届高三生物一轮书稿第12单元现代生物科技专题含答案 师生复习资料Word文件下载.docx

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③结果:

产生    末端或    末端。

(2)DNA连接酶

常用类型

coliDNA连接酶

T4DNA连接酶

来源

     

T4噬菌体

功能

连接黏性末端

连接        

结果

恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键

(3)载体

①条件:

能自我复制、有一个至多个    切割位点、有特殊的    。

②常用载体——    。

③其他载体:

λ噬菌体的衍生物、      等。

1.限制酶和DNA连接酶的关系

图12-36-1

(1)限制酶和DNA连接酶的作用部位都是磷酸二酯键。

(2)限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。

(3)DNA连接酶起作用时,不需要模板。

2.DNA相关六种酶的比较

名称

作用部位

作用

底物

作用结果

限制酶

磷酸二酯键

DNA

 将DNA切成两个或多个片段

连接酶

片段

 将两个DNA片段连接为一个DNA分子

聚合酶

脱氧核

苷酸

 以单链DNA为模板,将单个脱氧核苷酸依次连接到单链末端

(水解)酶

 将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸

解旋酶

碱基对之

间的氢键

 将双链DNA分子局部解旋为单链,形成两条长链

RNA

核糖核

 以单链DNA为模板,将单个核糖核苷酸依次连接到单链末端

1.如图12-36-2为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图,据图回答下列问题:

图12-36-2

                  

(1)a代表的物质和质粒的化学本质都是    ,二者还具有其他共同点,如①        ,②        (写出两条即可)。

(2)若质粒DNA分子的切割末端为—A—TGCGC,则与之连接的目的基因切割末端应为      ;

可使用      把质粒和目的基因连接在一起。

(3)氨苄青霉素抗性基因在质粒DNA分子上称为       ,其作用是               。

(4)下列常在基因工程中用作载体的是(  )

A.苏云金芽孢杆菌抗虫基因

B.土壤农杆菌环状RNA分子

C.大肠杆菌的质粒

D.动物细胞的染色体

2.[2017·

上海宝山区二模]分析有关基因工程的资料,回答问题。

如图12-36-3为构建某重组质粒的过程示意图。

lacZ基因可使细菌利用加入培养基的物质X-gal,从而使菌落显现出蓝色,若无该基因,菌落则成白色。

图中甲~戊DNA片段只注明了黏性末端处的碱基种类,其他碱基的种类未作注明。

图12-36-3

(1)若酶M特异性识别的DNA碱基序列是,则酶N特异性识别的DNA碱基序列是      。

(2)过程②是将所有片段混合在一起,用      酶拼接可得到不同的重组DNA。

(3)如果只考虑2个片段的组合,那么甲、乙、丁三个片段中能够形成环状DNA的片段组合是      (多选)。

A.甲和乙 B.甲和甲 C.甲和丁 D.乙和乙 E.乙和丁 F.丁和丁

(4)为了筛选含重组质粒的受体菌,应在通用培养基中额外加入        ,培养一段时间,挑选出  

色的菌落进一步培养。

原来质粒中,限制酶M和N的酶切位点    。

A.M位于青霉素抗性基因中,N位于lacZ基因中

B.N位于青霉素抗性基因中,M位于lacZ基因中

C.M和N都位于青霉素抗性基因中

D.M和N都位于lacZ基因中

(5)上述目的基因能够在受体细菌中表达,其原因是不同生物    。

A.共用一套DNAB.共用一套RNA

C.共用一套蛋白质D.共用一套密码子

方法技巧 限制酶的选择技巧

(1)根据目的基因两端的限制酶切割位点确定限制酶的种类。

图12-36-4

①应选择切割位点位于目的基因两端的限制酶,如图甲可选择PstⅠ。

②不能选择切割位点位于目的基因内部的限制酶,如图甲不能选择SmaⅠ。

③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接,也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒,如图甲也可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切割位点)。

(2)根据质粒的特点确定限制酶的种类。

①所选限制酶要与切割目的基因的限制酶一致,以确保产生相同的黏性末端。

②质粒作为载体必须具备标记基因等,所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构,如图乙中限制酶SmaⅠ会破坏标记基因;

如果所选酶的切割位点不是一个,则切割重组后可能丢失某些片段,若丢失的片段含复制起点区,则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。

