常见血液肿瘤FISH检测小册Word格式.docx
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免疫组化（IHC），流式细胞（FCM）
●细胞遗传学检查（Cytogenetics）
核型分析，荧光原位杂交（FISH）
●分子生物学检查（Molecular）
PCR，DNA测序
三.FISH技术的作用及优势
FISH作为一项很重要的分子遗传学检测技术，在血液肿瘤的诊断中有很大的作用，得到了NCCN等国内外各大血液肿瘤诊疗指南的认可和建议。
目前与血液肿瘤相关的FISH探针有接近100种，常用的就有60种左右，包括急慢性白血病、骨髓增生异常综合症（MDS）、多发性骨髓瘤（MM）、淋巴瘤等多种血液肿瘤。
FISH技术的相对优势：
●FISH技术更敏感，可检测出核型分析检测不出的细微缺失或易位，如MDS中的5q缺失综合征；
●FISH技术不需要中期分裂相细胞，而核型分析需要培养时间较长且需要较高的操作要求；
●FISH技术是在细胞形态的基础上进行结果判读，可有效地降低假阴性或假阳性的风险，而PCR技术经过倍增扩增，不能在形态的基础上判读，对实验要求高，易产生假阴性或假阳性。
四.常用的血液FISH检测探针
1
急性粒细胞白血病（AML）：
样本建议骨髓
□AML1/ETO融合基因（M2b分型）
□PML/RARA融合基因（M3分型）
□CBFB基因断裂（M4分型）
□KMT2A（MLL）基因断裂（预后差，治疗失败风险高）
□其他：
□8号染色体、□CBFB/MYH11基因融合、□RARA基因断裂、□5q缺失、□7q缺失、□EVI基因断裂
2
慢性粒细胞白血病（CML）：
样本优先骨髓
□BCR/ABL（DF）融合基因检测（指导格列卫用药）
□嗜酸性粒细胞增多症（格列卫作用靶标）：
□PDGFRA基因断裂、□PDGFRB基因断裂、□FGFR1基因断裂
□BCR/ABL（ES）、□BCR/ABL（SF）、□i（17q）、□ASS基因缺失
3
急性淋巴细胞白血病（ALL）：
□ETV6（TEL）/AML1融合基因（预后较好，但易复发）
□TCF3（E2A）基因断裂（标准化疗后易早期复发）
□BCR/ABL融合基因（易迅速复发，对挽救性化疗反应不佳）
□儿童急性淋巴细胞白血病染色体及基因异常（4、10、17、TEL/AML1、KMT2A基因断裂、BCR/ABL（DF），预后评估及治疗方案的选择）
□TCF3（E2A）/PBX1、□4、10、17；
□MYC基因断裂、□IGH基因断裂、□KMT2A基因断裂、□CDKN2A（P16）基因缺失
4
慢性淋巴细胞白血病（CLL）：
样本优先外周血或骨髓
□慢性淋巴细胞白血病染色体及基因异常（P53、RB1（13q14）、ATM（11q22）、D13S25（13q14）、12，预后评估及治疗方案的选择）
□DLEU1（13q14）、□P53、□ATM（11q22）、□MYC基因扩增、□6q、□TERC、□GLI、□12、□BCL2/IGH、□CCND3/IGH
5
骨髓增生异常综合症（MDS）：
□骨髓增生异常综合症染色体及基因异常（5q、7q、20q、8、X/Y，预后评估及治疗方案的选择）
□5q、□7q、□20q、□EGR1、□EVI1基因断裂、□X/Y
6
多发性骨髓瘤（MM）：
□多发性骨髓瘤染色体及基因异常（P53、1q21、RB1（13q14）、D13S319（13q14）、IGH，预后评估及治疗方案的选择）
□CCND1（BCL1）/IGH、□MAF/IGH、□FGFR3/IGH、□MAFB/IGH、□CCND3/IGH、□11q23及DLEU1、□P53、□15q22及6q21、□1q21及1p36、□IGH基因断裂
7
淋巴瘤：
样本建议骨髓或淋巴结穿刺
□MYC/IGH融合基因（辅助诊断伯基特淋巴瘤、高分级B细胞淋巴瘤的治疗）
□BCL2/IGH融合基因（辅助诊断滤泡性淋巴瘤）
□ALK基因断裂（辅助诊断间变性大细胞淋巴瘤，指导克唑替尼用药）
□CCND1（BCL1）/IGH融合基因（辅助诊断套细胞淋巴瘤，鉴别诊断MCL和CLL）
□IGH基因断裂（发生于多种类型的淋巴瘤中，与超过50种基因融合）
□MALT1基因断裂（辅助诊断粘膜相关淋巴组织淋巴瘤，指导HP化疗方案）
□BCL6基因断裂（DLBCL中预后较佳，指导治疗方案）
8
骨髓移植后嵌合状态监测（X、Y）
□X和Y染色体检测
五.常见血液肿瘤FISH探针介绍
血液肿瘤中常见FISH探针有四种类型，应用于基因融合、断裂、扩增和缺失检测。
检测类型
探针举例
所含靶标
正常信号
典型异常信号
基因融合
BCR/ABL（DF）融合基因检测探针
GSPBCR
GSPABL
基因断裂
IGH基因断裂检测探针
GSPIGH
基因扩增
MYC基因扩增检测探针
GSPMYC
CSP8
基因缺失
P53基因缺失检测探针
GSPP53
CSP17
注：
*红色标记表示该基因探针标记红色荧光素（R），荧光显微镜相应滤块下观察为红色信号点（某些参数滤块下显示为橙色信号）；
