消毒剂消毒效果及有效期验证方案Word文档格式.docx
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75%乙醇
用于设备表面、器具与手消毒。
采用擦拭或喷洒方式
密闭保存7天
2
0、1%新洁尔灭溶液
用于地面、墙面、器具、清洁布、拖布与洁净鞋的消毒
采用擦拭或浸泡方式
3
2%甲酚皂
用于水池与地漏、地面的消毒
用于液封
备注
以上消毒剂浓度均为体积分数比。
1、3、作用对象一样的消毒剂每月轮换使用,避免表面微生物产生耐药菌株。
在利用消毒剂进行表面擦拭消毒过程中消毒剂的作用时间应不少于10分钟,利用消毒剂进行浸泡消毒的不少于5分钟。
1、4、为了确认消毒剂的消毒效力,通过实验室考察部分与现场考察部分分别进行验证。
实验室考察部分,定量悬浮试验法适用于浸泡或液封方式的消毒方法;
表面实验法适用于擦拭或喷洒方式的消毒方法。
洁净区设施表面材质有不锈钢、镀锌板及玻璃三种,故表面试验法选用不锈钢载片、镀锌板及玻璃载片模拟洁净区设施表面进行验证试验。
现场考察试验部分选择冻干车间的配液间(C级洁净区)、灌装间(A/B级洁净区)、灌装间操作人员手部消毒前与消毒后分别进行取样,测定其微生物数量。
1、5、A/B级洁净区使用的消毒剂需经0、22μm除菌过滤。
2、验证范围
本验证方案适用于本公司洁净区的墙面、天花板、门窗、机器设备、仪器、操作台、地漏、推车、桌椅等表面以及操作人员双手(手套)的消毒等。
3、验证目的
通过消毒剂消毒效果及有效期的确认,科学制订消毒程序,以保证各洁净级别的操作间及设备外表面、人员手部按照规定的消毒程序消毒能够达到消毒防止污染的效果。
4、验证参考文件
《药品生产验证指南》(2003版);
《医疗机构消毒技术规范》(2012年版);
《中国药典》(2010年版);
《药品GMP指南-无菌药品》、《现代医药工业微生物实验室质量管理与验证技术》。
5、验证小组名单
组长
姓名
职务/职称
部门
***
经理
质量部
成员
车间主任
生产部
QC主管
QC
QA主管
6、验证小组职责
7、验证内容
7、1、验证前参与实施验证的人员必须已经接受本方案的培训且考核合格。
见附表1。
7、2、验证前准备
7、2、1、菌种
7、2、1、1、试验微生物以金黄色葡萄球菌作为细菌繁殖体中化脓性球菌的代表;
大肠杆菌作为细菌繁殖体中肠道菌的代表;
白色念珠菌作为致病性真菌的代表。
在上述规定的菌、毒株的基础上,根据消毒剂特定用途或试验特殊需要,还可增选其她菌、毒株。
7、2、1、2、75%乙醇、2%甲酚皂为中效消毒剂,0、1%新洁尔灭为低效消毒剂,均不具备杀灭细菌芽孢功能,根据上述内容,本次验证所用菌种见下表:
序列号
类别
金黄色葡萄球菌
CMCC(B)26003
细菌
大肠埃希菌
CMCC(B)44102
4
白色念珠菌
CMCC(F)98001
真菌
7、2、1、3、可接受标准:
标准菌种必须来源可靠、来源可溯、保存方法与条件合适。
使用的标准菌种不能超过第五代。
7、2、1、4、应确认菌种名称、来源、代数,见附表2。
7、2、2、试剂及培养基
7、2、2、1、选用培养基见下表:
备注
营养琼脂培养基
121℃,15min灭菌备用
玫瑰红钠琼脂培养基
胰酪胨大豆琼脂培养基
7、2、2、2、稀释液、冲洗液:
0、9%无菌氯化钠溶液、pH7、0氯化钠-蛋白胨缓冲液。
7、2、2、3、可接受标准:
所有试剂、培养基的规格、数量与保存条件满足要求,且在有效期内;
脱水培养基呈流动粉末状,无结块,无潮解,且在有效期内。
7、2、2、4、试剂/培养基检查确认记录见附表3。
7、3、消毒剂配制:
