正交试验法优选槐花米中芸香苷的水提取工艺条件原稿Word文件下载.docx
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但在提取时芸香苷的收得率受药材的粉碎度、溶液的pH值、提取溶剂用量、提取次数、提取时间、酸沉淀时的pH值、结晶的时间等因素的影响而有差异。
《中药化学》[5]采用三种方法进行提取，第一种是以沸水煎煮5～10分钟提取2次，直接放冷结晶；
第二种是以pH8.5的左右的石灰水煎煮10分钟提取，在pH2～3的HCl水溶液中结晶；
第三种是以10倍量0.4%硼砂水溶液加入药材后用石灰乳调pH8～9后煎煮30分钟提取2次，在pH2～3的HCl水溶液中结晶的方法进行提取。
《中草药成分化学》[6]采用6倍沸水加入石灰乳调pH8～9后煎煮20～30分钟提取1次，在pH5的HCl水溶液中结晶24小时；
《天然药物化学》[7]采用6倍沸水加入石灰乳调pH8～9后煎煮20～30分钟提取，残渣再用4倍水提1次，在pH5的HCl水溶液中结晶24小时，《天然药物化学》[8]采用10倍0.4％的硼砂水溶液加入药材后用石灰乳调pH8～9后煎煮15分钟提取2次，在pH2～3的HCl水溶液中放置过夜结晶的方法进行提取，《天然药物化学》[9]采用10倍0.4％的硼砂水溶液加入药材后用石灰乳调pH8～9后煎煮20分钟提取2次，在pH2～3的HCl水溶液中放置结晶的方法进行提取提，《天然药物化学》[10]采用10倍0.4％的硼砂水溶液加入药材后用石灰乳调pH8～9后煎煮20～30分钟提取2次，在pH3～4的HCl水溶液中放置过夜结晶的方法进行提取提，《天然药物化学》[11]采用5.7倍0．4％的硼砂水溶液加入药材后用石狄乳调pH8～8.5后煎煮50分钟提取2次，在pH6.0～6.5的HCl水溶液中放置过夜结晶的方法进行提取提，《天然药物化学》[12]采用6倍水加适量硼砂的水溶液加入药材后用石灰乳调pH8后煎煮20～30分钟提取1次，残渣再用4倍水提1次，在pH5～6的HCl水溶液中放置结晶的方法进行提取提等；
由于影响芸香苷提取收得率的因素较多，笔者采用上述各种条件下提取对比后发现最后产品的收得率相差较大，故采用以水为溶媒用正交试验法对影响芸香苷提取收得率的诸因素进行优选，找到从槐米中提取芸香苷的最佳提取条件。
经查阅资料后发现见《槐花米中芦丁提取最佳pH值的实验研究》[13]；
《槐花米中药用有效成分芦丁提取方法研究》[14]；
《两种芦丁提取方法pH值的比较研究》[15]；
《芸香甙提取工艺的改进研究》[16]；
《正交法优化槐米中芦丁的提取工艺》[17]；
《正交法优选槐花米中芦丁的提取工艺》[18]报道。
但均未系统对影响芸香苷提取收得率的因素进行优选，只对其中二三个因素进行过研究或优选，而同时对芸香苷提取收得率影响的7个因素进行优选尚未见报道。
故本人对以水为溶媒，槐花米为原料，以药材的粉碎度、水溶液的pH、水溶液的用量、提取次数、提取时间、酸沉pH值、结晶的时间七个因素，以槐米中所含成分芸香苷的粗品提取收得率为评价指标，采用L18（37）正交试验，对影响槐米的沸水煎煮提取效果的诸因素（药材的粉碎度、水溶液的pH、水溶液的用量、提取次数、提取时间、酸沉pH值、结晶时间）进行优选，从诸因素中找到影响芸香苷提取收得率的最佳提取条件。
l实验原理
以槐花米中所含成分芸香苷的提取收得率为评价指标，采用L18（37）正交试验，对影响槐米的水煎煮提取效果诸因素（A药材的粉碎度、B水溶液的pH、C水溶液的用量、D提取次数、E提取时间、F酸沉pH值、G结晶的时间）进行优选。
对因素A、B、C、D、E、F、G在试验范围内分别选取三个水平如下：
A药材的粉碎度:
Al=未粉碎、A2=压碎、A3=细粉
B水溶液的pH：
B1=pH8、B2=pH9、B3=pHl0
C水溶液的用量：
C1=1:
10倍、Cl=1:
20倍、C1=1:
30倍
