核酸的生物合成要点及练习Word文档格式.docx

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通过14N和15N标记大肠杆菌实验证实了半保留复制。

1．复制的起始点与方向

DNA分子复制时，在亲代分子一个特定区域内双链打开，随之以两股链为模板复制生成两个子代DNA双链分子。

开始时复制起始点呈现一叉形（或Y形），称之为复制叉。

DNA复制要从DNA分子的特定部位开始，此特定部位称为复制起始点（originofreplication），可以用ori表示。

在原核生物中复制起始点常位于染色体的一个特定部位，即只有一个起始点。

真核生物的染色体是在几个特定部位上进行DNA复制的，有几个复制起始点的。

酵母基因组与真核生物基因组相同，具有多个复制起始点。

复制的方向可以有三种不同的机制。

其一是从两个起始点开始，各以相反的单一方向生长出一条新链，形成两个复制叉。

其二是从一个起始点开始，以同一方向生长出两条链，形成一个复制叉。

其三是从一个起始点开始，沿两个相反的方向各生长出两条链，形成两个复制叉。

2．DNA聚合反应有关的酶及相关蛋白因子

DNA的合成是以四种三磷酸脱氧核糖核苷为底物的聚合反应，该过程除了需要酶的催化之外，还需要适量的DNA为模板，RNA（或DNA）为引物和镁离子的参与。

催化这个反应的酶也有多种：

DNA聚合酶、RNA引物合成酶（即引发酶）、DNA连接酶、拓扑异构酶、解螺旋酶及多种蛋白质因子参与。

3．DNA的复制过程

DNA的复制按一定的规律进行，双螺旋的DNA是边解开边合成新链的。

复制从特定位点开始，可以单向或双向进行，但是以双向复制为主。

由于DNA双链的合成延伸均为5′→3′的方向，因此复制是以半不连续的方式进行，即其中一条链相对地连续合成，称之为领头链，另一条链的合成是不连续的，称为随后链。

在DNA复制叉上进行的基本活动包括双链的解开；

RNA引物的合成；

DNA链的延长；

切除RNA引物，填补缺口，连接相邻的DNA片段。

（二）逆向转录

在逆转录酶作用下，以RNA为模板，按照RNA中的核苷酸顺序合成DNA，这与通常转录过程中遗传信息流从DNA到RNA的方向相反，故称为逆向转录。

逆转录酶需要以RNA（或DNA）为模板，以四种dNTP为原料，要求短链RNA（或DNA）作为引物，此外还需要适当浓度的二价阳离子Mg2+和Mn2+，沿5′→3′方向合成DNA，形成RNA-DNA杂交分子（或DNA双链分子）。

逆转录酶是一种多功能酶，它除了具有以RNA为模板的DNA聚合酶和以DNA为模板的DNA聚合酶活性外还兼有RNaseH、DNA内切酶、DNA拓扑异构酶、DNA解链酶和tRNA结合的活性。

几乎所有真核生物的mRNA分子的3′末端都有一段多聚腺苷酸。

当加入寡聚dT作引物时，mRNA就可以成为逆转录酶的模板，在体外合成与其互补的DNA，称为cDNA。

（三）DNA突变

DNA突变是指DNA的碱基顺序发生突然而永久性地变化，从而影响DNA的复制，并使DNA的转录和翻译也跟着改变，表现出异常的遗传特征。

DNA的突变可以有几种形式：

（1）一个或几个碱基对被置换；

（2）插入一个或几个碱基对；

（3）一个或多个碱基对缺失。

置换和插入的变化是可逆的，缺失则是不可逆的。

最常见的突变形式是碱基对的置换。

嘌呤碱之间或嘧啶碱之间的置换称为转换，嘌呤和嘧啶之间的置换称为颠换。

突变有自发突变和诱发突变。

在DNA的合成中，自发突变的机率很低，大约每109个碱基对发生一次突变；

各种RNA肿瘤病毒具有很高的自发突变频率。

诱发突变可以由物理因素或化学因素引起，物理因素如电离辐射和紫外光等均可以诱发突变。

化学因素的诱变，如脱氨剂和烷化试剂均可诱发突变。

亚硝酸为强脱氨剂，可使腺嘌呤转变为次黄嘌呤，鸟嘌呤转变为黄嘌呤，胞嘧啶转变为尿嘧啶，而导致碱基配对错误。

烷化剂如硫酸二甲酯（DMS）可使鸟嘌呤的N7位氮原子甲基化，使之成为带一个正电荷的季铵基团，减弱N9位上的N-糖苷键，至使脱氧核糖苷键不稳定，发生水解而丢失嘌呤碱，以后可被其它碱基取代，或引起DNA的链断裂。