按《清洁剂、消毒剂的配制与使用标准操作程序》进行消毒剂配制。
7、4、定量悬浮试验
7、4、1、目的:
0、1%新洁尔灭溶液、75%乙醇溶液、2%甲酚皂溶液消毒效力的确认(定量悬浮试验法)。
7、4、2、菌液制备:
取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌接种于营养肉汤培养基中,于30~35℃培养18~24h即得,培养后微生物浓度应不少于105cfu/ml。
取白色念珠菌接种于改良马丁液体培养基中,于23~28℃培养24~48h即得,培养后微生物浓度应不少于105cfu/ml。
7、4、3、将配制好的0、1%新洁尔灭溶液(或75%乙醇溶液或2%甲酚皂溶液)按9ml/支分注于27支无菌具塞试管中,按照“5分钟组”、“10分钟组”与“15分钟组”共3组每组9支,进行分组编号。
7、4、4、取供试菌液(105cfu/ml的金黄色葡萄球菌菌液,105cfu/ml的大肠埃希菌菌液,105cfu/ml的白色念珠菌菌液)1ml按照下表,分别接入到盛有9ml0、1%新洁尔灭溶液(或75%乙醇溶液或2%甲酚皂溶液)的试管中(已进行10倍稀释),轻轻摇动,混合均匀,并立即开始计时。
菌种名称
5分钟组
10分钟组
15分钟组
1ml/支,共3支
7、4、5、试验方法
分别在5分钟、10分钟与15分钟取接种细菌的消毒液,倾入过滤杯滤过,然后各用0、9%无菌生理盐水50ml清洗滤膜,滤过,重复用50ml0、9%无菌生理盐水的洗涤共3次。
取下滤膜,含细菌的膜放入营养琼脂平板内,含真菌的膜放入玫瑰红钠琼脂平板内,含菌膜面向上。
细菌于30-35℃的生化培养箱内培养3天,真菌于23-28℃的霉菌培养箱内培养5天。
培养后在明亮处,对平板上的菌落数进行计数,记录计数结果。
7、4、6、阳性对照
分别将105cfu/ml金黄色葡萄球菌菌液、105cfu/ml大肠埃希菌菌液、105cfu/ml的白色念珠菌菌液逐级稀释至浓度为10~100cfu/ml,取稀释菌液1ml于平皿中,倾注冷却至45℃营养琼脂培养基与玫瑰红钠琼脂培养基混匀,待凝固后于细菌于30-35℃的生化培养箱内培养3天,真菌于23-28℃的霉菌培养箱内培养5天。
培养结束后对平板上的菌落数进行计数,记录计数结果。
0、1%新洁尔灭溶液消毒效力确认记录见附表4
75%乙醇溶液消毒效力确认记录见附表5
2%甲酚皂溶液消毒效力确认记录见附表6
7、5、表面实验
7、5、1、目的:
由于75%乙醇溶液、0、1%新洁尔灭溶液要通过擦拭消毒,故选用不锈钢载片及玻璃载片进行表面试验法,确定其消毒效力就是否符合要求。
7、5、2、工作菌液制备同7、4、2、项下菌液制备。
7、5、3、染菌不锈钢载片制备:
将经灭菌的不锈钢载片平铺于无菌平皿内,滴加金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌与白色念珠菌含菌量为1×
108~5×
108CFU/ml的菌液0、1ml,并均匀涂布于整个载体表面。
滴染菌液后,载片置超净工作台晾干后备用。
每种菌平行制备两个染菌不锈钢载片;
染菌玻璃载片制备:
因培养皿的材质为玻璃,故用培养皿代替玻璃载片进行染菌试验。
进行菌液滴染前,用记号笔在培养皿菌液滴染面的背面画出染菌面积(50mm×
50mm),标注清晰。
菌液滴染操作同染菌不锈钢载片制备。
7、5、4、取样
7、5、4、1、试验组:
将消毒剂擦拭在制备好的染菌载片上,消毒剂作用时间分别为5min、10min、15min,不锈钢载片、镀锌载片及玻璃载片每个作用时间分别制备2个。
作用结束后,用接触碟取样(接触碟规格:
