细胞生物学实验B343022实验教学大纲Word文档格式.docx
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动物细胞培养及细胞融合；
植物组织培养等基本实验操作技术。
10.3教学目的：
培养学生实际动手能力及观察问题和解决问题的能力，同时掌握和初步了解细胞生物学实验的基本技术和方法，如涂片、铺片、徒手切片、细胞传代等，并且进行创新实验的设计。
11．学生应掌握的实验技术及实验能力
通过本实验课程，学生应熟练掌握血涂片的制备法，小鼠肠系膜铺片法；
徒手切片法；
细胞活体染色技术；
石蜡切片的制作技术及特征性染色方法等基本原理及操作技术；
掌握荧光显微镜的使用；
掌握动物细胞培养及细胞融合、细胞凋亡、细胞生理性实验；
植物组织培养及植物原生质体的分离、融合、体细胞杂交、细胞器的分级分离等基本原理及操作技术。
12．开设实验项目
徒手切片、石蜡切片、冷冻切片的制作技术实验项目，包括徒手切片操作技巧，制作出易于观察细胞形态及细胞组成成分的切片；
包括切片机的操作要领，切片的制作技巧，制作出符合HE染色、PAS染色、Feulgen染色的石蜡切片、冷冻切片。
细胞培养无菌操作技术实验项目，包括无菌操作台、臭氧发生器、二氧化碳培养箱的使用及维护保养技术；
包括培养基的配制及灭菌的方法；
包括细胞室处理及检测技术。
细胞的冻存及复苏技术实验项目，包括程序降温仪、细胞冻存盒、液氮罐的使用，包括细胞冻存、细胞复苏的注意事项，包括细胞冻存及复苏技术。
植物组织培养无菌操作及观察技术实验项目，包括植物组织培养所需培养基的配制，包括培养时无菌操作，培养过程中及培养结果的观察，包括植物组织培养无菌操作及观察技术。
徒手切片、装片、涂片的制作及细胞结构的观察实验项目，主要实验内容包括血涂片的制备；
红细胞及各种白细胞的形态观察；
显微镜测微尺的使用；
植物细胞的基本结构观察；
细胞后含体的观察和鉴别；
小鼠肠系膜铺片；
花生、向日葵徒手切片及细胞中脂类的染色，脂肪显示技术；
中性红染液染小麦或黄豆幼根根尖液泡系；
詹纳绿B溶液染人口腔粘膜上皮细胞线粒体；
线粒体、液泡系的活细胞术。
石蜡切片的制备及细胞的染色观察实验项目，主要实验内容包括制作石蜡切片，HE染色观察；
PAS反应，观察多糖在细胞中的移动；
Feulgen染色，观察DNA染色结果。
细胞器的荧光标记技术实验项目，主要实验内容包括荧光显微镜的使用；
罗丹明标记的鬼笔环肽染色；
超声波法制备脂质体；
冻融法制备脂质体；
冷冻干燥法制备脂质体；
脂质体转染技术。
植物组织培养、细胞悬浮培养及原生质体的分离培养实验项目，主要实验内容包括植物组织培养；
植物细胞的悬浮培养；
植物原生质体分离和培养；
PEG方法诱导植物原生质体融合；
根据亲本原生质体的形态标志来鉴别杂种细胞。
电镜制片技术实验项目，主要实验内容包括超薄切片制作；
扫描电子显微镜样品制备。
免疫胶体金技术实验项目，主要实验内容包括制备胶体金，标记山羊抗鼠Ig抗体并检测效果。
动物细胞的融合实验项目，主要实验内容包括制备细胞悬液；
50％PEG溶液进行细胞融合；
詹纳斯绿染色观察细胞融合的现象。
动物细胞传代与原代培养实验项目，主要实验内容包括细胞的消化分散；
细胞计数；
传代细胞培养；
原代细胞培养；
细胞冻存及复苏；
小鼠解剖及所需组织分离粉碎处理。
细胞器的分离与鉴定实验项目，主要实验内容包括细胞器的分级分离；
玉米线粒体的分离与观察；
观察离体叶绿体对染料的还原作用；
制备大鼠肝细胞匀浆；
差速离心细胞器；
培育玉米种子芽；
分离制备收集存放线粒体；
制备叶绿体并对分离物进行鉴定。
细胞生理性质实验项目，主要实验内容包括制备羊血细胞悬液及低渗溶液；
研究红细胞的渗透性；
进行小鼠实验前处理及小鼠腹腔注射血红细胞，于显微镜下观察小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象。
细胞凋亡过程中DNA及蛋白检测实验项目，主要实验内容包括诱导肿瘤细胞凋亡，提取凋亡细胞中的总蛋白，利用双向电泳检测其种类，利用流式细胞仪检测细胞凋亡过程。
利用RT-PCR技术检测细胞中β-actin的表达实验项目，主要实验内容包括细胞培养；
总RNA提取；
进行总RNA定量，cDNA合成，PCR扩增及电泳检测。
哺乳动物早熟染色体凝聚诱导实验项目，主要实验内容包括诱导有丝分裂期及间期细胞进行细胞融合。
设计实验项目，主要实验内容包括
（1）各种理化因素对染色体的致畸作用；
（2）生物活性物质对巨噬细胞吞噬作用的影响；
（3）多糖对淋巴细胞转化的影响；
（4）保肝药物对肝脏细胞的的保护作用；
（5）环境因素对细胞内多糖，核酸的影响。
学生在以上项目中自选一项，通过自行查阅资料、设计实验方案、填写设计实验申请书，由指导教师评阅。
开设实验项目一览表
实验项目编号
实验项目名称
实验
类型
