WATERS液相色谱教程三四七最全PPT文档格式.ppt

WATERS液相色谱教程三四七最全PPT文档格式.ppt

《WATERS液相色谱教程三四七最全PPT文档格式.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《WATERS液相色谱教程三四七最全PPT文档格式.ppt（141页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

色谱纯（溶剂中的杂质含量尽可能低溶剂中的杂质含量尽可能低），并与填料相匹配并与填料相匹配缓冲液的缓冲液的pH值，在填料的允许范围值，在填料的允许范围（一般在一般在pH2-8）2-8）内内缓冲液（盐）的浓度不要太高缓冲液（盐）的浓度不要太高（100mM）流动相对样品的溶解度流动相对样品的溶解度调整有机溶剂和水的比例调整有机溶剂和水的比例最好用流动相溶样最好用流动相溶样2004WatersCorporation液相色谱对流动相的要求液相色谱对流动相的要求液相色谱仪器对流动相的要求液相色谱仪器对流动相的要求与检测器匹配与检测器匹配脱气脱气避免用含卤素离子的缓冲盐（不锈钢系统）避免用含卤素离子的缓冲盐（不锈钢系统）溶剂的粘度溶剂的粘度防止细菌的生长防止细菌的生长2004WatersCorporation流动相的脱气流动相的脱气流动相脱气的目的流动相脱气的目的使色谱泵的输液准确使色谱泵的输液准确输液量均匀准确，并且脉动减小输液量均匀准确，并且脉动减小保留时间及色谱峰面积的重现性提高保留时间及色谱峰面积的重现性提高提高检测的性能提高检测的性能防止气泡引起的尖峰防止气泡引起的尖峰基线稳定，信噪比增加基线稳定，信噪比增加溶剂的紫外吸收本底降低溶剂的紫外吸收本底降低保护色谱柱保护色谱柱减少死体积减少死体积防止填料的氧化防止填料的氧化2004WatersCorporation流动相脱气的方法流动相脱气的方法加热加热简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。

但容易简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。

但容易造成流动相组成的变化造成流动相组成的变化抽真空抽真空同上，一般在溶剂抽滤的同时，也有脱气的效果同上，一般在溶剂抽滤的同时，也有脱气的效果超声波振荡超声波振荡简单，但效果不够理想；

超声时间不要太长简单，但效果不够理想；

超声时间不要太长（1分钟分钟左右即可左右即可）通惰性气体（一般用氦气）通惰性气体（一般用氦气）可保持在线连续脱气，多用于低压梯度可保持在线连续脱气，多用于低压梯度在线脱气机在线脱气机（in-linedegasser）可保持连续脱气，多用于低压梯度可保持连续脱气，多用于低压梯度2004WatersCorporation流动相的保存流动相的保存有机溶剂流动相有机溶剂流动相:

室温下密封室温下密封,避光保存避光保存缓冲盐流动相缓冲盐流动相:

当日现配现用当日现配现用低温下密封保存低温下密封保存,一般不超过一般不超过33天天防止微生物生长防止微生物生长有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相:

低温密封保存低温密封保存防止有机相的挥发防止有机相的挥发选用适宜的容器选用适宜的容器2004WatersCorporation2星期1天1星期1小时新鲜配制5101520250分保存于聚乙烯瓶中的超纯水保存于聚乙烯瓶中的超纯水测试条件测试条件水样水样:

40mltraceenrichment2.0ml/min色谱柱色谱柱:

C18反相柱反相柱（Waters）梯度梯度:

线性线性100%水水100%乙腈乙腈波长波长:

254nm2004WatersCorporation1天1星期新鲜配制5101520250分保存于棕色玻璃瓶中的超纯水保存于棕色玻璃瓶中的超纯水测试条件测试条件水样水样:

254nm2004WatersCorporation色谱泵的排气操作色谱泵的排气操作色谱泵实验前，应先确认泵头内没有气体，如有色谱泵实验前，应先确认泵头内没有气体，如有气体要按以下步骤排气：

气体要按以下步骤排气：

将泵入口管吸滤头放入脱过气的流动相中将泵入口管吸滤头放入脱过气的流动相中打开泵及在线脱气机电源开关打开泵及在线脱气机电源开关将排液阀打开，或断开与色谱柱连接的管路将排液阀打开，或断开与色谱柱连接的管路设置流速到设置流速到6-9ml/min,排液阀出口有液流连续流出排液阀出口有液流连续流出必要时必要时（600（600泵泵）用用10ml注射器从泵入口注入流动相注射器从泵入口注入流动相对于对于600,2695600,2695四元梯度泵四元梯度泵,分别对所用各路溶剂进行分别对所用各路溶剂进行排气操作排气操作停止泵流速停止泵流速,关闭排液阀关闭排液阀,恢复断开的管路恢复断开的管路,备用备用注注:

泵排气后泵排气后,应输液稳定应输液稳定（系统压力脉动小系统压力脉动小,一般在几十一般在几十PsiPsi以内以内）,）,否则否则,需重做排气操作需重做排气操作2004WatersCorporationWaters515泵的前面板泵的前面板电源开关电源开关柱塞杆清洗孔柱塞杆清洗孔排液阀排液阀2004WatersCorporationWaters600泵的前面板泵的前面板柱塞杆柱塞杆清洗孔清洗孔电源开关电源开关排液阀排液阀泵控制器泵控制器泵体泵体泵灌注阀泵灌注阀2004WatersCorporationWaters2695分离单元分离单元溶剂瓶盘溶剂瓶盘注射器箱门注射器箱门柱温箱柱温箱溶剂配比单元溶剂配比单元进入门进入门检测器接液盘检测器接液盘前面板显示前面板显示屏和键盘屏和键盘软盘驱动器软盘驱动器样品室门样品室门溶剂输送单溶剂输送单元进入门元进入门2004WatersCorporation2695排气操作示意图排气操作示意图面板操作面板操作:

