食品农药残留快速检测PPtPPT资料.ppt

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按化学结构分类：

有机氯类有机氯类有机磷类有机磷类氨基甲酸酯类氨基甲酸酯类拟除虫菊酯类拟除虫菊酯类农药检测现状：

农药检测现状：

随着食品中农药残留最高限量标准不断降低，随着食品中农药残留最高限量标准不断降低，检测难度越来越大，对检测技术的要求也越检测难度越来越大，对检测技术的要求也越来越高。

这就需要有相应的检测技术与之相来越高。

这就需要有相应的检测技术与之相匹配，尤其是快速检测技术。

匹配，尤其是快速检测技术。

与日本严格的农药残留标准相比，中国的标与日本严格的农药残留标准相比，中国的标准相对较少。

农残检查超标前准相对较少。

农残检查超标前5名农药，中名农药，中国都未作农残限量规定；

国都未作农残限量规定；

与欧、美等都相差甚远，欧盟农残限量指标与欧、美等都相差甚远，欧盟农残限量指标28689个，美国农残限量指标个，美国农残限量指标7400个。

因此，个。

因此，必须适应国际新形势，制定合理的残留新标必须适应国际新形势，制定合理的残留新标准。

准。

常用农药的分类及性质常用农药的分类及性质有机磷农药特点：

药效高、毒性大、易降解、广谱，成为目前农药生产中吨位最大，也是世界上生产和使用最多的农药品种。

图图3-1有机磷农药结构通式有机磷农药结构通式有机磷农药是典型的酶毒剂，可以通过消化道、皮肤、有机磷农药是典型的酶毒剂，可以通过消化道、皮肤、粘膜、呼吸道吸收。

粘膜、呼吸道吸收。

毒理：

对神经突触后膜上的乙酰胆碱酯酶活性的抑制，使毒理：

对神经突触后膜上的乙酰胆碱酯酶活性的抑制，使酶不能催化乙酰胆碱水解，导致组织中乙酰胆碱过量蓄积。

酶不能催化乙酰胆碱水解，导致组织中乙酰胆碱过量蓄积。

乙酰胆碱传导介质代谢紊乱，可导致迟发性神经毒性，引乙酰胆碱传导介质代谢紊乱，可导致迟发性神经毒性，引起运动失调、昏迷、呼吸中枢麻痹、瘫痪甚至死亡。

起运动失调、昏迷、呼吸中枢麻痹、瘫痪甚至死亡。

常用农药的分类及性质常用农药的分类及性质氨基甲酸酯类农药（NMCs）是继有机磷之后出现的一类农药。

NMCs的结构特性是含有一个N-甲基基团，为白色晶体，难溶于水，易溶于丙酮、二氯甲烷、氯仿、乙腈等，碱性和高温条件下很易被水解。

具有杀虫效力强、作用迅速等特点。

它的最大优点是在植物中只短暂停留，施用后很短的时间内就可被降解成相应的代谢产物，这些代谢产物通常具有与母体化合物相同或更强的活性。

20世纪70年代以来，由于有机氯农药受到禁用或限用，以及抗有机磷杀虫剂的昆虫品种日益增多，因而NMCs的用量逐年增加，这就使得NMCs的残留情况倍受关注。

食品安全快速检测食品安全快速检测超临界萃取（超临界萃取（SCFE）常用农残快检方法常用农残快检方法1、酶抑制法、酶抑制法2、免疫分析法、免疫分析法3、生物传感器法、生物传感器法要求：

快速、灵敏、便捷要求：

快速、灵敏、便捷意义：

作为实验室检测的辅助方法，对大量样品加意义：

作为实验室检测的辅助方法，对大量样品加以定性筛选，以减少送实验室定量检测的压力。

以定性筛选，以减少送实验室定量检测的压力。

农药残留快速检测方法：

1、酶抑制法：

利用农药对胆碱酯酶的抑制作用，、酶抑制法：

利用农药对胆碱酯酶的抑制作用，加入特定的显色剂，通过颜色深浅的变化确定是否加入特定的显色剂，通过颜色深浅的变化确定是否有农药残留或农药残留相对量的快速检测方法。

有农药残留或农药残留相对量的快速检测方法。

造价不高，试剂生产已成规模，稳定性好，特点：

造价不高，试剂生产已成规模，稳定性好，操作简便、速度快，特别适宜现场检测或对大批量操作简便、速度快，特别适宜现场检测或对大批量样品的筛查，目前普遍使用。

样品的筛查，目前普遍使用。

关键：

如何选择酶源关键：

如何选择酶源酶源：

酶源：

来自动物的胆碱酯酶来自动物的胆碱酯酶从植物中提取的植物酯酶从植物中提取的植物酯酶动物酶原：

动物酶原：

超临界萃取（超临界萃取（SCFE）胆碱酯酶广泛存在于动物的组织中。

目前主要集中胆碱酯酶广泛存在于动物的组织中。

目前主要集中在动物肝脏和血液，如猪肝，鸡血等在动物肝脏和血液，如猪肝，鸡血等也有利用蚯蚓以及海洋鱼类，甲壳类动物的神经组织、也有利用蚯蚓以及海洋鱼类，甲壳类动物的神经组织、脑组织分离乙酰胆碱酯酶。

