医学细胞生物学实验大纲资料Word文件下载.docx

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③镜臂：

是镜柱向上弯曲的部分，适于手握。

有些显微镜镜柱与镜臂之间有倾斜关节。

④镜筒：

连在镜臂前方的镜筒部分，一般长度为16cm。

有直筒和斜筒两种，前者镜筒上下可调节，后者镜筒是固定的。

⑤调节器：

是装在镜臂上的大小两种螺旋，转动时可使镜台升降或使镜筒上下移动以调节焦距。

粗调节器（粗螺旋）转动时可使镜台或镜筒在垂直方向以较快速度和较大距离进行上下升降，调节物镜与标本的距离。

通常在低倍镜下，先用粗调节器找到物像。

细调节器（细螺旋）形状较小，通常在粗调节器的下方或外侧，转动时可使镜台或镜筒缓慢地上下移动，以精细调节焦距，得到清晰的物像。

⑥旋转器（镜头转换器）：

装在镜筒的下端，呈盘状，下面有3～4个物镜孔供装置不同放大倍数的物镜。

⑦载物台（镜台）：

用以放玻片样本，中间有一通光圆孔，称为镜台孔，由此孔可透入集光器传入的光线。

⑧标本移动器：

装于载物台上，用于前后左右移动玻片标本。

移动器上有标尺，可以测定标本大小。

（2）照明部分

①显微镜采用电光源，使用时接上电源，在打开电源前，光照亮度旋至最小位置，然后打开电源，旋转亮度旋扭调节光照强度至适宜为止。

关闭电源前，应先将光照亮度旋至最小位置。

②聚光器（又名集光器，condenser）：

位于载物台下方的聚光器架上，由聚光镜和虹彩光阑组成。

聚光镜：

由一片或数片透镜组成，其作用相当于一凸透镜，起会聚光线的作用，一般可通过装在镜柱旁的聚光器调节螺旋的转动而上下移动，上升时视野中光亮度增加，下降时光亮度变弱。

虹彩光阑（又名光圈，diaphragm）：

在聚光镜下方，由十几张活动的金属薄片组成。

其外侧伸出一柄，推动此柄可随意调节开孔的大小，以调节光量。

（3）光学部分

①目镜（ocular）：

位于镜筒上方，常用的有5X，6X，8X，10X，12X，15X，数字越大，放大倍率越高，可根据需要挑选使用。

一般装在镜筒上的是10×

目镜。

②物镜（objective）：

装在镜筒下端的旋转器上，一般有3～4个物镜。

其中最短的刻有“4X”或“10X”符号的为低倍镜，较长的刻有“40X”符号的为高倍镜；

最长的刻有“100X”符号的为油镜。

在物镜上，还有镜口率（NA）的标志。

镜口率反映该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨力越高。

物镜的工作距离是指显微镜处于工作状态（物像调节清楚）时，物镜的下表面与盖玻片（盖玻片的厚度一般为0.17mm）上表面之问的距离。

物镜的放大倍数愈大，它的工作距离愈小。

显微镜的放大倍数是物镜的放大倍数与目镜的放大倍数的乘积，如物镜为10X，目镜为10X，其放大倍数就为l00。

2．光学显微镜的使用方法

（1）低倍镜的使用方法

①检查：

用右手握镜臂，从镜箱中将显微镜取出，左手托镜座，平稳地放到实验桌上。

使用前应先检查一下显微镜各部分结构是否完整，如发现有缺损或性能不良，要立即报告教师，请求处理。

②准备：

将显微镜放于自己座位面前实验桌上稍偏左侧，镜台向前镜筒向后，旋转粗调节器使镜台远离物镜，旋转物镜转换器，使低倍镜对准镜台孔，这时可听到转换器边上固定扣碰上而发出的声音，或手上感到一种阻力，说明物镜的光轴已正对镜筒的中心。

