第十九章临床常见标本的细菌学检验PPT格式课件下载.ppt

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24小时，运送培养基：

48小时2.苛养菌培养标本保温、保湿送检，“床头接种”第一节概述3.厌氧菌培养标本防干燥，避免接触空气。

4.安全运送注意安全防护高致病性传染病标本，按生物安全有关规定包装，由专人运送第一节概述（三）临床标本的处理核对标本与申请单信息常见标本处理方式组织：

无菌粉碎研磨后，加生理盐水制成悬液，接种体液：

3000r/mim离心10分钟后，接种。

棉拭子：

置运送培养基送检，避免污染。

粪便：

挑取带脓、血及黏液部分接种。

痰液：

检查标本是否有血液、脓液、颗粒、干酪样物等血液：

采集后立即增菌培养厌氧菌培养：

检查标本、运送方式是否适合厌氧培养，立即接种第一节概述二、培养基及培养方法的选择1.培养基选择恰当的培养基或组合第一节概述电热恒温培养箱电热恒温培养箱二氧化碳培养箱二氧化碳培养箱厌氧培养箱厌氧培养箱2.常用培养方法需氧培养、二氧化碳培养和厌氧培养需氧培养、二氧化碳培养和厌氧培养第一节概述三、细菌学检验的基本流程

（一）细菌学检验的基本程序第一节概述

（二）细菌学检验鉴定步骤1.标本性状观察颜色、是否粘稠、是否浑浊、是否脓性、是否带血等性状第一节概述革兰染色抗酸染色墨汁染色2.涂片检查不染色标本检查：

检查细菌的动力染色标本检查第一节概述3.细菌的分离培养目的：

得到单个纯菌落甄别污染菌方法观察菌落是否在划线上观察菌落是否与直接涂片染色结果相符观察菌落是否符合拟培养细菌的生长特点注意培养时间第一节概述4.细菌的鉴定选择细菌检验鉴定方法的原则选择有鉴定价值的试验：

两种细菌出现不同的结果选择有鉴定价值的试验：

两种细菌出现不同的结果选择快速、简易的试验：

如触酶、氧化酶选择快速、简易的试验：

如触酶、氧化酶综合考虑试验的敏感性和特异性综合考虑试验的敏感性和特异性第一节概述5.细菌对抗菌药物敏感性试验纸片扩散法纸片扩散法肉汤稀释法肉汤稀释法自动化仪器法自动化仪器法E-testE-test法等。

法等。

第一节概述返回本章内容四、细菌学检验报告原则标本周转时间（TAT）：

从标本采集起到临床医生收到检验结果的时间危急值：

指危及到患者生命健康安全的检验结果检验报告原则初报告预报告最终报告报告抗菌药物敏感性试验结果第一节概述一、血液及骨髓标本的细菌学检验

（一）标本的采集1.皮肤消毒严格执行三步法2.采血部位：

肘静脉肘动脉或股动脉采血婴幼儿采颈静脉血第二节临床常见标本的细菌学检验3.采集方法严格无菌操作4.采血量比例：

1:

10成人810ml/瓶儿童15ml/瓶婴儿12ml/瓶骨髓12ml/瓶第二节临床常见标本的细菌学检验疾病24小时内24小时后菌血症、败血症23份细菌性心内膜炎3份（12小时）2份不明原因发热23份2份5.采血时间和頻度6.标本的运送和保存立即送检，室温保存，切勿冷藏第二节临床常见标本的细菌学检验

（二）微生物学检验1.常见病原菌第二节临床常见标本的细菌学检验2.检验程序第二节临床常见标本的细菌学检验培养基性状改变疑似病原菌均匀混浊，指示剂变色革兰阴性杆菌微混浊，有绿色变化肺炎链球菌有菌膜，均匀混浊有绿色荧光铜绿假单胞菌上层澄清，下层有沉淀链球菌细胞层自上而下的溶血溶血性链球菌混浊、有胶冻状凝固现象葡萄球菌灰白色菌膜、培养基清晰枯草芽孢杆菌或类白喉棒状杆菌3.检验方法

