液相色谱串联质谱的小知识知识讲解Word文档格式.docx

液相色谱串联质谱的小知识知识讲解Word文档格式.docx

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6.选择菜单“Options–Pump”，这时机械泵将开始工作，同时分子涡轮泵会开始抽真空。

几分钟后，ZQ就会达到真空要求，ZQ前面板右上角的状态灯“Vacuum”将变绿。

7.点击真空状态图标，检查真空规的状态，以确认真空达到要求。

8.确认氮气气源输出已经打开，气体输出压力为90psi。

9.设置源温度（SourceTemp）到目标温度。

关机

1．点击质谱调谐图标进入调谐窗口。

2.点击Standby让MS进入待机状态时，这时状态灯会由绿变红，这一过程是关质谱高电压的过程。

3．停止液相色谱流速，如果还需要冲洗色谱柱，可以将液相色谱管路从质谱移开到废液瓶。

4．等脱溶剂气温度（ESI）或APCI探头温度降到常温，点击气体图标关闭氮气。

5．逆时针方向拧开机械泵上的GasBallast阀，运行20分钟后关闭（镇气）。

a）对于ESI源，至少每星期做一次。

b）对于APCI源，每天做一次。

6．再次确认机械泵的Ballast阀是否已经关闭。

7．选择Option/Vent，这时质谱开始泄真空，ZQ前面板的状态灯“Vacuum”开始闪烁，几分钟后机械泵会停止运行，这时可以关闭质谱电源。

FINNIGENDECA开关机及校正流程——

1开机前准备事项

（1）确保质谱总电源开关（白色开关）及主板电源开关（黑色开关）处于关闭状态（O）；

（2）检查真空泵油液面，确保泵内油页面处于标定的上下两线之间；

（3）查看离子源洁净程度，ESI源查看喷口是否有固体析出，毛细管口是否完好；

APCI喷口是否有积液；

（4）气体压力，打开高纯氮气钢瓶总阀，调节出口压力调至0.65MPa，打开高纯氦气钢瓶总阀,调节出口压力调至0.25Mpa;

（5）检查壳气及辅助气接口连接紧固，松开液相管路与离子源的接口；

（6）开启动力电源，电压稳定，正常；

（7）确保室内温度在18～25度。

二找方法

a、其实做方法　不是很难的，先找ＭＳ的条件，然后建立ＭＲＭ连上液相找液质方法就可以了，然后在优化离子源　气体流量，以及温度就可以了。

b、首先，我们应该知道被测化合物的结构式，pKa，溶解度等理化性质。

1，根据化合物极性和分子量大小选择离子源，非极性强的化合物可用APCI源，非极性弱的用ESI，此外ESI可形成多电荷离子，适合检测多肽等分子量大的化合物（APCI则不行）。

2，根据化合物的酸碱性选择用正离子或负离子：

一般碱性化合物用正离子，酸性或中性化合物选择负离子。

正离子条件下：

流动相一般加0.01－0.1％的甲酸，

负离子条件下：

流动相一般加0.01－0.1％的甲酸铵。

3，离子源和正负条件确定好后即可优化化合物的质谱参数：

建议先搞清楚各个参数是与流速相关还是与分子量相关，与TSQQuantumn为例：

与流速相关的参数有：

Sprayvoltage，Sheathgas，Auxgas，Capillarytemperature等参数，如果流速在较低范围内变动，这些参数就不用优化，使用厂家的推荐值即可。