D提取次数：
D1=1次、D2=2次、D3=3次
E提取时间：
El=15分钟、E2=30分钟、E3==45分钟
F酸沉pH值：
F1=pH2、F2=pH4、F3=pH6
G结晶时间：
Gl=12小时、G2=24小时、G3=36小时
选七个因素，每个因素选三个水平时，全面试验的数目是73=343次，而采用正交试验方案则只需进行18次即可，且正交试验具有典型性、代表性、大大减少试验次数，正交表中所选出的试验满足“均匀分散和整齐可比，易于使用数理统计方法处理实验结果”[19]。
故对影响芸香苷提取收得率的7个因素，每个区素3个水平设计正交实验表如下：
表1实验正交试验计划表L18（37）
所在列
1
2
3
4
5
6
7
因素
A
药材的粉碎度
B
水溶液的pH
C
料液比
D
提取次数
E
提取时间
F
酸沉pH值
G
结晶时间
实验1
A1（未粉碎）
B1（pH8）
C1（1:
10）
D1（1次）
E1（15分钟）
F1（pH2）
G1（12小时）
实验2
B2（pH9）
C2（1:
D2（2次）
E2（30分钟）
F2（pH4）
G2（24小时）
实验3
B3（pH10）
C3（1:
D3（3次）
E3（45分钟）
F3（pH6）
G3（36小时）
实验4
A2（压碎）
实验5
实验6
实验7
A3（细粉）
实验8
实验9
实验10
实验11
实验12
实验13
实验14
实验15
实验16
实验17
实验18
2材料与方法
2.l材料
槐花米药材由云南省楚雄州药材公司提供（经冲细后过筛，压碎的槐花米过10目筛；
细粉过20目筛）；
乙醇、氢氧化钙、四硼酸钠（硼砂）、三氯化铝、氯仿、冰醋酸、盐酸、镁粉、等均为分析纯：
薄层层析硅胶G（青岛美方化工有限公司）；
芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号100080-200306）；
其他试剂均为分析纯。
2.2主要设备与仪器
TN-100B千分之一托盘扭力天平（上海精密科学仪器有限公司），SH2-D3型循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限公司），10lA-3型电热鼓风恒温干燥箱（上海市崇明实验仪器厂），pHS-3C数字酸度计（上海鹏顺科学仪器有限公司），SUV-1箱式紫外分光分析仪（上海科学器材公司）。
2.3实验方法
选用不同粒度的槐花米药材，称取20g，加O.4％的硼砂[20]水溶液按正交表中的料液比加入，按正交表中要求用石灰乳调节提取溶液pH后，以表中的次数和时间用煎煮法提取，四层纱布过滤，滤液常温下放冷后，按正交表中要求加浓HCI调pH，按表中规定的时间放置结晶，析出淡黄色沉淀，减压抽滤，沉淀物室温凉干后加200倍量蒸馏水加热煮沸溶解，趁热抽滤，滤液按表中规定的时间放置结晶，析出淡黄色沉淀，减压抽滤，然后用蒸馏50m1水洗3次，抽干，得到的芸香苷，将芸香苷置于60℃烘箱中干燥8h，移至干燥器中，放置1h后称定质量，计算提取收得率（提取收得率=芸香苷质量／槐米质量）（见表2）。
2.4定性分析
取提取得到的芸香苷溶解制成1％的乙醇溶液后，与相同方法制成的芸香苷标准品点于同一块硅胶G-CMC-CNa，薄层板（硅胶G10～401um；
0．8％CMC-Can水溶液制板；
110℃活化30分钟；
干燥器中冷却2h）上，以氯仿-乙醇-冰醋酸（15:
5:
1）为展开剂，展开后取出划下溶剂前沿，晾干，以1％三氯化铝乙醇溶液喷雾显色，显色前后分别于紫外灯（波长为254nm）下检测，与芸香苷标准品对照，计算Rf值，确认提取物中含有芸香苷：
另外进行盐酸-镁粉反应，观察颜色进行鉴别并与对照品对照。
3结果与分析
表2实验结果
芸香苷
质量（g）
收得率
（%）
实验l
Al
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