（1）普通细菌的培养与鉴定增菌培养：

培养阳性指证及疑似菌列表培养阳性指证及疑似菌列表第二节临床常见标本的细菌学检验阳性培养瓶直接药敏试验分离培养涂片染色镜检细菌鉴定药敏试验报告报告报告阳性培养瓶处理阴性培养瓶处理于1218小时、第3天和第7天至少做3次盲传，7天无细菌生长报告阴性第二节临床常见标本的细菌学检验

（2）特殊细菌培养与鉴定脑膜炎奈瑟菌血液血液骨髓骨髓胰胨肉汤或胰胨肉汤或专业培养瓶专业培养瓶巧克力培养基巧克力培养基（35,510C02）鉴定：

葡萄糖、麦芽鉴定：

葡萄糖、麦芽糖发酵阳性糖发酵阳性药敏：

药敏：

CLSI标准标准脑膜炎奈瑟菌菌落脑膜炎奈瑟菌菌落第二节临床常见标本的细菌学检验

（2）特殊细菌培养与鉴定草绿色链球菌血液血液骨髓骨髓血琼脂平板血琼脂平板（35,510C02、需、需氧和厌氧环境）氧和厌氧环境）胰酶解酪蛋白胰酶解酪蛋白大豆肉汤培养瓶大豆肉汤培养瓶鉴定鉴定药敏试验药敏试验草绿色链球菌草绿色链球菌菌落7天培养无细菌生长，培养至第4周，仍无细菌生长则报告“经4周培养无草绿色链球菌生长”第二节临床常见标本的细菌学检验血液血液骨髓骨髓葡萄糖胆汁葡萄糖胆汁或胆盐肉汤或胆盐肉汤MACMAC、SSSS3535培养培养鉴定鉴定;

KIA;

KIA、生化反应、生化反应、血清学试验等血清学试验等药敏试验药敏试验血液血液骨髓骨髓肝浸液肉汤肝浸液肉汤肝浸液平板或血平板肝浸液平板或血平板（35,35,551010C02C02）涂片、生化鉴定涂片、生化鉴定血清学试验血清学试验伤寒沙门菌及其他沙门菌布鲁菌培养培养44周无细菌生长，报告周无细菌生长，报告“经经44周培养无细菌生长周培养无细菌生长”第二节临床常见标本的细菌学检验标本牛心脑浸液或肝浸液血平板或巧克力平板35、厌氧培养生化鉴定厌氧菌真菌：

真菌增菌肉汤增菌沙保弱培养基（25或37）菌落特征生化鉴定、报告L型细菌高渗液体培养基血琼脂平板和L型细菌培养基典型“油煎蛋”菌落返祖、鉴定第二节临床常见标本的细菌学检验4.结果报告采取分级和限时报告制度初报告：

将镜检结果电话通知主管医生预报告：

68小时内报告直接药物敏感结果最终报告：

报告细菌种属、药敏试验、结果评价及建议阴性报告第二节临床常见标本的细菌学检验（三）临床意义排除杂菌污染，从血液和骨髓标本中检出任何细菌都具排除杂菌污染，从血液和骨髓标本中检出任何细菌都具有临床意义有临床意义葡萄球菌是血液感染最常见的细菌葡萄球菌是血液感染最常见的细菌草绿色链球菌是亚急性心内膜炎的主要致病菌草绿色链球菌是亚急性心内膜炎的主要致病菌尿路、胆道、胃肠道炎症粘膜损伤引起的败血症以大肠尿路、胆道、胃肠道炎症粘膜损伤引起的败血症以大肠埃希菌多见埃希菌多见产单核李斯特菌主要引起新生儿败血症产单核李斯特菌主要引起新生儿败血症第二节临床常见标本的细菌学检验互动讨论草绿色链球菌属人体正常菌群，试分析从血液和痰液标本中分离出草绿色链球菌各有何临床意义？

第二节临床常见标本的细菌学检验二、脑脊液标本的细菌学检验

（一）标本的采集1.采集部位腰椎穿刺法2.采集量35ml3.标本的运送和保存15分钟内送检，最迟不能超过1小时。

疑似苛养菌感染时，应保温送检第二节临床常见标本的细菌学检验

（二）微生物学检验1.常见病原菌第二节临床常见标本的细菌学检验2.检验程序第二节临床常见标本的细菌学检验肺炎链球菌肺炎链球菌脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌3.检验方法

