微免实验知识点整理xyt汇编Word下载.docx
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冲洗
吸干
油镜观察
示教片:
①大吞噬现象要认识“巨噬细胞”
②小吞噬现象主要认识“中性粒细胞”(马蹄状形)
吞噬功能的测定计数方法:
吞噬百分率:
计数100个中性粒细胞中具有吞噬作用的细胞数,即为吞噬百分率。
吞噬指数:
观察100个中性粒细胞,计数被吞噬的细菌总数,求平均每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为吞噬指数。
①
淋巴细胞转化试验(原理、分型、意义)图片
原理:
T淋巴细胞可以在分裂剂的刺激下,向母细胞转化。
促分裂剂能选择性地激发T淋巴细胞合成DNA与细胞分裂。
转化百分率正常值为70%左右
分裂相:
即染色体型
母细胞:
较小淋巴细胞大4-5倍;
核质疏松呈网状结构,有1-3个核仁;
核周透明区;
胞浆嗜碱性,有空泡
过渡型:
较小淋巴细胞略大;
核质略疏松;
着色较淡
小淋巴细胞:
核质致密;
着色深;
胞浆少
意义:
体外淋巴细胞转化反应,可为测定机体细胞免疫状态的指标之一。
②E玫瑰花环实验(原理、判定结果、意义)图片
1、原理和意义:
T细胞表面有绵羊红细胞受体,可在自然情况下与绵羊红细胞结合,形成E玫瑰花环,由此可区分T淋巴细胞与B淋巴细胞
判定结果:
凡是淋巴细胞周围围绕4个以上绵羊红细胞者为阳性
E花环形式率=E阳性细胞/(E阴性淋巴细胞+E阳性细胞)x100%
正常值40~70%
(二)实验二
血清学反应概念、特点、影响因素、分类
1、基础:
抗原决定簇——抗体的互补决定区
2、特点:
特异性、可逆性、
比例性、阶段性
3、抗原抗体反应因素:
电解质、温度、酸碱度
4、凝集反应、沉淀反应、免疫标记技术
I凝集反应:
(原理、种类)
凝集效价:
概念:
抗原+抗体=凝集团块
(1)直接凝集:
颗粒性抗原+抗体=凝集团块
分为
玻片凝集反应、试管凝集反应
(2)间接凝集:
可溶性抗原包被于载体+抗体=凝集团块
根据载体种类不同,分别称为间接血凝、间接乳凝、间接炭凝
(3)反向间接凝集:
抗体包被于载体+抗原
=凝集团块
(4)协同凝集:
抗体结合金葡菌SPA+抗原=凝集团块
II沉淀反应:
(原理、四种类型特点)
可溶性抗原与相应抗体在适当情况下(有适量电解质存在、抗原抗体二者比例适当)可形成肉眼可见的沉淀物或者沉淀线,称为沉淀反应。
可溶性抗原+抗体=沉淀物
1单向琼脂扩散
单向琼脂扩散试验是一种定量试验。
将一定量已知抗体混于琼脂中,制板,在适当位置打孔,将抗原加入孔中扩散,与板中抗体相遇,在比例合适处呈现白色沉淀环,环的直径与抗原含量成正比。
主要用于测定血清中各种Ig和补体成分的含量
②双向琼脂扩散:
定性试验,在琼脂板上打孔,把抗原和抗体分别加到相应孔中,二者自由向四周扩散,在比例合适处形成沉淀线。
若同时含有若干对抗原抗体系统,可出现多条沉淀线。
用于分析鉴定标本中多种抗原成分(抗原、抗体同时扩散,自由、定向)
缺点:
所需时间长,不够敏感。
3对流免疫电泳:
在相应抗原抗体孔之间可见白色沉淀线。
打孔:
金属打孔器打两排孔,抗原孔与抗体孔间距离为4毫米至5毫米。
加样:
抗AFP血清加于抗体孔内;
病人血清、AFP阳性血清、阴性对照血清分别加于抗原孔内。
电泳:
将琼脂板置电泳槽,抗原孔置阴极端。
板两端分别用湿纱布与缓冲液相连,通电20分钟。
观察:
在相应抗原、抗体孔间出现沉淀线。
④火箭电泳:
抗原定量试验(抗体琼脂板、抗原扩散(自由、定向)
将一定量已知抗体混于琼脂中,制板,在板的一端打一排小孔,加入待检样品,置于阴极端进行电泳。
抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰,状如火箭,称火箭电泳。
沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。
敏感度与单扩相仿,但需时较短。
III直接凝集反应—拨片凝集
(三)实验三
①补体结合实验(简单了解)
方法:
待检系统:
Ag(未知)+Ab(已知)+补体
指示系统:
绵羊红细胞(Ag)+溶血素(Ab)
结果:
溶血——阴性
不溶血——阳性
②中和反应实验:
(病毒中和实验、毒素中和实验)
略
③免疫标记技术:
(原理、常用标记物)
将已知抗体标记上显示性物质,通过检测标记物,反映有无抗原抗体反应,从而间接测出微量的抗原或抗体。
免疫标记技术是在免疫学、生物化学及显微镜术进展的基础上发展起来的一项技术,具有特异、敏感、快速的特点。
将荧光色素(常用异硫氰基荧光黄,简称FITC)与特异性抗体(或抗原)以共价键基团牢固结合,但不影响该血清抗体的免疫特性。
这种荧光标记的抗原抗体复合物,可通过荧光灯源中产生的紫外光或蓝紫光激发产生荧光,而从荧光显微镜加以观察。
常用的标记物有:
酶、荧光素、放射性同位素、胶体金、生物素、电子致密物等。
④ELISA(酶联免疫吸附试验常用的方法及途径)
