药学本科毕业论文中国药科大学Word文件下载.docx

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指点教员王秋娟

课题

完成场所中国药科大学药学院生理教研室

论文任务时间：

2020年03月至2020年06月

TQ0701对大鼠脑缺血再灌注损伤的维护作用

学号0543428姓名刘振兵

摘要：

目的:

讨论新型的化合物TQ0701对大鼠脑缺血再灌注损伤维护作用的有效性，从而为该化合物的机制研讨以及临床运用开发提供相关实验数据和实验思绪。

方法:

将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组〔依达拉奉3mg/kg〕、TQ0701低剂量组（1.5mg/kg）、中剂量组（3mg/kg）、高剂量组（6mg/kg）各10只。

假手术组仅停止手术而不形成缺血形状，其他各组均采用Longa线栓法制备大鼠MCAO模型，在缺血2h后停止再灌注。

给药组和阳性对照组区分在缺血前30min以及再灌注0、2h尾静脉注射TQ0701和依达拉奉，假手术组和模型组那么给予等量的0.9%氯化钠溶液。

再灌注24h后观察大鼠神经功用评分、脑组织梗塞百分率和病理组织学的改动。

结果:

模型组大鼠的神经功用评分和脑组织梗塞百分率同假手术组、阳性对照组以及TQ0701三个剂量组相比有清楚差异，阳性对照组与TQ0701三个剂量组相比未见清楚差异。

同时电镜观察结果也发现TQ0701三个剂量组及阳性对照组与模型组相比神经细胞病理改动较轻。

结论：

化合物TQ0701对急性脑梗死有清楚的维护作用。

关键词：

TQ0701；

脑缺血再灌注；

依达拉奉；

ProtectiveeffectsofTQ0701oncerebralischemicreperfusioninjuryinrats

Abstract:

Aim:

ToinvestigatetheeffectsofTQ0701bydynamicchangesofinfarctvolumesandneurologicaldeficitscoresonlocalcerebralischemic-reperfusioninjuryinrats.Method:

MaleSDratswererandomlydividedintosham-operatedcontrolgroup（n=10）,normalsalinecontrolgroups（n=10）,edaravone-treatedgroup（3mg/kg）（n=10）andTXL-treatedgroups（6mg/kg,3mg/kgand1.5mg/kg）（n=10each）.Animalsinthelatterfourgroupsweresubjectedtotransientfocalischemiabythemiddlecerebralarteryocclusion（MCAO）for120minutes.TheratswerepretreatedwithnormalsalineorTXL30minbeforeischemicand0min,2hoursafterreperfusion.After24hoursofreperfusion,infarctvolumesweredeterminedby2,3,5-triphenyltetrazoliumchloride（TTC）andneurologicalscoreswereinvestigated.Results:

InfarctvolumesinTQ0701-treatedgroupsweresignificantlydecreasedcomparedwiththoseincontrolgroupsat24afterMCAO,andtheneurologicaldeficitscoresinTQ0701-treatedgroupsweresynchronouslyimproved.Conclusion:

TheseresultsshowthattreatmentwithTQ0701canattenuatebraininjuryandTQ0701maybeapotentialneuroprotectiveagentincerebralischemia-reperfusion.

Keywords:

TQ0701;

cerebralischemicreperfusion;

edaravone

前言

目前，脑血管病严重危害人类安康，已成为三大死亡缘由之一，其中缺血性脑血管病约占56.6%～80%。

因此关于脑血管病治疗药物的研讨与开发具有很大的实践价值和前景。

随着对急性脑缺血再灌注和缺氧复氧损伤研讨的停顿，对脑梗塞的病理生理机制有了新的看法。

少量研讨曾经证明了急性缺血后恢复血液灌流，会使病变加剧而发作再灌注损伤。

目前主要从细胞内钙离子、NMDA受体、自在基、花生四烯酸代谢、缺血区酸碱平衡破坏、基因表达及蛋白质的磷酸化等方面，对脑缺血再灌注损伤的机理和防治展开了普遍而深人的研讨。

下面就几个最基础的病理生理机制停止讨论。

1.钙与缺血缺氧性脑损伤

细胞内钙作为第二信使、代谢调理因子和膜动摇剂在细胞正常机能活动中起重要作用，亦可介导多种病理状况下的细胞死亡。

生理状况下，钙在细胞内外存在很大的浓度差，这依赖于膜正常通透性及胞浆钙外排机制来维持，后一进程需消耗能量。

脑缺血缺氧时主要由于ATP供应缺乏、N-甲基-D-门冬氨酸（NMDA）受体过度兴奋介导与其偶联的钙通道开放、膜通透性增大及封阻机制阻碍而致细胞外钙内流添加、胞浆钙外排阻碍，形成细胞内Ca2+浓度增高[1]。

细胞内Ca2+超载，一方面使血管收缩、进一步减轻脑缺血缺氧；

同时惹起细胞代谢、结构与功用多方面的异常改动，从而招致细胞死亡。

2.自在基连锁反响

脑缺血再灌注时，可经过黄嘌呤氧化酶、线粒体系统、白细胞系统、花生四烯酸相关酶系统、一氧化氮分解酶（NOS）系统等使自在基少量发生，同时自在基进攻系统功用受损，静态平衡被打乱。

自在基具有很高的化学活性，可快速攻击其它化合物的分子并发生更多的自在基，自在基破坏膜结构中蛋白成分、惹起膜脂质过氧化，招致膜损伤、线粒体功用阻碍、溶酶体分裂、细胞溶解和组织水肿等一系列损害作用，称之为自在基连锁反响[2-4]。