打开状态打开状态（Statas）画面画面按右下角按右下角DirectFunction功能键功能键选选DryPime或或WetPrime命令命令选选OK即可进行泵的排气即可进行泵的排气注注:

当流路中充满空气时当流路中充满空气时,按图示做按图示做DryPrime若只是更新流动相时若只是更新流动相时,只须作只须作WetPrime2004WatersCorporation关于色谱系统的反压关于色谱系统的反压什么是反压什么是反压（backpressure）流动相流经管路及色谱柱时会有阻力流动相流经管路及色谱柱时会有阻力,即所谓的反压即所谓的反压,又称系统反压或系统压力又称系统反压或系统压力Waters习惯用的压力单位是习惯用的压力单位是Psi（磅磅/平方英吋平方英吋）其它单位有其它单位有:

Bar,Mpa影响系统反压的主要因素影响系统反压的主要因素:

流动相的溶剂组成流动相的溶剂组成温度温度流速流速2004WatersCorporation反压与溶剂组成的关系反压与溶剂组成的关系流动相的粘度是产生反压的主要原因流动相的粘度是产生反压的主要原因有机溶剂水的粘度随组成而改变有机溶剂水的粘度随组成而改变其压力随组成变化如下图所示其压力随组成变化如下图所示2004WatersCorporation反压与流速的关系反压与流速的关系流速对反压的影响是线性关系流速对反压的影响是线性关系流速增加，反压亦增大流速增加，反压亦增大下图的实验条件：

下图的实验条件：

2.130mmSymmetryC18柱柱,202004WatersCorporation反压与温度的关系反压与温度的关系温度对反压的影响是反比关系温度对反压的影响是反比关系温度升高温度升高,反压降低反压降低,对某些流动相的影响更大一些对某些流动相的影响更大一些2004WatersCorporation影响系统反压的其它因素影响系统反压的其它因素反压与色谱柱长度成正比反压与色谱柱长度成正比反压与填料颗粒度的平方成反比反压与填料颗粒度的平方成反比2.52.5mm填料比填料比3.53.5mm填料反压高填料反压高反压与管路直径的四次方成反比反压与管路直径的四次方成反比（1/（1/DD44）反压与管路的长度成正比反压与管路的长度成正比2004WatersCorporation色谱泵的运行色谱泵的运行排气后的色谱泵即可用于实验运行排气后的色谱泵即可用于实验运行注意注意排气后，先设流速为排气后，先设流速为00恢复排气时断开的部分，如恢复排气时断开的部分，如:

进样器、色谱柱进样器、色谱柱如需要，恢复排气时断开的控制线如需要，恢复排气时断开的控制线根据色谱柱的不同，逐渐提高流速到设定值根据色谱柱的不同，逐渐提高流速到设定值若使用缓冲盐流动相若使用缓冲盐流动相,用前和用后均需用水过渡用前和用后均需用水过渡（包括排气操作包括排气操作）2004WatersCorporation色谱泵的维护保养色谱泵的维护保养流动相要过滤流动相要过滤常常用用缓缓冲冲液液时时，停停泵泵前前要要用用水水清清洗洗泵泵头头，并并用用水水冲洗柱塞杆清洗孔冲洗柱塞杆清洗孔关闭排液阀时，不要太用力拧紧，以不渗液为准关闭排液阀时，不要太用力拧紧，以不渗液为准更更换换流流动动相相时时，要要保保证证两两种种溶溶剂剂的的互互溶溶性性,如如不不互互溶，要用一种中间溶剂过渡溶，要用一种中间溶剂过渡色色谱谱泵泵在在停停用用时时,应应先先用用水水洗洗去去缓缓冲冲盐盐,然然后后用用纯纯甲醇充满泵头及管路甲醇充满泵头及管路,并保存在纯甲醇中并保存在纯甲醇中2004WatersCorporation液相色谱系统的清洗与钝化液相色谱系统的清洗与钝化色谱泵吸滤头色谱泵吸滤头,进出口阀及管路进出口阀及管路（包括进样器和检包括进样器和检测池测池）若被污染若被污染,应作清洗和钝化处理应作清洗和钝化处理一般采用一般采用30磷酸水溶液作为清洗剂，用磷酸水溶液作为清洗剂，用6M硝酸硝酸作为钝化剂，先清洗再钝化作为钝化剂，先清洗再钝化清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜匀的氧化膜2004WatersCorporation色谱泵及系统的清洗色谱泵及系统的清洗清洗液用清洗液用30%磷酸水溶液磷酸水溶液30%磷酸配制磷酸配制:

取取85%浓磷酸浓磷酸35ml与与65ml水混匀水混匀清洗步骤如下清洗步骤如下:

取下色谱柱，用两通取下色谱柱，用两通（Union）连接进样器和检测器连接进样器和检测器用纯水灌注泵头用纯水灌注泵头（四元泵的四元泵的A,B,C,D四路各为四路各为25%）用用30%磷酸清洗液洗系统磷酸清洗液洗系统（1ml/min流速流速）45分钟分钟（四元泵的四元泵的A,B,C,D四路各为四路各为25%）换成清