把抗原抗体的免疫反应和酶(主要有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)的高效催化作用有机地结合起来,并仍保持其免疫和酶的活性。
结合在抗原抗体复合物上的酶在遇到相应的底物时,可以催化底物水解、氧化或还原,从而产生有色的物质。
颜色反应的深浅与抗体或抗原的量成正比。
主要有间接法(用于测抗体)和双抗体夹心法(用于测抗原)。
实验:
(四)实验四
革兰染色(方法、意义、结果判定)
对细菌鉴别、选择抗菌药物、研究细菌致病性等有重要意义。
1884年Gram创建,是细菌学中最为经典的染色法。
与细菌细胞壁有关,尚未完全阐明。
阴性—红色
阳性—蓝色
细菌学总论
细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物,形体微小,一般以微米(µ
m)作为测量单位。
细菌按其外型可分为球菌、杆菌、螺型菌三大类。
不同种类的细菌大小不一,大多数球菌直径约1µ
m,杆菌长2∼5µ
m,宽0.3∼1µ
m。
细菌的特殊结构(特点及意义):
荚膜、鞭毛、芽孢、菌毛
①细菌生长现象
(1)液体培养基
沉淀生长、混浊生长、表面生长
(2)半固体培养基(0.1%~0.3%琼脂粉)
混浊生长、线状生长
(3)固体培养基(1.4%~2%琼脂粉)
菌落、菌苔
②细菌变异
一、菌落变异(S→R变异)
S型菌落(Smooth)光滑菌落—表面光滑有光泽,边缘整齐。
R型菌落(Rough)粗糙菌落—表面粗糙而暗淡,边缘不整齐。
菌落变异是由于菌体本身起变化。
一般光滑的细菌有毒力;
粗糙的细菌没有毒力或毒力减退。
二、鞭毛变异(H→O变异)
细菌的鞭毛在某些情况下可以消失而变成没有鞭毛的细菌。
③细菌色素
④细菌生化反应(分类、指示剂、变色)
消毒灭菌器材(看书)
细菌的划线分离和药敏实验
药敏实验结果判断:
用精确度为1mm的游标卡尺量取抑菌圈直径。
根据NCCLS标准,作出“敏感”、“耐药”和“中介”的判断。
药敏实验意义:
①可预测抗菌药物治疗的效果,“敏感”治疗可能有
效;
“耐药”可能失败;
②指导临床医生合理选择抗生素,AST的结果为“耐
药”,则应更换药物;
③提供所选择药物的依据;
④监测耐药性,分析耐药菌变迁,掌握耐药菌感染
病流行病学,控制和预防耐药菌感染发生和流行
(五)实验五
1、常见化脓性球菌的形态及其培养特性
①化脓性球菌:
葡萄球菌(左上)、链球菌(右上)、肺炎球菌(左下)、淋球菌(右下)
②甲型(α)乙型(β)丙型(γ)溶血链球菌、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌
1.甲型α—草绿色,不完全溶血
2.乙型β—透明完全溶血
3.丙型γ—不溶血
4.肺炎链球菌G+(血琼脂平板)(草绿色不完全溶血)
5.淋病奈瑟菌G-(巧克力血琼脂平板)
6.其中,链球菌的致病:
扩散因子(透明质酸酶)使脓液稀释扩散。
2、白喉杆菌((亚碲酸钾血琼脂、Albert染色—异染颗粒、Eleck平板—白喉杆菌毒力试验)
③炭疽杆菌的形态及培养特性
④结核杆菌的形态及培养特性、抗酸染色
(齐-尼抗酸染色—红色)
(罗氏培养基(绿色)—菜花样(黄色)
(六)实验六
①肥达反应(原理、意义、凝集效价、结果判定)
用已知的伤寒沙门菌菌体(O)抗原和鞭毛(H)抗原,以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清做试管或微孔板凝集实验,测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。
结果判断:
②肠道杆菌(SS培养基、双糖铁培养基)
SS培养基:
双糖铁培养基:
4生化反应表
④霍乱弧菌
⑤厌氧芽孢梭菌的形态及培养特性(破伤风、产气荚膜、肉毒梭菌)
1.破伤风梭菌G+(疱肉培养基)(毒素动物实验)
2.产气荚膜梭菌G+(疱肉培养基)(血琼脂平板—双层溶血环)(高层琼脂断裂试验)(汹涌发酵试验)
3.肉毒梭菌G+(疱肉培养基)(血琼脂平板—完全溶血)
(七)实验七
①白色念珠菌G+(普通琼脂、沙包培养基)
②新型隐球菌(血琼脂、沙包培养基)(墨汁负染)
③病毒的致细胞病变作用(CPE)
许多病毒在细胞内复制增中,由于干扰细胞的正常代谢和损伤细胞结构,引起细胞形态的变化,如细胞皱缩、出现空泡、斑块、融合、变圆或坏死的现象,此种在光学显微镜下可观测到现象称病毒的致细胞病变作用(cytopathiceffect,CPE)
④包涵体
胞浆、胞核内出现的圆形或椭圆形、嗜酸或嗜碱性的小体
狂犬病毒包涵体—内基小体
鸡胚接种:
鸡胚在照蛋灯下标出气室和接种点,接种点一定要避开胚体和大血管。
用碘酒及酒精在标记处消毒,用打孔器按先气室后接种点的顺序打孔。
用注射器倾斜插入鸡胚2~3毫米,注入病毒0.2毫升。
用溶化石蜡按先接种点后气室的次序封口。
鸡胚置孵箱培养72小时后收获。
小白鼠脑内接种:
碘酒及酒精在接种部位(眼角与耳根连线的中点)消毒
用注射器倾斜进针2~3毫米,注入病毒0.02~0.03毫升