脑组织分离乙酰胆碱酯酶。

1953年年stedman等首先从马血清中分离出乙酰胆碱酯酶等首先从马血清中分离出乙酰胆碱酯酶动物酶原：

从昆虫提取，如：

家蝇、麦二叉蚜、黄猩猩果蝇、烟从昆虫提取，如：

家蝇、麦二叉蚜、黄猩猩果蝇、烟草天蛾、光叶库蚊、黄粉甲、美洲淤夜蛾、豆荚草盲草天蛾、光叶库蚊、黄粉甲、美洲淤夜蛾、豆荚草盲蝽、马铃薯叶甲、骚扰角蝇及棉铃虫等。

蝽、马铃薯叶甲、骚扰角蝇及棉铃虫等。

超临界萃取（超临界萃取（SCFE）以从敏感家蝇中提取的乙酰胆碱酯酶效果最佳，研究以从敏感家蝇中提取的乙酰胆碱酯酶效果最佳，研究表明，家蝇羽化后表明，家蝇羽化后2-3天时其头部的乙酰胆碱酯酶敏天时其头部的乙酰胆碱酯酶敏感性最高。

感性最高。

不足：

保持期短，需冷冻低温保存。

超临界萃取（超临界萃取（SCFE）原理：

原理：

乙酰胆碱酯酶乙酰胆碱酯酶乙酰胆碱乙酰胆碱乙酸乙酸+胆碱胆碱5，5-二硫代二硫代-双双-2-硝基苯甲酸硝基苯甲酸5，5-二硫代二硫代-双双-2-硝基苯甲酸（黄色）硝基苯甲酸（黄色）在在410nm处有最大吸收，测定其在单位时间内的处有最大吸收，测定其在单位时间内的生成量，即可测得乙酰胆碱酯酶的活性。

通过测定生成量，即可测得乙酰胆碱酯酶的活性。

通过测定乙酰胆碱酯酶乙酰胆碱酯酶（AChE）受抑制的程度来检测有机磷受抑制的程度来检测有机磷或氨基甲酸酯类农药。

或氨基甲酸酯类农药。

植物酶原：

超临界萃取（超临界萃取（SCFE）植物酯酶特点：

酶源丰富，提取和保存较为方便，植物酯酶特点：

酶源丰富，提取和保存较为方便，只需以一定比例的水或缓冲液混合离心获得的上清只需以一定比例的水或缓冲液混合离心获得的上清液即可作为粗酶液，并在液即可作为粗酶液，并在-4保存即可。

测量准确保存即可。

测量准确度和精密度均不逊色度和精密度均不逊色。

植物酯酶植物酯酶乙酸萘酯乙酸乙酸+萘酚萘酚显色剂固蓝显色剂固蓝B偶氮化合物（紫红色）偶氮化合物（紫红色）酶抑制法酶抑制法肉眼观察法肉眼观察法目视比色法目视比色法速测卡法速测卡法酸碱指示剂法酸碱指示剂法酶片法酶片法试剂盒法试剂盒法检测箱法检测箱法pH计测量法计测量法分光光度法分光光度法农药残留快检方法：

农药残留快检方法：

2、免疫分析法、免疫分析法：

高等动物都有免疫功能，当细菌、高等动物都有免疫功能，当细菌、病毒和有害物等病原入侵时，能产生抵御外来物的病毒和有害物等病原入侵时，能产生抵御外来物的抗体，这就是动物的免疫反应。

抗体，这就是动物的免疫反应。

致病的外来物被称为抗原。

免疫是机体识别和排除致病的外来物被称为抗原。

免疫是机体识别和排除进入体内的抗原性异物的保护性反应。

进入体内的抗原性异物的保护性反应。

免疫反应，即抗原抗体反应，不仅发生在生物体内，免疫反应，即抗原抗体反应，不仅发生在生物体内，在体外亦能进行，而且反应是高度特异在体外亦能进行，而且反应是高度特异（即对特定结即对特定结构的农药具选择性构的农药具选择性），高度灵敏，高度灵敏（可达可达pg/kg-mg/kg水水平平）。