实验性质
实验学时
每组人数
首次开出年月
34302201
徒手切片、石蜡切片、冷冻切片的制作技术
验证性
必做
4
1
201309
34302202
细胞培养无菌操作技术
34302203
细胞的冻存及复苏技术
34302204
植物组织培养无菌操作及观察技术
34302205
徒手切片、装片、涂片的制作及细胞结构的观察
综合性
选做
199303
34302206
石蜡切片的制备及细胞的染色观察
26
199903
34302207
细胞器的荧光标记技术
200403
34302208
植物组织培养、细胞悬浮培养及原生质体的分离培养
2
200103
34302209
电镜制片技术
201609
34302210
免疫胶体金技术
200303
34302211
动物细胞的融合
200503
34302212
动物细胞传代培养
6
200803
34302213
细胞器的分离与鉴定
200703
34302214
细胞生理性质实验
200909
34302215
细胞凋亡过程中DNA及蛋白检测实验
34302216
利用RT-PCR技术检测细胞中β-actin的表达
201009
34302217
哺乳动物早熟染色体凝聚诱导
201109
34302218
设计实验
设计性
13．实验教材或指导书或主要参考资料
1）滕利荣等，生物学基础实验教程Ⅰ（第三版），科学出版社，2008年。
2）王金发，何炎明主编，细胞生物学实验教程，科学出版社，2005年；
3）辛华，细胞生物学实验，北京，科学出版社，2001年；
4）李素文，细胞生物学实验实验指导，北京，高等教育出版社/施普林格出版，2001年。
14．考核要求、考核方式及成绩评定标准
14.1考核要求：
以培养学生的科学态度、科学思维和实验操作能力为前提，注重训练学生的独立动手能力、思考能力，发现问题、分析问题和解决问题的能力，实验设计能力及创新能力，教师应及时、客观、公正、如实评价每名学生实验情况及评阅试卷、实验报告和设计实验。
14.2考核方式：
采取考核与考试相结合的方式综合评定实验成绩，按百分制方式计分。
14.3成绩评定标准：
根据生物基础实验教学中心制定的《学生实验成绩考评方法》进行评定。
实验习惯成绩，10%；
预习考试成绩，10%；
实验操作成绩，40%；
实验报告成绩，20%；
设计实验成绩，20%。
15．执笔人
张桂荣教授
费晓方教授
黄宜兵副教授
苏维恒讲师
16．制定日期
20131015
17．审核人
18．审核日期
19．学院审定程序说明
2013年10月10日接到学校通知后成立《生命科学学院实践教学大纲（2013版）》修订专项工作组并进行前期筹备工作。
2013年10月14日至2013年10月16日各门课程梯队召开《生命科学学院实践教学大纲（2013版）》修订工作会议，分配修订任务。
2013年10月21日前各门课程梯队提交《生命科学学院实践教学大纲（2013版）》修订稿。
2013年10月25日生命科学学院教学委员会召开第一次会议审议《生命科学学院实践教学大纲（2013版）》修订稿并提出整改意见。
2013年10月26日至10月28日各门课程梯队按照“整改意见”进行整改。
2013年10月30日生命科学学院教学委员会召开第二次会议审定通过《生命科学学院实践教学大纲（2013版）》。
20．学院审定日期
20131030
细胞生物学实验B（343022）实验项目卡1
No
字段名
填写内容
课程名称
课程编号
3
5
网络实验
7
计划学时数
8
9
实验目的
掌握徒手切片操作技巧，制作出易于观察细胞形态及细胞组成成分的切片；
通过掌握切片机的操作要领，切片的制作技巧，制作出符合HE染色、PAS染色、Feulgen染色的石蜡切片、冷冻切片。
10
实验内容
徒手切片、石蜡切片、冷冻切片的制作技术，徒手切片操作技巧，制作出易于观察细胞形态及细胞组成成分的切片；
使用切片机的操作要领，切片的制作技巧，制作出符合染色需求的石蜡切片、冷冻切片。
11
实验原理
植物细胞包括细胞壁、原生质体两部分，原生质体包括细胞膜、细胞质和细胞核三部分。
根据细胞的结果与生命活动的方式，可以把细胞分成原核细胞和真核细胞两大类。
12
实验类型
1.演示性□；
2.验证性；
3.综合性□；
4.设计性□；
5.研究性□。
13
实验者层次
本科生
14
实验仪器设备
显微镜40台，冰冻切片机4台。
15
实验套数
40
16
开出时间
17
教学单位名称
18
教学单位编号
1113
19
实验单位名称
20
实验中心编号
111301
21
实验地名称
普通生物学基础实验室
22
实验地编号
唐敖庆楼C区335,358
23
一次性材料品名
盖玻片3片，土豆0.01个。
24
一次性材料
2元
25
面向专业
实验项目卡制
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