微生物的遗传与育种_精品文档PPT文件格式下载.ppt

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,微生物的遗传性和变异性的特点,个体易于变异比表面积大便于建立纯系,第二节遗传变异的物质基础,一、遗传物质基础是核酸,二、DNA的分子结构和复制,三、遗传信息的传递,四、遗传物质的存在形式,一、遗传物质的基础是核酸,1、转化实验2、噬菌体的感染实验3、病毒的重建实验,1、转化实验,2、噬菌体感染实验,用含32PDNA（核心）的噬菌体作感染实验,用含35S蛋白质（外壳）的噬菌体作感染实验,3、病毒的重建实验,TMV重建实验示意图（粗线箭头表示遗传信息的去向）,二、DNA的分子结构和复制,三、遗传信息的传递,DNADNARNA蛋白质,复制,转录,（一条链转录）,转译,tRNA,四、遗传物质的存在形式,1、染色体2、质粒3、基因4、遗传密码,1、染色体,DNA几乎全部集中在染色体上,原核生物：

只有拟染色体，DNA不与蛋白质结合，外无核膜，许多原核微生物只有一个单独的DNA分子（也叫一个染色体）。

真核生物：

DNA和碱性蛋白结合，构成染色体，在染色体外包一层膜，叫核膜，形成真核。

2、质粒,化学本质是DNA细菌质粒的特点：

自主复制,转移性,质粒的不相容性,基因操作中的重要工具,3、基因,基因也可称为顺反子或作用子，遗传学中将生物体内决定遗传和变异的最主要隐私称为遗传因子或基因，物质基础是DNA，是遗传物质结构和功能单位基因代表决定某种蛋白质的分子结构的相应的一段DNA。

一个菌株的遗传型（基因型）就是它的DNA上碱基特定的排列顺序。

4、遗传密码,遗传密码就是指DNA链上各个核苷酸的特定排列顺序。

每个密码子（codon）是由3个核苷酸顺序所决定的，它是负载遗传信息的基本单位。

各种生物都遵循着一套共同的密码。

由于DNA上的三联密码子要通过转录成mRNA密码后才能与氨基酸相对应，因此，三联密码子一般都用mRNA上的3个核苷酸顺序来表示,第三节基因突变和诱变育种,一、基因突变二、基因突变的类型三、诱变育种,一、基因突变,基因突变就是生物体出现与亲代不同遗传性状的现象，即生物体的表型或基因型发生了可遗传的变化。

二、基因突变的类型,1、形态突变型2、生化突变型3、条件致死突变4、致死突变,1）营养缺陷型突变2）抗性突变型3）抗原突变型,三、微生物诱变育种,与诱变有关的几个问题

（1）出发菌株

（2）菌悬液的制备a宜采用处于对数生长期的生长菌。

b菌悬液的浓度c菌悬液的配制方法（3）诱变剂使用剂量的选择（4）诱变效应的测定,诱变育种的基本程序,原始菌株（出发菌株）,纯化,细胞或孢子悬浮液制备,（活细胞计数）,诱变剂处理,中间培养,突变株分离,初筛,复筛,生产性能实验,诱变预备实验,离心收集菌体离心洗涤玻璃珠振荡分离过滤,诱变剂处理,1物理诱变剂有紫外线、X射线、射线、快中子、射线等2化学诱变剂有碱基类似物、体外化学诱变剂、移码突变剂等。

3紫外线照射的方法

（1）制备菌悬浮液用生理盐水或缓冲液配制。

（2）照射（3）筛选优良的突变株。

第四节,基因重组GeneRecombination,基因重组,凡把两个不同性状个体内的遗传基因转移到一起，进重新组合而形成新遗传型个体的现象，称基因重组。

一、真核微生物的基因重组育种,有性杂交制取单倍体孢子杂交分离,2）准性杂交育种选择亲本强制异合检出杂合二倍体促进变异和筛选高产菌株,二、原核微生物的基因重组育种,1、转化（Transformation）2、转导（Transduction）3、接合（Conjugation）,1、转化（Transformation）,受体直接吸收来自供体的DNA片段，并通过交换将它们组合到自己的基因组中，从而获得了供体菌的部分遗传性状的现象，称为转化。

