Coombs操作说明PPT文档格式.ppt

Coombs操作说明PPT文档格式.ppt

《Coombs操作说明PPT文档格式.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《Coombs操作说明PPT文档格式.ppt（15页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

一实验前准备：

11%标准A，B，O型红细胞悬液（三人以上混合，洗涤一次）。

2.1%不完全抗体筛选细胞（O型红细胞）、，0.2M巯基乙醇应用液。

3打开37Diana孵育器，56水浴箱，各离心机电源。

二新生儿及其父母血型卡、直抗试验1：

1离心抗凝血标本，取压积红细胞1ul加1ml生盐配成1%红细胞悬液（可不洗涤）。

2血型卡上写好姓名，8孔中加入患者1%的红细胞悬液50ul。

3不孵育，将卡放到Dianafuge离心机中离心。

4观察血型、直抗试验结果。

注：

IgG：

兔多克隆抗-IgGAHG：

多克隆抗人球蛋白二新生儿及其父母血型卡、直抗试验2：

姓名离心观察血型、直抗试验结果患者1%的红悬50ul三放散试验1：

1取新生儿压积红细胞200ul洗涤三次。

2加200ul生盐混匀在56水浴箱10分钟（中间轻轻振荡几次），2500转/分离心3分钟。

3Coombs卡上做好标记，取上述上清液50ul加到Coombs卡孔上。

三放散试验2：

4加入相应1%标准A，B，O型红细胞悬液50ul。

原则：

新生儿血型为A型，加标准A，O型红悬2孔；

新生儿血型为B型，加标准B，O型红悬2孔；

新生儿血型为AB型，加标准A，B，O型红悬3孔；

新生儿血型为O型，加标准O型红悬1孔；

5.37下孵育15分钟，离心。

6.观察放散试验结果。

三放散试验：

新生儿压积红悬200ul洗涤三次压积红:

生盐=1:

156,10min2500rpm,3min+1%标准A，B，O型红细胞悬液50ulAO放散姓名离心观察放散试验结果37,15min上清50ul四游离试验：

1Coombs卡上做好标记，加入50ul新生儿血浆。

2加入相应1%标准A，B，O型红细胞悬液50ul。

新生儿血型为AB型，加标准A,B,O型红悬3孔；

4.37下孵育15分钟，离心。

5.观察放散试验结果。

五直接抗人球蛋白试验（Cooms）：

1.在Coombs卡AHG下做好标记。

2.加入1%被检红悬50ul。

3.不孵育，将卡放到Dianafuge离心机中离心。

4.观察血型、直抗试验结果。

AHG：

多克隆抗人球蛋白六IgG抗体效价检测：

1.Coombs卡上做好标记。

2.取200ul孕妇血浆与200ul巯基乙醇应用液等量混匀，37水浴1小时，破坏IgM抗A/B抗体。

3.2500转/分离心3分钟，取上清100ul，用生理盐水等比稀释至1：

512。

4.在Coombs卡4孔上加入稀释好的第5-8孔50ul，再加入相应1%标准A，B，O型红细胞悬液50ul。

七IgG抗体效价检测：

2.主侧：

患者血浆50ul供者红悬50ul。

3.次侧：

供者红悬50ul患者血浆50ul。

八抗体筛查：

2.患者血浆50ul1%不完全抗体筛选细胞各50ul。

3.37下孵育15分钟，离心。

4.观察放散试验结果。

九注意事项：

1红细胞悬液浓度为1%，过高过低可能影响结果。

2实验后做好结果的记录和报告，保存血标本在4冰箱一周。