③对光：

打开光圈，将聚光器上升。

双眼同时张开向目镜内观察，打开电源，调节光照亮度旋钮，直到光亮度最适宜为止。

④置片和调整焦距：

将玻片标本置于镜台上，注意使有盖玻片的一面朝上，利用标本移动器将玻片夹住，然后将玻片稍加调节，使标本对准镜台孔。

从侧面注视低倍镜，转动粗调节器，使镜台慢慢上升至最高处为止，再以双眼自目镜中观察，左手转动粗调节器使镜台徐徐下降，直到视野中出现标本的物像为止；

再转动细调节器，使镜台微微上下，调节距离，使物像清晰。

（2）高倍镜的使用方法

①依上法先用低倍镜找到物像后，将欲观察的标本部分移到视野中央。

②眼睛从侧面注视物镜，用手转动物镜转换器，使高倍物镜对准标本（如果操作正确，此时物镜与标本之间距离正好，不会碰到）。

③眼睛向目镜内看，同时只需轻轻转动细调节器使镜台微微升降，即得到清晰的物像。

（3）油镜的使用方法

①同高倍镜的使用方法

②在玻片标本上需要观察的部分加上少许香柏油，然后转动物镜转换器，使油镜对准标本。

调节油镜至油镜的前端浸在香柏油内，从目镜观察，同时转动细调节器，至视野出现清楚物像为止。

油镜的放大倍数大，观察时要用较强的光线。

③观察以后，用粗调节器使镜台下降（镜筒上升），用擦镜纸将镜头、玻片标本上的香柏油擦去，可用少许二甲苯，但不能用力擦，以免损坏镜头和标本。

水分较多的临时制片，使用油镜观察时，应事先吸尽水分。

3．使用光学显微镜的注意事项

（1）取显微镜时必须右手握镜臂，左手托镜座，平贴胸前。

切勿一手斜提，前后摇摆，以防碰撞和零件跌落。

（2）擦拭显微镜的光学玻璃部分，必须用擦镜纸，切忌用其他硬质纸张或布等擦拭，以免造成镜面划痕。

（3）切忌用水、酒精或其他药品浸润镜台或镜头。

一旦沾染应立即进行处理，以免污染或腐蚀镜头。

（4）放置玻片标本时，应将有盖玻片的一面向上，否则会压坏标本和物镜。

（5）观察时应两眼同时张开，用左眼观察，用右眼注视绘图。

左手调节粗、细调节器，右手调节标本移动器和绘图。

实验完毕后，将显微镜擦拭干净。

物镜不要与镜台相对，关闭光圈，适当下降聚光器，将反光镜直立，送回原处。

实验二动物细胞形态结构的观察

观察几种细胞的形态结构。

二、实验用品

显微镜、永久制片。

三、实验原理

细胞的形态结构与功能相关是很多细胞的共同点，分化程度较高的细胞更为明显，这种合理性是生物漫长进化过程所形成的。

例如，具有收缩机能的肌细胞伸展为细长型；

具有感受刺激和传导冲动机能的神经细胞有长短不一的树枝状突起；

游离的血细胞为圆形/椭圆形或圆饼形。

不论细胞的形态如何，细胞的结构一般分为三大部分：

细胞膜、细胞质和细胞核。

但也有例外，如哺乳类动物红细胞成熟时细胞核消失。

四、显微观察

1.猪脊髓压片观察脊髓前角运动神经细胞

在显微镜下观察，染色较深的小细胞是神经胶质细胞。

染色为蓝紫色的、大的、有多个突起的细胞是脊髓前角运动神经细胞，胞体呈三角形或星形，中央有一个圆形细胞核，内有一个核仁。

2.鸡血涂片的制备与观察

取一滴鸡血液，滴在载玻片的一端，将另一载玻片的一端呈45°

角紧贴在血滴的前缘，待血液沿载玻片的边沿扩展呈线状后，均匀用力向前推，使血液在载玻片上形成均匀的薄层，晾干，加瑞氏染液2~3滴，覆盖整个血膜，0.5~1min后，滴加等量或稍多点蒸馏水，与染料混匀染色5~10min，用清水冲去染液，待自然干燥后或用吸水纸吸干后，即可进行镜检。

显微镜下可见鸡血细胞为椭圆形，有核。

白细胞数量少，为圆形。

3.观察平滑肌分离装片

低倍镜下观察平滑肌分离装片，可见染成紫红色呈纺锤形的肌细胞，细胞核为椭圆形，位于细胞的中央，着色很深，在细胞质中有淡红色的肌原纤维。

五、实验报告

1.为什么使用高倍镜或油镜必须从低倍镜到高倍镜或从低倍镜到油镜的顺序进行?

2.如果高倍镜下找不到物象，应从哪些方面找原因，如何解决?

