药物分析课件第16章-药品质量控制中的现代分析方法与技术PPT课件下载推荐.ppt

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一、高分辨气相色谱法一、高分辨气相色谱法

（一）色谱柱一）色谱柱11毛细管柱的类型：

毛细管柱的类型：

柱类型柱类型柱内径柱内径柱长柱长液膜厚度液膜厚度普通开管柱普通开管柱0.20.20.530.53mm5mm560m0.160m0.11.0m1.0m壁涂开管柱壁涂开管柱多孔多孔层开管柱层开管柱担体涂渍开管柱担体涂渍开管柱微内径开管柱微内径开管柱100100mm大内径开管柱大内径开管柱0.320.32mm1mmm1m或或55mm22毛细管柱的选择毛细管柱的选择常用的常用的固定液固定液有：

有：

SE-31SE-31、OV-1OV-1、SE-54SE-54、SE-52SE-52、OV-1701OV-1701、CarbowaxCarbowax20M20M。

柱的选择柱的选择：

根据样品组分的沸点，一般地，相差：

根据样品组分的沸点，一般地，相差22或或22以上的组分，采用非极性毛细管柱分离；

以上的组分，采用非极性毛细管柱分离；

若沸点相差在若沸点相差在22以内的组分，则需在极性较大以内的组分，则需在极性较大的毛细管柱上分离。

的毛细管柱上分离。

33毛细管柱的性能评价毛细管柱的性能评价评价指标评价指标：

分离效率、表面惰性、热稳定性。

：

评价方法评价方法：

在一定的色谱条件下，分离各种测试物质，：

在一定的色谱条件下，分离各种测试物质，获得的特征性数据和峰对称性，以此来评价柱效和表获得的特征性数据和峰对称性，以此来评价柱效和表面活性。

在测定了柱效和表面活性之后，用流失速率面活性。

在测定了柱效和表面活性之后，用流失速率试验来评价热稳定性。

试验来评价热稳定性。

（二）进样方式

（二）进样方式分流进样分流进样：

使用方便，对分流比、进样温：

使用方便，对分流比、进样温度度样品和载气的情况、进样体积和样品和载气的情况、进样体积和浓度、进样重复性需要注意。

浓度、进样重复性需要注意。

不适于不适于痕量分析和宽沸程样。

痕量分析和宽沸程样。

适合适合大多数类型的样品，样品浓大多数类型的样品，样品浓浓高、各组分的浓度相近浓高、各组分的浓度相近不分流进样不分流进样：

须利用溶剂效应或冷阱，操作较难：

须利用溶剂效应或冷阱，操作较难特别适用于痕量分析和宽沸程样品特别适用于痕量分析和宽沸程样品柱头进样柱头进样：

必须使用外径为：

必须使用外径为0.170.170.230.23mmmm的的细针，柱内径必须大于细针，柱内径必须大于0.320.32mm,mm,不能通过隔垫进样，缓慢进样不能通过隔垫进样，缓慢进样对热不稳定、稀的和宽沸程样品较对热不稳定、稀的和宽沸程样品较理想；

能给出定量结果理想；

能给出定量结果非挥发物在柱的中积累导致柱变性非挥发物在柱的中积累导致柱变性和柱效损失和柱效损失直接进样直接进样：

样品无须事先浓缩，进样器温度可较：

样品无须事先浓缩，进样器温度可较低，载气消耗量小，分析所需样量小低，载气消耗量小，分析所需样量小适用于浓度范围要比不分流进样宽一个适用于浓度范围要比不分流进样宽一个数量级以上的样品，有利于对热不稳定数量级以上的样品，有利于对热不稳定的样品；

当样品中含有挥发性低的组分的样品；

当样品中含有挥发性低的组分时，难于定量分析时，难于定量分析（三）应用示例（三）应用示例-人尿中劳拉西泮的检测人尿中劳拉西泮的检测1.1.测定意义：

劳拉西泮测定意义：

劳拉西泮（简称简称LRZ）LRZ）上用为催眠、镇静上用为催眠、镇静和抗癫痫药物和抗癫痫药物,常被犯罪分子作为麻醉药物用于麻醉常被犯罪分子作为麻醉药物用于麻醉抢劫等麻醉后犯罪。

