物组织培养实验室的设计要点和必备的仪器设备。
二、实验内容：
1.植物组织培养实验室的设计要点。
2.植物组织培养实验室必备的仪器设备。
三、需用的仪器或试剂
四、实验步骤
五、教学方式：
参观。
六、考核要求：
每小组对植物组织培养实验室各功能室的仪器设备进行有效配置。
七、实验报告要求
1.认真观察，如实记录：
记录参观实验室所用的设备。
2.说明准确，层次清晰
3.格式规范，表述科学：
用简图表示植物组织培养实验室的设计。
1.了解植物外植体离体培养所需各种营养成分及激素种类
2.
初步掌握培养基母液配制方法
母液配制方法，以MS培养基为例。
1．无机大量元素母液的配制
按培养基配方的需要量，将各种化合物称量扩大10倍，用粗天平称取，并分别用200ml蒸馏水溶解于400ml烧杯中，如溶解速度慢，可稍加热。
在1000ml烧杯中，按表1-1顺序依次混合已熔化合物溶液并搅拌，以免产生沉淀，用量筒定容至1000ml，倒入试剂瓶中并贴好标签。
保存于冰箱冷藏室待用。
表1-1
MS无机大量元素母液配制
mg/L
化合物名称
培养基配方用量
扩大10倍称量
备注
KNO3
1900
19000
定容于1000ml蒸馏
NH4NO3
1650
16500
水中。
每升培养基取
MgSO4·
7H2O
370
3700
此液100ml
KH2PO4
170
1700
CaCl2·
2H2O
440
4400
2．无机微量元素母液配制
按培养基配方需要量，将各种化合物扩大10倍，用电子天平称取，并分别用50ml烧杯20ml蒸馏水溶解，在100ml烧杯中将上述溶液依次混合，用100ml量筒定容（药品已浓缩100倍），倒入试剂瓶中并贴好标签，保存于冰箱中。
表1-2
MS无机微量元素母液配制
mg/L
MnSO4·
4H2O
22.3
223
定容于100ml蒸馏
ZnSO4·
8.6
86
水中。
每升培养基
CuSO4·
5H2O
0.025
0.25
吸此液10ml。
H3BO3
6.2
62
Na2MoO4·
2.5
KI
0.83
8.3
CoCl2·
6H2O
0.25
3．铁盐母液配制
按培养基配方需要量，将两种药品扩大10倍，用电子天平称取，分别在50ml烧杯中溶解后，再在100ml烧杯中混合，定容于100ml量筒（浓缩100倍），倒入棕色试剂瓶（因铁盐不稳定，易分解）中，贴上标签，置于冰箱中保存。
表1-3
铁盐母液配制
mg/L
FeSO4·
27.8
278
定容至100ml
Na2–EDTA
37.3
373
每次取用10ml
4．有机母液母液配制
按培养基配方需要量，将各种化合物扩大10倍，用电子天平称取，分别用50ml烧杯20ml蒸馏水溶解，在100ml烧杯中依次混合，100ml量筒定容（浓缩100倍），倒入试剂瓶中，贴上标签，置于冰箱冷藏备
表1-4
有机物母液配制
甘氨酸
2.0
20
盐酸硫胺素（维生素B1）
0.4
4
每升培养基取
盐酸吡哆醇（维生素B6）
0.5
5
此液10ml
烟酸
5
肌醇
100
1000
5．激素母液配制
各类激素用量较小，为了方便和准确，也配制成母液。
母液浓度可依需要和习惯灵活确定。
但注意各激素均不能直接用蒸馏水溶解，而用各种不同溶剂先溶解后再用蒸馏水定容。
例如2.4-D母液配制：
称取40mg2.4-D,用少量95%酒精或1NNaoH溶解后，再用蒸馏水定容至200ml，此时，该激素母液浓度为1mg/5ml。
一般地，NAA、IAA、IBA等生长素是醇溶性的，均可用少量95%酒精先溶后再蒸馏水定容，而KT、6BA、ZT等细胞分裂素可先用少量1NHCl或1NNaoH溶解后再用蒸馏水定容。
冰箱保存。
上述各种母液冰箱保存均不宜时间过长，储藏中如发现母液中出现沉淀或霉团时，应弃之。
三、需用的仪器或试剂等
1．用具器材
电子天平（感量0.1g、0.001g）、粗天平（感量0.5g）、冰箱、烧杯（1000ml、400ml、100ml、50ml）、量筒（1000ml、100ml、50ml）、试剂瓶（1000ml、250ml、150ml）、药勺、玻璃棒等。
2．药品试剂
蒸馏水、1NHCl、1NNaOH、95%酒精、各种所需化学药品（分析纯）
确定培养基称量溶解贴标签母液分装定容保存于冰箱冷藏
教师讲解原理，示范，学生独立操作。
写出你所配制的各种母液配方。
1．认真操作，如实记录
2．说明准确，层次清晰
3．格式规范，表述科学
学习掌握培养基配制方法与灭菌操作。
1．培养基配制
2．培养基灭菌
1．用具器材
电子天平、高压灭菌锅、PH仪、塑料量杯、烧杯（500ml、100ml）、量筒（100ml、25ml、10ml）、移液管（5ml、1ml）、三角瓶（50ml）、玻璃棒、药勺、pH试纸（5.4-7.4）、橡皮吸球、橡皮筋、吸水纸、羊皮纸、防潮纸
蒸馏水、蔗糖、琼脂、1NNaOH、1NNCl、各种培养基母液。
（以MS1升培养基为例）
（1）称琼脂7g（琼脂浓度0.7-0.8﹪）溶于2/3或一半以上所需培养基体积即700ml左右的蒸馏水中，用电饭锅（或微波炉）煮融。
另称取蔗糖30g（糖浓度3%），待琼脂完全煮融断电后趁热加入，并搅拌使之溶解。
煮琼脂的同时，可用量筒或移液管依次量取各种母液混合于一烧杯中：
无机大量母液100ml，无机微量、有机物、铁盐母液各10ml，激素母液种类及取量依不同培养基配方临时确定。
（2）将上述两种液体混合，并用蒸馏水定容为1000ml。
用1NNaOH或1NNCl调pH值至5.8，调时应不断用玻璃棒搅动，并用PH仪或pH试纸测试。
（3）趁热将培养基分装于约30个三角瓶（50ml）中，每瓶约30ml。
分装时应避免把培养基倒在瓶口上，否则易引起杂菌污染。
（4）用羊皮纸、橡皮筋封口，并可在纸盖上用铅笔写明培养基代号。
把分装好的培养基、无菌水及无菌纸放入高压灭菌锅内，锅外层加水后，拧紧锅盖，关闭放气阀和安全阀，接通电源，开始加热，当温度上升指针移至0.5kg/cm时，开气阀排除冷气，使压力表指针复零位，按同样方法再排一次冷气，关好放气阀继续加热至1.1-1.2kg/cm时，保持该压力15-20分钟（温度为121-126℃）后切断电源，打开放气阀，慢慢放热气，锅内蒸汽完全放出，气压归零后打开锅盖，趁热将培养基取出，待冷却后使用。
请写出你所配置培养基的主要步骤和过程
1．规范操作，如实记录
实验四
植物器官愈伤组织的诱导、增殖、分化
第一步：
愈伤组织的诱导
1．了解无菌培养对实验材料消毒、接种的要求
2．初步掌握植物外植体材料灭菌方法及接种操作技术
3．了解外植体愈伤组织诱导过程
二、实验内容
1．接种前准备
2.培养材料灭菌
3．接种
4.培养与观察
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