3.绘制在40倍、油镜下观察到的鸡红细胞、神经细胞、平滑肌细胞的形态结构图，并标注。

生物学实验绘图方法与要求

绘图是生物学实验报告的一种重要形式，其基本要求如下：

1.准备好3H铅笔、橡皮、刀、尺子及绘图纸，将绘图纸放在观察物的右边，纸下不要垫书或纸张。

2.绘图时，特别注意观察物体的形状、各部分的位置、比例和毗邻关系。

3.图的位置、大小要适宜，图占报告纸左上方2/3的面积，并考虑标注的位置。

4.观察清楚后，选择典型的细胞或者组织，左眼看显微镜，右眼配合左眼，先用铅笔在纸上轻轻描出轮廓，使形态正确，然后再用清晰的线条绘出，线条粗细要均匀不要重复。

5.用圆点表示明暗和立体感，点的点大小要均匀，不能涂阴影。

6.图绘好后，要在图的右侧注明各部分结构名称，引线要直而平行，长短适度，各引线不能交叉，各线右端上下对齐，注字要用正楷，不能潦草，要自左向右写。

7.每一个图下面要注明图的名称、放大倍数。

8.绘图纸上所有注字（包括姓名、实验日期、题目）均用铅笔书写，不能用其他笔写。

实验三细胞膜的渗透性

了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。

二、实验原理

生物膜对小分子的跨膜渗透包括水、电解质和非电解质溶质。

根据人工不含蛋白质的磷脂双分子层研究物质通透性质表明，只要时间足够长，任何分子都能顺浓度梯度扩散通过脂双层。

人工合成的脂质体主要用来研究细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。

但不同分子通过脂双层扩散的速率差别很大，主要取决于它们在脂类和水之间的分配系数及其分子的大小。

分子越小，分配系数越大，通过质膜的速率越快。

从右图可以看出，小的、亲脂性的、非极性分子（如O2、CO2、N2、苯）容易溶解于脂双层，可迅速透过脂双层。

小的、不带电荷的极性分子（如水、脲、甘油等）如果足够小时，也能很快透过脂双层；

大的、不带电荷的极性分子（如葡萄糖，蔗糖等）可以跨膜扩散运输，但比较困难；

对于带电荷的分子或离子，由于这些分子的电荷及高的水化度，因此不管多小，都很难透过脂双层的疏水区，它们要通过载体介导的主动运输方式跨膜运输。

所以人工脂双层对水的透性比那些直径小的多的Na+和K+大109倍。

与人工脂双层膜不同的是，生物膜不但允许水和非极性分子借简单的物理扩散作用透过，还允许各种极性分子，如离子、糖、氨基酸、核苷酸及很多细胞代谢产物通过特有的机制通过。

如果将红细胞放置在各种溶液中，根据红细胞质膜对各种溶质的渗透性不同，有的溶质可渗入，有的溶质不能渗入。

即使能渗入，速度也有差异。

可通过观察红细胞溶血现象时间的不同来记录渗入速度。

血红蛋白从红细胞中逸出的现象称为溶血现象。

渗入红细胞的溶质能提高红细胞渗透压，使水进入红细胞，引起溶血及细胞膜破裂。

此时光线较容易通过溶液，使溶液呈现透明即为溶血。

由于溶质透入速度不同，溶血时间也不同。

因此，可通过溶血现象来测量各种物质通透性的差别。

三、实验用品

1.器材：

50mL小烧杯，10mL移液管，试管，试管架。

2.材料：

动物血液

3.试剂：

0.17mol/L氯化钠、0.17mol/L氯化铵、0.32mol/L醋酸铵、0.17mol/L硝酸钠、0.12mol/L草酸铵、0.12mol/L硫酸钠、0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇、0.32mol/L丙酮

四、实验方法

1.动物血液的稀释：

取2份血液，加入8份0.17mol/L氯化钠溶液混匀即可。

2.低渗溶液：

取试管一支，加入5mL蒸馏水，再加入1mL稀释的血液，注意观察溶液颜色的变化，由不透明的红色逐渐澄清，说明红细胞发生破裂造成100％红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。

3.红细胞的渗透性：

取试管一支，加入0.17mol/L氯化钠溶液5mL，再加入1mL稀释的血液，并轻轻摇动，注意颜