（1）涂片检查革兰染色第二节临床常见标本的细菌学检验抗酸染色墨汁负染色新型隐球菌结核杆菌第二节临床常见标本的细菌学检验

（2）分离培养与鉴定普通细菌标本标本血琼脂平板和巧克力平板（血琼脂平板和巧克力平板（3535，COCO22环境）环境）可疑菌落可疑菌落形态、生化试验及血清学试验、药敏试验形态、生化试验及血清学试验、药敏试验结核分枝杆菌标本标本罗罗-琴培养基或米氏琴培养基或米氏7H-107H-10培养基培养基3535温箱孵育温箱孵育可疑菌落可疑菌落鉴定鉴定第二节临床常见标本的细菌学检验真菌标本标本血平板或沙保弱培养基血平板或沙保弱培养基2525及及3737孵育孵育可疑菌落可疑菌落形态、镜检及生化反应等鉴定。

形态、镜检及生化反应等鉴定。

厌氧菌标本标本血平板、厌氧血琼脂平板和硫乙醇酸钠肉汤血平板、厌氧血琼脂平板和硫乙醇酸钠肉汤3535需氧、厌氧培养需氧、厌氧培养可疑菌落可疑菌落染色镜检及生化鉴染色镜检及生化鉴定、药敏试验定、药敏试验第二节临床常见标本的细菌学检验4.结果报告初报告：

报告标本直接涂片结果：

报告标本直接涂片结果预报告：

报告标本直接药敏试验结果：

报告标本直接药敏试验结果最终报告：

报告细菌种属、药敏试验、结果评价及建议：

报告细菌种属、药敏试验、结果评价及建议阴性报告阴性报告第二节临床常见标本的细菌学检验（三）临床意义脑膜炎奈瑟菌引起细菌性脑膜炎脑膜炎奈瑟菌引起细菌性脑膜炎结核分枝杆菌引起的结核性脑膜炎结核分枝杆菌引起的结核性脑膜炎真菌性脑膜炎最常见的病原体是新型隐球菌，白假丝酵真菌性脑膜炎最常见的病原体是新型隐球菌，白假丝酵母菌、球孢子菌好发于免疫功能低下和恶性疾病患者母菌、球孢子菌好发于免疫功能低下和恶性疾病患者第二节临床常见标本的细菌学检验三、尿液（泌尿生殖道）标本的细菌学检验

（一）标本的采集1.中段尿采集法2.导尿法3.膀胱穿刺采集法4.集尿法5.标本的运送和保存立即送检、及时接种室温不超过2小时，4不超过8小时淋病奈瑟菌感染尿液标本不能冷藏第二节临床常见标本的细菌学检验

（二）微生物学检验1.常见病原菌第二节临床常见标本的细菌学检验2.检验程序第二节临床常见标本的细菌学检验3.检验方法

（1）涂片检查普通细菌检查：

取沉淀涂片、染色、镜检：

取沉淀涂片、染色、镜检淋病奈瑟菌检查第二节临床常见标本的细菌学检验念珠菌检查结核分枝杆菌检查：

应与耻垢分枝杆菌相鉴别：

应与耻垢分枝杆菌相鉴别钩端螺旋体检查：

暗视野显微镜下，发现一串细密亮珠、两：

暗视野显微镜下，发现一串细密亮珠、两端呈钩状且沿纵轴旋转运动的螺旋体时，报告找到螺旋体端呈钩状且沿纵轴旋转运动的螺旋体时，报告找到螺旋体第二节临床常见标本的细菌学检验

（2）尿液细菌计数计算：

cfu/ml=菌落数稀释倍数或cfu/ml=意义革兰阳性球菌大于104cfu/ml,革兰阴性杆菌大于105cfu/ml，应考虑为泌尿系统感染第二节临床常见标本的细菌学检验淋球菌菌落淋球菌菌落（3）分离培养与鉴定普通细菌培养：

沉淀物：

沉淀物血平板和麦康凯平板血平板和麦康凯平板3535培养培养菌落观察菌落观察染色镜检、生化反应、抗菌药物染色镜检、生化反应、抗菌药物敏感试验敏感试验淋病奈瑟菌培养：

标本：

标本TMTM或或MTMMTM平板平板3535、551