（四）DNA损伤与修复

某些物理化学因子，如紫外线、电离辐射和化学诱变剂等，都能引起生物突变和致死。

因为它们均能作用于DNA，造成其结构和功能的破坏。

但细胞内具有一系列起修复作用的酶系统，可以除去DNA上的损伤，恢复DNA的正常双螺旋结构。

目前已经知道有四种修复系统：

光复活，切除修复，重组修复和诱导修复。

后三种机制不需要光照，因此又称为暗修复。

1．光复活

光复活的机制是可见光（最有效波长为400nm左右）激活了光复活酶，它能分解由于紫外线照射而形成的嘧啶二聚体。

光复活作用是一种高度专一的修复方式。

2．切除修复

又称为复制前修复。

所谓切除修复，即是在一系列酶的作用下，将DNA分子中受损伤部分切除掉，并以完整的那一条链为模板，合成出切去的部分，然后使DNA恢复正常结构的过程。

这是比较普遍的一种修复机制，它对多种损伤均能起修复作用。

参与切除修复的酶主要有：

特异的核酸内切酶、外切酶、聚合酶和连接酶。

3．重组修复

遗传信息有缺损的子代DNA分子可通过遗传重组而加以弥补，即从完整的母链上将相应核苷酸序列片段移至子链缺口处，然后用再合成的序列来补上母链的空缺。

此过程称为重组修复，因为发生在复制之后，又称为复制后修复。

参与重组修复的酶系统包括与重组有关的主要酶类以及修复合成的酶类。

重组基因recA编码的蛋白质，具有交换DNA链的活力。

recA蛋白被认为在DNA重组和重组修复中均起着关键的作用。

recB和recC基因分别编码核酸外切酶V的两个亚基，该酶亦为重组和重组修复所必需。

修复合成时需要DNA聚合酶和连接酶。

4．诱导修复

许多能造成DNA损伤或抑制复制的处理均能引起一系列复杂的诱导效应，称为应急反应（SOSresponse）。

SOS反应包括诱导出现的DNA损伤修复效应、诱变效应、细胞分裂的抑制以及溶原性细菌释放噬菌体等等。

（五）RNA的生物合成

以DNA的一条链为模板在RNA聚合酶催化下，以四种核糖核苷磷酸为底物按照碱基配对原则，形成3′→5′磷酸二酯键，合成一条与DNA链的一定区段互补的RNA链的过程称为转录。