与分子量相关的参数有Tubelensoffset等参数，这个一般也不建议优化。

使用校正表上的值即可。

所以这一步最关键的是找到母离子，如有加合离子建议加大SourceCID试试，给一定能量，看看打碎的主要子离子。

注意：

如让仪器自动找子离子也能找到，但其优化的碰撞能量一般偏高，一般需要在其基础上减去SourceCID的值大小即可

C、如果是简单的定性，对于锥孔电压没什么太苛刻的要求。

但是如果是要对样品进行定量，特别是低含量的，要讲究灵敏度，那就我对单个样品直接进样，分别优化毛细管电压和锥孔电压。

三质谱仪

按质量分析器（或者磁场种类）可分为静态仪器和动态仪器，即稳定磁场（单聚焦及双聚焦质谱仪）和变化磁场（飞行时间和四极杆质谱仪）。

MS仪器一般由进样系统、电离源、质量分析器、真空系统和检测系统构成。

1、真空系统

质谱仪中所有部分均要处高度真空的条件下（10-4-10-6Torr或mmHg）,其作用是减少离子碰撞损失。

真空度过低，将会引起：

a）大量氧会烧坏离子源灯丝；

b）引起其它分子离子反应，使质谱图复杂化；

c）干扰离子源正常调节；

d）用作加速离子的几千伏高压会引起放电。

2、进样系统

对进样系统的要求：

重复性、不引起真空度降低。

进样方式：

a）间歇式进样：

适于气体、沸点低且易挥发的液体、中等蒸汽压固体。

如图所示

注入样品（10-100&

#61549;

g）---贮样器（0.5L-3L）---抽真空（10-2Torr）并加热---样品蒸分子（压力陡度）---漏隙---高真空离子源。

b）直接探针进样：

高沸点液体及固体

探针杆通常是一根规格为25cm&

#61620;

6mmi.d.,末端有一装样品的黄金杯（坩埚），将探针杆通过真空闭锁系统引入样品，如图所示。

我们试验室用的是ABI3000质谱仪，主要定量分析生物样品。

LC-MS/MS方法学开发的一般步骤是

首先通过微量注射泵获得母离子和子离子以及DPCE这四个主要参数

然后利用梯度程序考察流动相组成（包括有机相的比例，甲酸或缓冲盐的加入量）对质谱响应的影响。

流动相的组成确定后利用FIA优化确定其他参数，主要是气体参数和TEMIS。

一台LC/MS由以下几部分组成：

HPLC、离子源接口、离子束聚焦、质量分析器、离子检测器、数据处理、化学工作站。

HPLC就不说了，先说离子源，目前比较好的离子源设计为Agilent的直角喷雾技术，好处：

1。

去溶剂效果好,耐受液相高流速；

2。

雾化针零电位,位置免调整,操作安全简便,重现性好;

3。

离子截取面积大,灵敏度高;

4。

反吹干燥氮气,有效阻挡中性分子,减少污染并保护真空;

5。

大口径非加热石英毛细管,离子传输效率高,有利于高灵敏度检测；

有效防止样品热降解；

调谐稳定，碰撞诱导解离（CID）谱图重现性好；

6。

铰链设计,不同离子源的切换,简单方便,易于操作。

下面说质量分析器：

没有一种质量分析器可以适用于所有领域，目前的质量分析器有：

单四极杆质谱、三级串联质谱、离子阱质谱、飞行时间质谱、四极-飞行时间质谱。

离子检测器：

电子倍增管（EMT）：

经质量分析器分离出来的离子首先撞击高能转换打拿极发射二次粒子，正、负离子转换的二次粒子最终均为电子；

随后发射的电子进入电子倍增器的弯曲形内壁，撞击管壁涂层，产生更多的二次电子；

最后以电信号输出。

电子倍增管的放大倍数约为107。

光电倍增管（PMT）：

经质量分析器分离出来的离子首先撞击倍增管最前端的闪烁晶体发射光子，光子照射光阴极射线管而发射电子，随后发射的电子进入电子倍增管进行信号放大，最终同样以电信号输出。

微通道板（MCP）：

由一组圆柱形微通道管组成，每个微通道管的作用与电子倍增管类似。

当离子进入微通道管时，产生二次电子，反射通过这些微通道管时，不断产生更多的电子。

MCP的最大优点在于具有超快的时间响应。

如果将几块微通道板用适当的方法叠在一起，放大倍数将达108。

ESI是气相离子化过程，主要包括三个步骤：

1、在喷雾毛细管尖端产生带电液滴；

2、通过溶剂蒸发和雾滴分裂使带电液滴变小，这个过程反复进行；

3、由很小的带电雾滴产生气相离子。

一般情况下，甲醇-水系统已能满足多数样品的分离要求，且流动相粘度小、价格低，是反相色谱最常用的流动相。

但Snyder则推荐采用乙腈-水系统做初始实验，因为与甲醇相比，乙腈的溶剂强度较高且粘度较小，并可满足在紫外185~205nm处检测的要求，因此，综合来看，乙腈-水系统要优于甲醇-水系统。

