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A文章编号:
1672-3791(2015)11(c)-0209-04肉类是人们重要的食物来源,肉类食品安全是食品安全中的重点之一。
目前,有些商贩在高价肉类中掺入低价肉类,以降低成本,这样很容易引发食品安全问题,甚至可能引发宗教问题与民族矛盾。
另一方面,肉类中残留的β-兴奋剂类药物(包括克伦特罗,莱克多巴胺、沙丁胺醇等)则会危害人类健康。
因此,建立一种快速准确的检测肉类食品安全的检测方法,用于检测肉类掺假,以及肉类中残留的β-兴奋剂类药物,具有重要意义。
检测肉类掺假的方法,有色谱法[1]、电泳法[2]、聚合酶链式扩增法(PCR)[3]、酶联免疫分析法(ELISA)[4]等。
检测β-兴奋剂类药物的方法有高效液相色谱法[5,6]、酶联免疫分析法(ELISA)[7,8]、胶体金免疫层析法[9]等。
其中,色谱法与电泳法的操作较繁琐,对操作人员的要求较高,PCR与ELISA的方法反应时间较长。
该研究使用胶体金检测仪结合快速检测试纸的方法,不仅检测时间短,而且能够进行定量检测,适合对肉类食品安全进行现场快速检测或筛查。
1材料与设备1.1试剂与材料猪肉检测快速检测试纸,盐酸克伦特罗快速检测试纸,莱克多巴胺快速检测试纸,沙丁胺醇快速检测试纸,均来自北京普析通用仪器有限责任公司,其他化学试剂购于西陇化工股份有限公司。
1.2设备胶体金检测仪(型号:
TR3)来自北京普析通用仪器有限责任公司。
2方法2.1肉类掺假检测前处理步骤:
(1)将待测样品均质,称取(0.5±
0.01)g均质后的样品;
(2)加入3mL的去离子水(水温为(50±
5)℃),剧烈振荡30s;
(3)静置待其自然沉淀,处理后的样品恢复至室温后,取上清液进行检测。
检测步骤:
(1)将试纸条水平放置,在试纸条加样处加入100μL待检测溶液;
(2)静置10min后观察检测结果;
(3)结果判断:
C线显示红色色带,T线不显示红色色带,判为阴性。
C线显示红色色带,T线显示红色色带,无论深浅,判为阳性。
C线不显示红色色带,无论T线是否显示红色色带,该试纸均判为无效。
在羊肉中掺加不同比例的猪肉,按照上述步骤进行前处理与检测,记录检测结果。
2.2猪肉中残留的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇检测前处理步骤:
(1)取4g匀浆去脂肪肉样(肉泥/去脂肪)于50mL离心管中,加0.5mL稀释液,盖紧管盖;
(2)将装有样品的离心管放入80℃水中水浴5min,冷却至室温,尽量取出管中液体移至于干净离心管中;
(3)4000r/min离心1min,取去掉脂肪层的上清液进行检测。
(1)使用待测物质的标准品,配制一系列浓度的标准品溶液,取出检测卡,开封后平放于桌面,将标准品溶液加100μL于样品孔中。
加样后5min,使用胶体金检测仪读数。
将标准品溶液的浓度与T/C(T线深浅和C线深浅的比值),对应输入至胶体金检测仪建立标准曲线;
(2)取出检测卡,开封后平放于桌面,将离心管中的上清液加100μL于样品孔中。
加样后5min,使用胶体金检测仪读数,根据标准曲线计算出浓度值。
在猪肉中添加一定浓度的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇,按照上述步骤进行前处理与检测,每个样品重复检测5次,计算添加回收率与平均值。
添加回收率的计算方法:
添加回收率=(样品检测浓度空白样品检测浓度)/添加浓度×
100%。
3结果3.1肉类掺假羊肉中掺加猪肉的检测结果见图1,由图1可见,在羊肉中掺加0.75%~25%(质量分数)的猪肉,可以观察到T线。
掺加猪肉的比例越高,T线颜色越深。
说明该快速检测试纸条可以用于检测羊肉中掺加猪肉,而且较灵敏。
3.2猪肉中残留的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇图2为盐酸克伦特罗的标准曲线,在图2中,标准品溶液的浓度分别为:
0,0.61,1.25,2.5,5.0ng/mL。
图3为莱克多巴胺的标准曲线,在图3中,标准品溶液的浓度分别为:
0,1.0,1.5,2.5,5.0ng/mL。
图4为沙丁胺醇的标准曲线,在图4中,标准品溶液的浓度分别为:
0,0.2,0.6,1.8,3.0ng/mL。
猪肉中盐酸克伦特罗,莱克多巴胺,沙丁胺醇的添加回收率见表1。
