显微镜直接计数实验报告优质PPT.ppt

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二、实验原理二、实验原理由于计数室的容积是一定的（由于计数室的容积是一定的（001mm1mm33），），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。

由目来换算成单位体积内的微生物总数目。

由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。

又称为总菌计数法。

血球计数板血球计数板通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。

中间的平台又被一短横槽隔成成三个平台。

中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，孢子的计数就在计数室中进行。

即为计数室，孢子的计数就在计数室中进行。

计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成大方格分成1616个中方格，而每个中方格又分成个中方格，而每个中方格又分成2525个小方格；

个小方格；

另一种是一个大方格分成另一种是一个大方格分成2525个中个中方格，而每个中方格又分成方格，而每个中方格又分成1616个小方格。

个小方格。

但无但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的，即方格数都是相同的，即161625=40025=400小方格。

小方格。

每一个大方格边长为每一个大方格边长为1mm1mm，则每一大方格的，则每一大方格的面积为面积为1mm1mm22，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为片之间的高度为0.1mm0.1mm，所以计数室的容积为，所以计数室的容积为0.1mm0.1mm33。

在计数时，通常数五个中方格的总孢子数，在计数时，通常数五个中方格的总孢子数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上然后求得每个中方格的平均值，再乘上1616或或2525，就得出一个大方格中的总孢子数，然后，就得出一个大方格中的总孢子数，然后再换算成再换算成1ml1ml菌液中的总菌数。

菌液中的总菌数。

以一个大方格有以一个大方格有2525个中方格的计数板为例进个中方格的计数板为例进行计算。

行计算。

设五个中方格中总孢子数为设五个中方格中总孢子数为AA，孢子液稀释倍，孢子液稀释倍数为数为BB，那么，一个大方格中的总孢子数：

，那么，一个大方格中的总孢子数：

（即（即0.1mm0.1mm33的总孢子数的总孢子数）为为A/5A/52525BB因因1mL=1cm1mL=1cm33=1000mm=1000mm331mL1mL悬液中的总数悬液中的总数=A/5=A/52525BB100010001010=50000A=50000AB（B（个个）三、实验材料三、实验材料菌种：

黑曲霉孢子悬液菌种：

黑曲霉孢子悬液仪器或其他用具：

血球计数板、显微镜、仪器或其他用具：

血球计数板、显微镜、盖玻片、毛细滴管盖玻片、毛细滴管四、方法与步骤四、方法与步骤1.1.孢子悬液制备孢子悬液制备2.2.镜检计数室镜检计数室3.3.加样品加样品将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，取孢子，取孢子悬液，悬液，摇匀，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，让悬用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，让悬液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计一般计数室均能充满数室均能充满悬悬液液，计数室内不得有气泡。

，计数室内不得有气泡。

加样加样加样加样4.4.显微镜计数显微镜计数静止静止5min5min后后，用低倍镜观察并将计数，用低倍镜观察并将计数室移室移至视野中央。

至视野中央。

在高倍镜下计数：

随机计数五个中格的孢子在高倍镜下计数：

随机计数五个中格的孢子数，然后求得每个中格的平均值。

乘上数，然后求得每个中格的平均值。

乘上1616（或（或2525）就得出一大格中的总孢子数，最后）就得出一大格中的总孢子数，最后再换算到每再换算到每mLmL悬液中的含孢子数。

悬液中的含孢子数。

将结果记录于下表中，将结果记录于下表中，AA表示五个中方格表示五个中方格中总孢子数；

中总孢子数；

BB表示孢子悬液稀释倍数表示孢子悬液稀释倍数各中格中菌数各中格中菌数AABB二室二室平均平均值值菌数菌数/mL/mL1122334455第第一一室室第第二二室室5.5.清洗血球计数清洗血球计数使用完毕后，将计数板在水龙头上用水冲洗使用完毕后，将计数板在水龙头上用水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或干净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用电吹风吹干。

用电吹风吹干。

实验过程中注意事项实验过程中注意事项（11）保证计数前计数室是干燥、洁净）保证计数前计数室是干燥、洁净（22）加样位置要准确无误，自然吸进。

）加样位置要准确无误，自然吸进。

（33）样品稀释度要求每小格约有）样品稀释度要求每小格约有5-105-10孢子体孢子体为宜。

为宜。

（44）计上不计下）计上不计下,计左不计右。

计左不计右。

（55）由于孢子处于不同空间位置，需不断调）由于孢子处于不同空间位置，需不断调节焦距观察。

节焦距观察。

（55）同一个样品，要计数两个计数室，得）同一个样品，要计数两个计数室，得出平均数来进行计算。

出平均数来进行计算。

（66）清洗时，切勿用硬物洗刷，洗完后要）清洗时，切勿用硬物洗刷，洗完后要自行晾干或吹风机吹干。

自行晾干或吹风机吹干。

五、作业五、作业结果：

结果：

P55思考题：

思考题：

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