近年少量研讨证明，氧自在基介导的自在基连锁反响是招致脑缺血缺氧与再灌注复氧损伤的主要缘由。

3.兴奋性氨基酸的神经毒性作用

生理状况下，兴奋性氨基酸作为正常的神经递质，在神经元之间的信息传递中发扬重要作用。

突触前膜释放的谷氨酸〔GIU〕主要经过神经细胞膜上的高亲和性摄取系统摄取灭活，细胞外液GIU浓度维持在1umol/L左右。

病理形状下，GIU经过使神经元过度兴奋而发扬其神经毒作用。

在脑缺血缺氧时，GIU少量释放，同时其再摄取机制受阻，在突触中堆集，使NMDA受体过度兴奋，启动NMDA受体的控钙通道而使外钙少量内流，由此引发神经细胞的损伤。

目前以为，细胞内钙超载是介导兴奋性氨基酸递质神经毒性作用的关键要素。

GIU主要与局灶性或不完全性脑缺血性损伤有关[5]。

4.脑内NO的神经细胞毒性作用

NO在脑缺血损伤中的作用能够是双重性的。

它一方面可经过舒张脑血管和抑制血小板聚集，下调NMDA受体，从而改善组织灌流、对缺血边缘区脑组织施加直接维护作用，减轻缺血性损害；

另一方面可经过构成自在基或其它途径，而发生神经毒性，减轻缺血损伤，促使缺血区边缘脑组织向梗死开展。

5.花生四烯酸代谢失衡

脑缺血再灌注时，经过AA代谢发生少量的TXA2、PGF2及白三烯（LT）C4、B4等物质。

同时，由于分解酶抑制或内皮细胞损伤而致与TXA2、PGF2具有对立作用的PGI2发生增加，形成TXA2/PGI2比值失衡。

TXA2、PGF2和白三烯等可致血小板聚积、脑血管痉挛和血管通透性添加，减轻脑缺血和脑水肿构成，招致缺血后迟发性低灌注损伤[6]：

LTB4和12-羟花生四烯酸对白细胞浸润和激活起着缩小作用。

并且，AA自身代谢进程中，可发生少量O2-，从不同途径招致组织损伤。

可见，AA代谢失衡在脑缺血再灌注损伤中起着十分重要的作用。

依达拉奉首先由日本三菱东京制药株式会社开发，2001年6月刚刚在日本上市。

1984年日本三菱东京制药株式会社依据酚类化合物具有强的自在基肃清作用的原理,经过屡次挑选,终于研收回一种神经元维护剂（自在基肃清剂）依达拉奉。

它是一种安替吡啉的代谢产物，其在体内以阴离子方式存在，血脑屏障通透性高，静脉给药可肃清大脑内具有高度细胞毒性的羟自在基。

因此，该药最早用于脑缺血性病变急性期治疗。

研讨说明，作为自在基肃清剂，依达拉奉可有效改善脑组织缺血再灌注损伤。

脑缺血再灌注后，过多的氧自在基招致脑组织直接损伤及细胞膜脂质过氧化，破坏细胞膜结构和完整性，惹起细胞膜通透性添加，细胞毒性水肿添加。

研讨证明，依达拉奉能增加神经元NO分解酶，添加内皮型NO合酶，抑制脑线粒体通透性转运孔开放，起到脑组织维护作用。

另外，依达拉奉还能清楚抑制缺血区脑水肿，增加缺血再灌注惹起的白三烯分解[7]。

可见，依达拉奉能对缺血再灌注损伤的脑组织起到理想的维护作用。

随着该药的脑维护作用逐渐失掉临床一定，其顺应症进一步扩展，如治疗心肌缺血、肺缺血、肾脏缺血、肝脏缺血和肠缺血等，其相关研讨已取得较大停顿。

鉴于依达拉奉良好的脑维护作用，在依达拉奉的基础上，对其停止结构改造，分解了新型化合物TQ0701。

本课题就是主要观察TQ0701关于脑缺血的维护作用，从而为该化合物的机制研讨以及临床运用开发提供相关实验数据和实验思绪。

第一章资料

1.1药物和试剂

1.1.1TQ0701原料：

提供单位：

江苏正大天晴制药

规格：

纯度为98.0％以上

配制方法：

按（1.2mgTQ0701原料）：

（1mL0.9%氯化钠溶液）的比例配制成原液。

TQ0701高剂量组，给予大鼠iv0.5mL/100g体重的原液；

中剂量组需将原液用0.9%氯化钠溶液稀释一倍，给药体积同上；

低剂量组将原液稀释两倍，给药体积同上

1.1.2依达拉奉（Edaravone）原料：

按（0.6mg依达拉奉原料）：

（1mL0.9%氯化钠溶液）的比例配制成溶液。

大鼠iv0.5mL/100g体重

1.1.3水合氯醛（TCA）:

国药集团化学试剂

剖析纯

用0.9%氯化钠溶液配制成10%的溶液，大鼠ip0.5mL/100g体重

1.1.4红四氮唑（TTC）：

上海灵锦精细化工

剖析纯

用PBS溶液配制成1%的溶液，4℃避光保管

1.1.5PBS溶液（g/L）：

每升蒸馏水参与NaCl8.00g，KCL0.20g，Na2HPO4·

H2O0.156g，KH2PO40.20g，充沛溶解

1.1.60.9%氯化钠溶液：

中国大冢制药

250ml/瓶

1.1.7肝素钠注射液

提供