由表1可见,盐酸克伦特罗的平均添加回收率在110%左右,莱克多巴胺的平均添加回收率为90%~120%,沙丁胺醇的平均添加回收率在110%左右。
3.3胶体金检测仪与目测结果比较图5为猪肉中添加沙丁胺醇的检测结果,可见,猪肉中添加沙丁胺醇的浓度为3μg/kg,目测结果为阳性。
由表1可见,猪肉中添加沙丁胺醇的浓度为0.2μg/kg,胶体金检测仪结果为阳性。
所以,胶体金检测仪与目测相比,检测灵敏度更高。
4讨论该研究使用快速检测试纸检测羊肉中掺加的猪肉,掺加猪肉的质量分数低至0.75%时,可以被检出。
该方法灵敏度较高,而且检测时间较短,只需要20min就能够完成样品处理与检测的全过程,适合用于现场快速筛查。
并且,该研究使用胶体金检测仪与快速检测试纸相结合的方法,检测猪肉中添加的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇,与传统的胶体金免疫层析法相比,灵敏度更高,适合用于现场快速筛查。
该研究为研究肉类掺假的基因检测试纸与基因芯片奠定了基础。
基因检测试纸的检测原理为,首先提取待检样本的核酸,经过核酸扩增反应,核酸杂交技术,以及胶体金免疫层析检测技术,可以快速地实现对肉类基因的定性检测。
因为核酸的热稳定性和酸碱稳定性与蛋白质相比更优,所以,以动物种属间遗传信息的差异作为物种鉴别的检测靶点,具有特异性高,方法便捷,不受组织类别限制等诸多优势,已经成为食品中肉类成分鉴别的重要方法。
基因芯片的技术原理为:
核酸分子原位杂交技术,将特别设计的核酸片段作为分子探针,固定在芯片基底上,样品经过处理,核酸聚合酶链式反应(PCR扩增),或体外转录后,与芯片上固定的分子探针反应,样品中基因序列与探针互补的核酸分子就会与探针杂交,形成双链结构,通过一系列检测手段,可以实现对待测样品基因的大规模检测[10]。
基因芯片在医疗诊断[11]、病原微生物检测[12]、农业研究[13]、食品安全检测[14]、转基因农作物检测[15]等领域都具有重要的应用价值。
该研究的下一步计划,是研究用于检测肉类掺假的基因芯片。
首先,针对待测目标的特异性核酸片段设计引物探针,用于PCR扩增;
其次,在基因芯片的PCR区实现PCR扩增;
并且,在基因芯片的检测区固定捕获探针,用于检测扩增产物。
基因芯片具有高通量,集成化的特点,可以同时鉴别多种肉类的来源,在肉类鉴别与肉类掺假检测方面可以发挥重要作用。
5结语该研究使用快速检测试纸检测肉类掺假,操作简便,检测时间短,适合对涉及肉类掺假的食品进行现场快速检测或筛查。
并且为研究肉类掺假的基因检测试纸与基因芯片奠定了基础。
该研究使用胶体金检测仪结合快速检测试纸的方法,不仅检测时间短,而且能够进行定量检测,提高了结果的灵敏度与准确性,适合对肉类食品中残留的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇进行现场快速检测或筛查。
食品检测论文文献[1]ASHOORSH,MONTEWC,STILESPG.Liquidchromatographicidentificationofmeats[J].AssociationofOmcia1AnalyticalChemists.1988,71
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关键词:
食品检测,实验室样品,食品安全食品检测论文内容样品是检测工作的对象和载体,人、机、料、法、环等各项质量保障措施也都是基于样品得到良好控制的前提。
只有检测的样品得到良好的控制,确保其具有充分的代表性、有效性和完整性,检测工作才会有实际的意义,检测结果才有可能真实可靠。
因此,食品样品的有效控制工作意义重大。
一、样品控制的要求《实验室资质认定评审准则》中5.6款抽样和样品处置和《检测和校准实验室能力认可准则》中5.8检测和校准物品(样品)的处置分别对样品控制提出了明确的要求,总结归纳如下:
1)实验室应有用于检测样品的抽取、运输、接收、处置、保护、存储、保留或清理的程序,确保检测样品的完整性。
2)实验室应具有检测样品的标识系统,避免在实物、记录和文件中混淆。
3)实验室应记录接收样品的状态,尤其对正常(或规定)条件的偏离。
,食品安全。
4)实验室应有适当的设备设施贮存、处置样品,有程序避免样品发生退化、丢失和损坏。
5)实验室应保存样品的流转记录。
6)样品抽取过程中应注意样品存储、运输条件的控制,确保检测结果的有效性。