Bioedit操作指南_精品文档PPT资料.pptx
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DNA序列基本操作序列基本操作1.1.目的目的:
纯菌种16SrRNA,利用Sanger方法双端测序,然后检查测序质量,将双端测序的序列拼接成一条完整的序列,利用这个长序列去与数据库比对,判断这个序列最可能是从哪个微生物来的。
2.2.具体操作过程具体操作过程:
以一个纯菌种的16SrRNA测序为例,练习序列拼接(assembly).用Sanger方法,从两端测序,引物为27F和1492R。
正向引物27F测得的序列反向引物1492R测得的序列拼接拼接(assembly)OverlapContig第一步第一步:
Sanger测序下机文件为.abi文件,可以用Bioedit打开查看测序质量。
峰型好的碱基质量较好,把质量好的碱基部分提取出来,存成fasta文件。
具体操作流程具体操作流程:
File-Open-找到文件Sanger_Seq27f.abi。
出现两个界面,根据测序峰确定高质量测序区段;
然后双击另一个界面的文件名字,即出现一个新的编辑框。
将质量差的碱基区域去掉,然后另存为一个.fasta文件,存成seq27F.fas。
另一个文件存为seq1492R.fas.Biedit软件的应用介绍:
DNA序列基本操作序列基本操作Biedit软件的应用介绍:
DNA序列基本操作序列基本操作第二步第二步:
将27F和1492R测得的序列都整理成质量好的.fasta文件后,将这两个文件拼接成一个长的contig。
操作如下操作如下:
file-newalignment-file-import-sequencealignmentfile-同时选择Seq27F.fas和seq1492R.fas-file-saveas27F+1492R.fas-file-open27F+1492R.fas-点击选择两个文件名-accessoryapplications-CAPassemblycontigprogram-runapplication-enter-随即产生了contig序列,delete原始的序列(seq27F.fas和Seq1492R.fas),给contig命名,另存为Seq27F+1492R_contig.fas。
第三部第三部:
将contig序列拷贝到NCBIBlast中去比对,看与数据库中哪些序列最相近。
RDP平台简单介绍:
分类平台简单介绍:
分类1.1.目的目的:
利用RDP平台中的分类功能,对测定的高通量测序数据进行系统进化分类。
得到微生物群落的组成信息:
门、纲、目、科、属、种。
RDPpipelineClassifiertestdriveSelectyourfiletouploadSubmitforClassification(Samplefilename:
Seq100)