为了确证这类案件的性质抢劫等麻醉后犯罪。

为了确证这类案件的性质,经常经常需要对受害人的血、尿等体液中麻醉药物或其代谢物需要对受害人的血、尿等体液中麻醉药物或其代谢物进行检测。

人体摄入该药后其血液中药物浓度较低进行检测。

人体摄入该药后其血液中药物浓度较低,且犯罪分子所用药量一般不使受害人死亡且犯罪分子所用药量一般不使受害人死亡,而且此类而且此类案件一般报案较迟，因此血中药物浓度较低案件一般报案较迟，因此血中药物浓度较低,对其检对其检测较为困难。

该药主要以葡萄糖醛酸苷的形式由尿液测较为困难。

该药主要以葡萄糖醛酸苷的形式由尿液排泄。

排泄。

2.2.色色谱谱条条件件：

HP-5HP-5毛毛细细管管柱柱（30（300.320.32mmmm,膜膜厚厚0.10.1）。

氮氮磷磷检检测测器器,不不分分流流进进样样（阀阀关关闭闭时时间间0.750.75min）,min）,进进样样口口温温度度:

280,:

280,柱柱温温:

200（1:

200（1min）20/min280min）20/min280（15min）,（15min）,载载气气为为高高纯纯氮氮（2.2（2.2ml/min）,ml/min）,尾吹气为高纯氮尾吹气为高纯氮（10（10ml/min）ml/min）。

3.3.样品预处理样品预处理-酶解及萃取酶解及萃取取检尿取检尿11ml,ml,加加1010mg/Lmg/L的羟乙基氟西泮的羟乙基氟西泮（HEF）HEF）标准工标准工作液作液1010l,l,再加再加pH4.8pH4.8的乙酸盐缓冲液的乙酸盐缓冲液5050ll及及-葡萄葡萄糖醛酸苷酶溶液糖醛酸苷酶溶液0.10.1l,l,置于置于5555水浴中水解水浴中水解44冷至室冷至室温后加温后加pH10.8pH10.8的碳酸盐缓冲液的碳酸盐缓冲液0.50.5mlml及乙醚及乙醚55ml,ml,涡旋涡旋22min,min,离心离心,分取上层有机相分取上层有机相44mlml置于经硅烷化处理的带置于经硅烷化处理的带尾管的鸡心瓶中尾管的鸡心瓶中,加甲醇加甲醇0.40.4ml,ml,于于4040水浴中挥发至约水浴中挥发至约0.10.1ml,ml,进样进样11ll进行进行GCGC分析分析4.4.方法学评价方法学评价

（1）1）选择性选择性:

空白尿空白尿11mlml及空白尿及空白尿11mlml加加LRZLRZ和和HEFHEF标标准液准液,经酶解、萃取后进样分析所得色谱图表明尿经酶解、萃取后进样分析所得色谱图表明尿中杂质不干扰检测中杂质不干扰检测.

（2）2）线性试验线性试验:

用空白尿配制不同浓度的用空白尿配制不同浓度的LRZLRZ标准标准液进行酶解、萃取、进样分析液进行酶解、萃取、进样分析,将将LRZLRZ与与HEFHEF色谱峰色谱峰面积的比值与面积的比值与LRZLRZ在尿液中的质量浓度进行线性回在尿液中的质量浓度进行线性回归归,得到工作曲线方程得到工作曲线方程:

Y=3.110Y=3.110-3-3X3.010X3.010-33,=0.998=0.998。

LRZLRZ在尿中的浓度为在尿中的浓度为5050500500g/Lg/L范围内呈良好的线性范围内呈良好的线性.（3）3）萃取液的选择及萃取率萃取液的选择及萃取率:

作者进行了多种溶剂萃取作者进行了多种溶剂萃取LRZLRZ的研究的研究,由经萃取与未经萃取所得色谱峰面积由经萃取与未经萃取所得色谱峰面积比计算比计算LRZLRZ的萃取率的萃取率,得得（meanSD）meanSD）为为（83.43.1）%（83.43.1）%。