RNA的转录起始于DNA模板的一个特定位点，并在另一位点处终止。

在生物体内，DNA的二条链中仅有一条链可作为转录的模板，这称为转录的不对称性。

用作模板的链称为反义链，另一条链称为有义链，因为有义链的脱氧核苷酸序列正好与转录出的RNA的核苷酸序列相同（只是T与U的区别），所以也称编码链。

但各个基因的有义链不一定位于同一条DNA链。

RNA的合成沿5′→3′方向进行（DNA模板链方向为3′→5′），5′未端为核糖核苷三磷酸，即5′位保留PPP。

在真核生物细胞里，转录是在细胞核内进行的。

合成的RNA包括mRNA、rRNA和tRNA的前体。

rRNA的合成发生在核仁内，而合成mRNA和tRNA的酶则定位在核质中。

另外叶绿体和线粒体也进行转录。

原核细胞中转录酶类存在于细胞液中。

1．RNA聚合酶

原核细胞大肠杆菌的RNA聚合酶研究的较深入。

这个酶的全酶由5种亚基（α2ββ′δω）组成，还含有2个Zn原子。

在RNA合成起始之后，δ因子便与全酶分离。

不含δ因子的酶仍有催化活性，称为核心酶。

δ亚基具有与启动子结合的功能，β亚基催化效率很低，而且可以利用别的DNA的任何部位作模板合成RNA。

加入δ因子后，则具有了选择起始部位的作用，δ因子可能与核心酶结合，改变其构象，从而使它能特异地识别DNA模板链上的起始信号。

真核细胞的细胞核内有RNA聚合酶I、II和III，通常由4～6种亚基组成，并含有Zn2+。

RNA聚合酶I存在于核仁中，主要催化rRNA前体的转录。

RNA聚合酶Ⅱ和Ⅲ存在于核质中，分别催化mRNA前体和小分子量RNA的转录。

此外线粒体和叶绿体也含有RNA聚合酶，其特性类似原核细胞的RNA聚合酶。

2．RNA的转录过程

RNA转录过程为起始位点的识别、起始、延伸、终止。

起始位点的识别：

RNA聚合酶先与DNA模板上的特殊启动子部位结合，σ因子起着识别DNA分子上的起始信号的作用。

在σ亚基作用下帮助全酶迅速找到启动子，并与之结合生成较松弛的封闭型启动子复合物。

这时酶与DNA外部结合，识别部位大约在启动子的-35位点处。

接着是DNA构象改变活化，得到开放型的启动子复合物，此时酶与启动子紧密结合，在-10位点处解开DNA双链，识别其中的模板链。

由于该部位富含A-T碱基对，故有利于DNA解链。

开放型复合物一旦形成，DNA就继续解链，酶移动到起始位点。

3．起始：

在起始位点的全酶结合第一个核苷三磷酸。

第一个核苷三磷酸常是GTP或ATP。

形成的启动子、全酶和核苷三磷酸复合物称为三元起始复合物，第一个核苷酸掺入的位置称为转录起始点。

这时σ亚基被释放脱离核心酶。

4．延伸：

从起始到延伸的转变过程，包括σ因子由缔合向解离的转变。

DNA分子和酶分子发生构象的变化，核心酶与DNA的结合松弛，核心酶可沿模板移动，并按模板序列选择下一个核苷酸，将核苷三磷酸加到生长的RNA链的3′-OH端，催化形成磷酸二酯键。

转录延伸方向是沿DNA模板链的3′→5′方向按碱基酸对原则生成5′→3′的RNA产物。

RNA链延伸时，RNA聚合酶继续解开一段DNA双链，长度约17个碱基对，使模板链暴露出来。

新合成的RNA链与模板形成RNA-DNA的杂交区，当新生的RNA链离开模板DNA后，两条DNA链则重新形成双股螺旋结构。

4．终止在DNA分子上有终止转录的特殊碱基顺序称为终止子（terminators），它具有使RNA聚合酶停止合成RNA和释放RNA链的作用。

这些终止信号有的能被RNA聚合酶自身识别，而有的则需要有ρ因子的帮助。

ρ因子是一个四聚体蛋白质，它能与RNA聚合酶结合但不是酶的组分。

它的作用是阻RNA聚合酶向前移动，于是转录终止，并释放出已转录完成的RNA链。

对于不依赖于ρ因子的终止子序列的分析，发现有两个明显的特征：

即在DNA上有一个15～20个核苷酸的二重对称区，位于RNA链结束之前，形成富含G-C的发夹结构。

接着有一串大约6个A的碱基序列它们转录的RNA链的末端为一连串的U。

寡聚U可能提供信号使RNA聚合酶脱离模板。

在真核细胞内，RNA的合成要比原核细胞中的复杂得多。

（六）转录后加工

在转录中新合成的RNA往往是较大的前体分子，需要经过进一步的加工修饰，才转变为具有生物学活性的、成熟的RNA分子，这一过程称为转录后加工。

主要包括剪接、剪切和化学修饰。

1．mRNA的加工在原核生物中转录翻译相随进行，多基因的mRNA生成后，绝大部分直接作为模板去翻译各个基因所编码的蛋白质，不再需要加工。

但真核生物里转录和翻译的时间和空间都不相同，mRNA的合成是在细胞核内，而蛋白质的翻译是在胞质中进行，而且许多真核生物的基因是不连续的。

不连续基因