超临界萃取（超临界萃取（SCFE）农药免疫分析始于农药免疫分析始于1968年，年，CentenoE.R等人制等人制备了抗滴滴涕和马拉硫磷抗体，应用放射免疫法备了抗滴滴涕和马拉硫磷抗体，应用放射免疫法测定。

测定。

随后随后Sernberger.L.等人先后开发出狄氏剂、艾等人先后开发出狄氏剂、艾氏剂、苯菌灵、百草枯等农药的免疫分析法。

氏剂、苯菌灵、百草枯等农药的免疫分析法。

1981年，年，Ercegovich.R.等研制出对硫磷及等研制出对硫磷及2,4滴和滴和2,4,5涕的放射免疫分析法涕的放射免疫分析法（RIA）分析方法，分析方法，检测限可达检测限可达0.1g/kg。

方法溯源：

超临界萃取（超临界萃取（SCFE）局限性：

大部分农药的残留量都可以使用气相色局限性：

大部分农药的残留量都可以使用气相色谱法等测定，该法并未比气相法更优越谱法等测定，该法并未比气相法更优越人工合成抗原以及制备抗体的困难人工合成抗原以及制备抗体的困难免疫分析技术未被普遍重视。

免疫分析技术未被普遍重视。

免疫分析中的酶免疫分析法以其高度特异性和灵免疫分析中的酶免疫分析法以其高度特异性和灵敏度，特别适合农药残留分析，故在敏度，特别适合农药残留分析，故在80年代得到年代得到了快速发展。

了快速发展。

超临界萃取（超临界萃取（SCFE）酶联免疫具有专一性强、灵敏度高、快速、操作酶联免疫具有专一性强、灵敏度高、快速、操作简单等优点，试剂盒可广泛用于现场样品和大量简单等优点，试剂盒可广泛用于现场样品和大量样品的快速检测，可准确定性、定量。

样品的快速检测，可准确定性、定量。

但由于受到农药种类多，抗体制备难度大、在不但由于受到农药种类多，抗体制备难度大、在不能肯定样本中的农药残留种类时检测有一定的盲能肯定样本中的农药残留种类时检测有一定的盲目性以及抗体依赖国外进口等影响，酶联免疫法目性以及抗体依赖国外进口等影响，酶联免疫法的应用范围受到较大的限制的应用范围受到较大的限制。

超临界萃取（超临界萃取（SCFE）目前国外已研制出几十种农药的酶联免疫试剂盒，目前国外已研制出几十种农药的酶联免疫试剂盒，对于免疫分析技术在农药快速检测中的应用研究对于免疫分析技术在农药快速检测中的应用研究十分活跃，包括有机磷类、拟除虫菊酯类、有机十分活跃，包括有机磷类、拟除虫菊酯类、有机氯类、三嗪类、氨基甲酸酯类等。

某些有机磷农氯类、三嗪类、氨基甲酸酯类等。

某些有机磷农药的检测限可达到药的检测限可达到ng甚至甚至pg级，一些试剂盒已级，一些试剂盒已经商品化，广泛用于现场样品和大量样品的快速经商品化，广泛用于现场样品和大量样品的快速监测。

监测。

农药的酶联免疫试剂盒介绍：

目前用于现场快速筛选的有目前用于现场快速筛选的有酶联免疫吸附测定法酶联免疫吸附测定法（ELISA试剂盒试剂盒）和和有机磷农药免疫胶体金有机磷农药免疫胶体金快速检快速检测试剂板。

测试剂板。

3生物传感器法生物传感器法原理：

对特定种类化学物质或生物活性物质具有选择性和可反应的分原理：

对特定种类化学物质或生物活性物质具有选择性和可反应的分析装置。

析装置。

传感器中传感器中复杂样品中复杂样品中+识别反应识别反应如：

酶与底物、如：

光热、如：

光热、抗体与抗原、抗体与抗原、声音、声音、（如：

光敏管压电装置）（如：

光敏管压电装置）外源凝集素与糖、外源凝集素与糖、颜色、颜色、光极光敏电阻、光极光敏电阻、核酸与互补片段、核酸与互补片段、电化学电化学离子选择性电极离子选择性电极显示或记录显示或记录特定的特定的目标分析物目标分析物物理化学物理化学信号信号生物生物敏感层敏感层转转化化器器转换成第二信号转换成第二信号（通常为电信号通常为电信号）放放大大生物传感器