φ55mm,取样面积为25cm2)。
取金黄色葡萄球菌用大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟;
取大肠埃希菌用大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟;
取样白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基接触碟。
接触碟取样方法:
打开接触碟盖,使无菌培养基表面与取样面直接接触,均匀按压接触碟底板,确保全部琼脂表面与取样面表面均匀接触10秒左右,盖上碟盖。
7、5、4、2、对照组:
对照组的活菌浓度同工作菌液的制备。
阴性对照:
用接触碟在已灭菌的载片上(未染菌片的载片)按压取样,操作同上。
每种载片及每种接触碟平行制备两份。
7、5、5、培养:
将取样金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌的接触碟倒置于30~35℃培养3天计数;
取样白色念珠菌的接触碟倒置于23~28℃培养5天计数计数。
7、5、6、结果计算:
计算试验组与对照组的活菌浓度
(CFU/ml),并换算为对数值(N),并按下式计算杀灭对数值:
杀灭对数值
(KL)=对照组平均活菌浓度的对数值(NO)-试验组活菌浓度对数值(NX)
7、5、7、可接受标准:
(KL)应不低于3个对数单位。
75%乙醇溶液、0、1%新洁尔灭溶液消毒效力确认(表面实验)见附表7。
7、6、消毒效力现场考察试验
7、6、1、目的:
确认消毒剂对相应设施的实际消毒效力。
7、6、2、操作:
生产车间岗位操作人员按照《洁净区操作间清洁标准操作程序》、《洁净区水池、地漏清洁标准操作程序》、《洁净区人员手部卫生清洁标准操作程序》、《洁净区清洁用具清洁标准操作程序》、《洁净区工作服清洁标准操作程序》进行清洁消毒。
分别选取如下试验现场:
7、6、2、1、冻干车间的配液间(C级洁净区)顶棚、墙面、地面、工作台面,地漏、水池;
7、6、2、2、冻干车间的灌装间(A/B级洁净区)顶棚、墙面、地面、工作台面、设备表面;
7、6、2、3、冻干车间灌装间(A/B级洁净区)操作人员手部;
7、6、2、4、冻干车间B级洁净区的工作鞋、清洁布、拖布。
7、6、3、取样检测
7、6、3、1、消毒15分钟后,由QC人员到试验现场,按照《冻干C线洁净区(室)表面微生物监测标准操作程序》进行洁净区表面微生物的取样检测;
7、6、3、2、用浸泡或液封方式(地漏、水池、工作鞋、洁净布、拖布)的采用无菌吸管取浸泡液或液封液1ml,于胰酪胨大豆琼脂培养基平板培养;
7、6、3、3、灌装间(A/B级洁净区)操作人员,采用75%乙醇进行手部消毒。
将配制好并经过0、22μm除菌过滤的75%乙醇盛装于喷壶中,灌装间操作人员在生产开始时进行手消毒,间隔5分钟、10分钟、15分钟、20分钟分别进行手指菌取样。
7、6、3、4、连续逐日测定,共测定3次。
记录测定结果。
7、6、4、可接受标准:
所监测的洁净区的微生物均符合各自的洁净级别要求。
洁净度级别
表面微生物
接触碟cfu/碟(设备、设施、工作服)
5指手套cfu/手套
A级
<1
B级
5
C级
25
——
D级
50
75%乙醇溶液消毒后试验现场表面微生物检测记录见附表8
0、1%新洁尔灭溶液消毒后试验现场表面微生物检测记录见附表9
2%甲酚皂溶液消毒后试验现场表面微生物检测记录见附表10
75%乙醇用于手消毒效果实验记录见附表11
7、7、消毒剂储存有效期确认试验
7、7、1、目的:
通过该试验