*绿色标记表示该基因探针标记了绿色荧光素（G），荧光显微镜相应滤块下观察为绿点信号点；
*黄色标记表示该基因探针包含一组分别标记了红、绿两种荧光素的探针组合，荧光显微镜单通道滤块下可观察到相应颜色信号点（绿色或红色信号点），双通道滤块下可观察到红绿相邻或重叠信号（融合，F）。
1.急性粒细胞白血病（AML）
常用FISH检测靶标：
AML1/ETO基因融合、PML/RARA基因融合、CBFB基因断裂、MLL基因断裂
●AML1/ETO融合基因检测—M2b分型的标志
1）辅助诊断：
AML1/ETO融合基因在M2患者中的发生率20%-40%，在M2b亚型中发生率高达90%，是M2b分型的标志，在M1和M4中少见。
2）判断预后：
AML1/ETO融合基因阳性是预后好的标志，患者对治疗反应佳，完全缓解率可达90%，5年无病生存可达50%-70%。
●PML/RARA融合基因检测—M3分型的标志
PML/RARA融合基因可见于95%以上的APL中，成为M3的一个特异标志，预后好，约占全部AML的9%。
2）指导用药：
全反式维甲酸（ATRA）和三氧化二砷能靶向降解PML/RARA融合蛋白，恢复野生型PML和RARA基因功能，解除其对基因转录的抑制，诱导细胞发生分化和凋亡，使APL得到有效治疗。
ATRA与化疗联合使用可使APL的完全缓解率达90%-95%，并可使70%以上的患者得到长期生存。
●CBFB基因断裂—M4E0特征性的遗传学改变
CBFB基因断裂重组是AML的特征性染色体异常，占总AML患者的5%-10%和23%的M4患者，通常见于AML-M4E0亚型，在M2，M5及M4（无嗜酸性粒细胞增多）中较少。
现在认为CBFB基因断裂重组是M4E0特征性的遗传学改变。
大多数CBFB基因断裂重组的AML患者对化疗敏感、预后较好。
●MLL基因断裂
在成人急性髓细胞白血病（AML）中，则主要见于M4/M5亚型。
除t（9；
11），t（10；
11）以外，大部分MLL重排白血病缓解率低，并且第一次缓解后极易复发，生存期短，预后很差。
在AML中单纯MLL断裂提示预后中等。
2.慢性粒细胞白血病（CML）
BCR/ABL基因融合
●BCR/ABL融合基因检测—CML诊断的“金标准”
t（9；
22）（q34；
q11）易位形成的BCR/ABL融合基因是CML的标志物，95%CML患者可检测出典型的t（9；
q11）易位，约5%的CML患者通过核型分析难以检测到Ph染色体，但可检测出融合基因存在，仍被归为Ph+CML分类。
对初诊患者进行BCR/ABL检测，可以进行酪氨酸激酶抑制剂受益人群筛查。
格列卫可用于治疗费城染色体阳性的慢性髓性白血病（Ph+CML）的慢性期、加速期或急变期。
3）疗效监测：
Ph染色体存在于CML的整个病程中，治疗缓解后，仍持续存在，只有消除Ph阳性克隆，才能达到最终治愈。
FISH可用于治疗期间患者体内BCR/ABL融合基因细胞量动态变化的检测，用于后续的治疗方案选择及药物使用效果评估。
3.嗜酸粒细胞增多症（HE）
PDGFRA基因断裂、PDGFRB基因断裂和FGFR1基因断裂
2008年WHO将具有PDGFRA、PDGFRB或FGFR1基因断裂异常，伴嗜酸性粒细胞增多的髓系和淋巴系肿瘤独立成一个新类“Myeloid/lymphoidneoplasmswitheosinophiliaassociatedwithrearrangementsofPDGFRA,PDGFRB,orFGFR1”。
这类患者具有PDGFRA基因重排、PDGFRB基因重排或FGFR1基因重排，即使不伴有BCR/ABL融合基因，依然对酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼（imatinib）治疗敏感，治疗后完全缓解率高。
4.急性淋巴细胞白血病（ALL）
ETV6（TEL）/AML1基因融合，TCF3（E2A）基因断裂，BCR/ABL基因融合，KMT2A（MLL）基因断裂及4、10、17号染色体数目异常
ALL中遗传学改变发生的频率可达80%-90%，遗传学变异较大，但大部分是特异性改变，与特定的形态学和免疫学表型有关。
ALL中遗传学改变主要是两种形式，一是染色体结构异常，二是染色体数目的异常。
●ETV6（TEL）/AML1基因融合
ETV6（TEL）/AML1融合基因在儿童ALL中的发生率高达20%-25%，是目前儿童ALL最常见的染色体重排。
大多数研究发现ETV6（TEL）/AML1阳性的儿童ALL治疗效果很好，5年EFS和总生存率达到89%和97%，是预后良好的指标之一。
●TCF3（E2A）基因断裂
约3%-5%的儿童ALL携带E2A基因断裂。
早期研究认为TCF3（E2A）/PBX1阳性的ALL患儿易发生早期复发，预后不佳，故曾将其作为高危因素之一。
核型分析容易导致20%-25%漏诊，而FISH可克服这一缺点。
●BCR/ABL基因融合
22）易位形
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