四液质经验

我认为要维护好仪器，首先流速不能过大，液质是不能承载过大流速的；

其次电压不要加到极限，尤其是正负离子转换时要适当调整；

最后是做完样一定要及时冲洗和吹扫管路。

做液质时跑一针的时间最好不要超过45分钟，否则仪器会很累。

另外我认为API4000定量很准，但是打多级碎片时最好用的是离子阱，因为它能够在一次进样后同时分析多个离子，很方便，而不像四级杆一次只能进行一种离子的多级研究。

1、由于液质的流速较小（ESI一般为0.2ml/min），所以配置样品的溶剂强度不能太大，尽量小于起始比例，否则，会出现保留时间偏移等问题。

2、如果在液相上摸好的条件，注意尤其是流动相的组成要转化成合适LCMS分析的。

3、磷酸盐及其他不挥发缓冲盐在离子源会沉淀并堵塞毛细管等，要更换成可挥发的有机缓冲盐。

4、缓冲盐会导致离子抑制，因此要控制缓冲液的强度，<

10mM。

5、去污剂、表面活性剂会有离子抑制现象发生，表面活性剂产生的加合物和离子簇会干扰质谱数据，因此作液质联用仪时，不要使用洗涤剂清洗玻璃器皿等容器，如果一定要用，建议超声清洗多次。

比如分析的样品必须要干净，这样既可以保护色谱柱，也可以防止污染质谱；

分析了大量的生物样品后，冲洗系统时，先用高比例的水相冲洗，把源也给洗一下，然后再换用高比例的有机相，这时要把柱后管路从源上拿下来，避免柱中的杂质给冲进质谱

1.前处理：

样品一定要干净，不管是为了质谱还是为了保护柱子，生物样品提取的好些，如果直接沉淀，一定要注意，尽量高转速12000rpm以上，低温离心，最好离2次（保险一点），转移样品也要仔细，从中间慢慢吸，有时会有漂浮物，岛津的质谱好像做直接沉淀的源比较容易堵，Waters的好些。

2.2.样品浓度：

质谱是灵敏度很高的仪器，进样浓度一定不能太高，1－2ug/ml已经可以啦，太高的浓度对仪器来说比较容易造成残留，而且定量也会不准啦。

3.3.流动相:

流动相中尽量加易挥发的盐，尽量不要加表面活性剂之类的，容易离子抑制，如果遇到离子抑制，可以试试把你的样品峰往后推推或者改变提取方法，也可以试试用APCI源。

如果你的液相是低压混合的，尽量不要跑梯度，那样很费时间，如果没办法，一针又要走很长时间的话，可以考虑切换，只测样品出峰前后的那段时间，这样可以保护质谱。

但是如果你用粗柱子，较高流速的也可以考虑跑梯度，如API4000，但要尽量减小死体积。

4.4.冲洗:

冲柱子自然不用说了，低有机相和高有机相分别冲一定时间（各至少半个小时以上吧），柱子保存在高有机相中。

做完试验，冲源也是很重要的，也是低有机相和高有机相冲，但是时间可以不用那么长，你可以先冲源再冲柱子，或者两者分开冲，个人觉得分开冲好些，这样柱子上的脏东西就不会进到源里面去啦。

冲源的时候气可以关小些。

waters的液质有在线除盐的功能

1、样品必须过0.22um滤膜过滤，不得有颗粒物；

2、上样的溶剂，必须是色谱纯，最好和你的流动相比例一致；

3、反相体系，不允许用正己烷之类极性弱的溶剂溶解样品并上样。

4、水，自然是纯净水了；

5、样品不允许含有金属离子、表面活性剂（不要用洗洁精洗瓶子）、磷酸盐、硼酸盐等不挥发盐；