（44）检出限）检出限:

以以33倍信噪比计算检出限倍信噪比计算检出限,得本法的检出得本法的检出限为限为55g/Lg/L。

（5）5）回收率回收率:

由工作曲线计算由工作曲线计算LRZLRZ的质量浓度及其回收的质量浓度及其回收率率,得得（meanSD）meanSD）为为（103.35.1）%（103.35.1）%。

5.5.尿液检测尿液检测:

志愿者口服志愿者口服LRZ2LRZ2后后,于于3232小时小时内收集其排泄的尿液进行检测内收集其排泄的尿液进行检测,LRZLRZ于于99hh达尿达尿中最高浓度为中最高浓度为444444/L,L,检测结果表明检测结果表明,本方本方法适合于麻醉后犯罪案件中的检测要求。

法适合于麻醉后犯罪案件中的检测要求。

返回二、手性药物的高效液相色谱法二、手性药物的高效液相色谱法

（一）手性药物拆分机理

（一）手性药物拆分机理为了使对映体转化为化学和物理性质不同的非对映为了使对映体转化为化学和物理性质不同的非对映体，就要提供一种手性源，使待拆分的对映异构体（样体，就要提供一种手性源，使待拆分的对映异构体（样品）、手性作用物（如固定相）和手性源之间形成一个品）、手性作用物（如固定相）和手性源之间形成一个非对映异构分子的络合物。

在对映体拆分理论中颇为流非对映异构分子的络合物。

在对映体拆分理论中颇为流行的是行的是“三点手性识别模式三点手性识别模式”。

（二）手性

（二）手性HPLCHPLC拆分法的类型拆分法的类型直接法直接法：

柱前手性衍生化法：

柱前手性衍生化法间接法间接法：

手性流动相拆分法、手性固定相拆分法：

手性流动相拆分法、手性固定相拆分法11柱前手性衍生化法：

对映体混合物以手性试剂作柱柱前手性衍生化法：

对映体混合物以手性试剂作柱前衍生化，形成非对映体，然后以常规（偶见手性）固前衍生化，形成非对映体，然后以常规（偶见手性）固定相分离。

定相分离。

对手性衍生化试剂的要求：

高光学纯度。

常用的手性衍生化试剂：

羧酸衍生物类、胺类、异硫氰常用的手性衍生化试剂：

羧酸衍生物类、胺类、异硫氰酸酯类、异氰酸酯类、萘衍生物类、光学活性氨基酸类、酸酯类、异氰酸酯类、萘衍生物类、光学活性氨基酸类、固相衍生化试剂。

固相衍生化试剂。

22手性流动相拆分法（手性洗脱法或手性流动相添手性流动相拆分法（手性洗脱法或手性流动相添加剂法）：

将手性试剂加入流动相中，手性添加剂与加剂法）：

将手性试剂加入流动相中，手性添加剂与样品形成手性络合物。

样品形成手性络合物。

常用的手性添加剂：

配基交换型手性添加剂、环糊精常用的手性添加剂：

配基交换型手性添加剂、环糊精类添加剂、手性离子对络合剂类添加剂、手性离子对络合剂33手性固定相拆分法：

将手性选择器（如手性流动相手性固定相拆分法：

将手性选择器（如手性流动相添加剂）固着于多种基质上而制成手性固定相。

迄今添加剂）固着于多种基质上而制成手性固定相。

迄今为止，尚没有一种通用型的手性柱，需要根据化合物为止，尚没有一种通用型的手性柱，需要根据化合物的分子结构来选择合适的手性柱。

的分子结构来选择合适的手性柱。

常用的手性固定相常用的手性固定相：

PirklePirkle型手性固定相、蛋白质类型手性固定相、蛋白质类手性固定相、环糊精类手性固定相。

手性固定相、环糊精类手性固定相。

（三）应用（三）应用11对某些手性药物进行对映体的纯度检查；

对某些手性药物进行对映体的纯度检查；

22生物体液中药物对映体的分离分析研究可探生物体液中药物对映体的分离分析研究可探索血药浓度与临