转化后的受体菌称转化子（Transformant）。

转化全过程,转化受体菌的条件,可以在其细胞壁上吸附外源DNA可以让吸附的外源DNA进入细胞细胞内不存在破坏外源DNA的酶具备将外来DNA进行重组的酶系统,2、转导（Transduction）,通过噬菌体的媒介，把供体菌的部分DNA传递给受体菌的过程，称转导。

转导又分为:

普遍性转导局限性转导,普遍性转导（Generalizedtransduction）,少数噬菌体外壳蛋白误包细菌的DNA片断，形成了完全不含噬菌体本身的DNA转导噬菌体，称为普遍性转导。

局限转导（Restrictedtransduction）,局限转导：

有些噬菌体侵染宿主后并不导致宿主细胞的裂解，而是将噬菌体本身的DNA整合在宿主的染色体中，这种不引起宿主细胞裂解的噬菌体被称为温和噬菌体。

3、接合（Conjugation）,通过供体菌和受体菌完整细胞之间通过直接接触而传递大段DNA的过程，称为接合。

在细菌中，接合现象研究得最清楚的是大肠杆菌。

发现大肠杆菌有性别分化，决定它们性别的因子称为F因子（致育因子）。

F因子,一种在染色体外的小型独立的环状DNA，一般呈超螺旋状，具有自主的与染色体进行同步复制和转移到其他细胞中去的能力，此外，其中还带有一些对其生命活动关系较小的基因。

F因子的分子量为5x107u,三、原生质体融合技术,细胞融合技术是将遗传物质不同的两个细胞融合成一个新细胞的一钟技术。

1、选择具有遗传标记的新株2、原生质体制备a菌龄一般宜采用对数生长期的菌体。

b选择合适的酶系c酶的浓度d酶解温度epH值渗透压稳定剂,3、原生质体融合4、再生5、重组子的检出,第五节,基因工程GeneEngineering,一、载体和限制性内切酶,一）载体质粒载体噬菌体载体柯斯质粒载体YAC载体,二）限制性内切酶分离目的基因和使载体质粒DNA切开都需有酶的作用，这种酶称之为限制性内切酶。

（三）DNA连接酶将两个不同的DNA片断，一个片断是目的基因，另一个片断通常是作为运载载体的质粒DNA拼接起来，就需要连接酶的作用。

二、基因工程的基本操作步骤,1、目的基因的取得

（1）化学合成基因

（2）基因文库的构建及目的基因的分离（3）聚合酶链式反应技术获得基因（4）逆转录法获得真核目的的基因,2、载体的选择和目的基因与载体DNA的体外重组3、将重组DNA分子转移导适当的受体细胞内4、重组载体引入受体细胞5、筛选重组DNA分子的受体细胞克隆,基因工程的操作步骤示意图,第六节,生产菌种的保存,一、生产菌种的保藏,Hesseltine等对生产菌提出了一下的要求菌株在遗传上必须稳定在相当长时间内菌株易于保存菌株介入种子罐后能迅速旺盛的繁殖菌株必须式纯培养菌株应能受诱变剂作用而发生突变,二、菌种保藏的基本原理,首先要优良或者标准的纯种最好式采用它们的休眠体根据微生物的理化特性，人工的创造适合于休眠的环境条件,三、常用保藏方法,定期移栽保藏方法矿油封藏法砂土保藏法土壤保藏法滤纸保藏法麸皮保藏法梭氏真空干燥保藏法液氮保藏法冷冻真空干燥保藏法,四、菌种的退化与复壮,微生物的变异是绝对的，而它的稳定性则是相对的；

退化性的变异是经常的，而进化性的变异却是个别的。

如果变异朝着不利于生产的方向发展，则菌种就退化了。

菌种的退化,1.常见的退化菌落和细胞形态的变化生产性能的下降对生长环境的适应能力的减弱,退化的主要原因,有关基因的自发突变育种后未经分离纯化培养条件的改变,防止退化的措施,控制传代次数采用有效的菌种保藏方法利用不同的细胞进行接种传代选择适合的培养条件,复壮,分离纯化寄生复壮遗传育种,第七节,菌种保藏机构,比较著名的保藏机构有：

美国标准菌库（ATCC）美国农业部北方地区研究中心菌（NRRL）荷兰真菌菌种收藏中心（CBS）英国国立工业细菌菌库（NCIB）,