考点二 基因工程的基本操作程序及PCR技术􀎯

1.基因工程的基本操作程序

(1)目的基因的获取

①目的基因:

主要指        的基因,也可以是一些具有    作用的因子。

②获取

方法

(2)基因表达载体的构建——基因工程的核心

①目的:

使目的基因                   ,同时使目的基因能够表达和发挥作用。

②基因表达载体的构成

图12-36-5

③构建过程:

图12-36-6

(3)将目的基因导入受体细胞

生物种类

植物细胞

动物细胞

微生物细胞

常用方法

     、       

受体细胞

 体细胞

 原核细胞

转化过程

 (以农杆菌转化法为例:

)将目的基因插入到Ti质粒的    上→导入农杆菌→侵染植物细胞→整合到受体细胞的    上→表达 

基因表达载体

 受精卵

  发育

新性状个体

     处理细胞→    细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 

(4)目的基因的检测与鉴定

图12-36-7

2.PCR技术

(1)原理:

DNA复制,即:

双链

DNA单链

图12-36-8

(2)条件

(3)过程与结果

①过程

②结果:

上述三步反应完成后,一个DNA分子就变成了    个DNA分子,随着重复次数的增多,DNA分子就以    的形式增加。

PCR的反应过程都是在    中完成的。

1.基因工程操作的易错点分析

(1)目的基因的插入位点不是随意的,基因表达需要启动子与终止子的调控,所以目的基因应插入到启动子与终止子之间的部位。

(2)启动子(DNA片段)≠起始密码子(RNA);

终止子(DNA片段)≠终止密码子(RNA)。

(3)基因表达载体的构建是最核心、最关键的一步,在体外进行。

(4)只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配对现象,其余三步都有碱基互补配对现象。

2.DNA复制与PCR技术的比较

项目

体内DNA复制

PCR技术

场所

主要在细胞核内

生物体外

DNA聚合酶、解旋酶

 热稳定DNA聚合酶(Taq酶)

条件

模板、ATP、常温

 模板、ATP、引物链、温度变化(90~95℃→55~60℃→70~75℃)

原料

四种脱氧核苷酸

特点

 形成的是整个DNA分子,一个细胞周期只复制一次

 短时间内形成含有大量目的基因的DNA片段

角度1 结合实例考查基因工程的基本操作程序

1.人血清蛋白(HSA)具有重要的医用价值。

如图12-36-9是以基因工程技术获取重组HSA(rHSA)的两条途径,请回答下列问题。

图12-36-9

(1)如果HSA基因序列未知,可以采用          的方法获取该目的基因,为了使该目的基因能够在宿主细胞中复制和稳定保存,通常要先构建     后才能导入宿主细胞。

(2)方框中的“?

”一般选用的生物是    ,为了提高Ⅱ过程的导入成功率,通常用    处理大肠杆菌。

(3)人体合成的初始HSA多肽,需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性,所以,选择    (填“Ⅰ”或“Ⅱ”)途径获取rHSA更有优势。

(4)为了鉴定宿主细胞中是否产生rHSA,可以用 

方法来进行检验。

A.检验HSA基因是否导入

B.检验细胞中是否产生相应的mRNA

C.抗原—抗体杂交

D.检测是否有标记基因

角度2 考查PCR技术的原理与过程

福建南平一模]基因工程在农业中的应用发展迅速,基因可导入农作物中,用于改良该农作物的性状。

通过多重PCR技术可扩增并检测转基因农作物的外源基因成分。

多重PCR技术是在一个PCR反应体系中加入多对引物,针对多个DNA模板或同一模板的不同区域,扩增多个目的基因的PCR技术。

请回答:

(1)我国科学家将Bt毒蛋白基因、鱼的抗冻蛋白基因、控制果实成熟的基因导入农作物,可获得    、     、延熟的转基因作物。

(2)引物是根据        的一段核苷酸序列合成的,每种基因扩增需要一对引物的原因是  

 。

下表是A、B、C三 

种基因的引物,据表分析,引物特异性主要体现在 

A基因

引物1

5'

GCTCCTACAAATGCCATCATTGC3'

引物2

GATAGTGGGATTGTGCGTCATCCC3'

B基因

TGAATCCTGTTGCCGGTCTT3'

AAATGTATAATTGCGGGACTCTAATC3'

C基因

CCTTCATGTTCGGCGGTCTCG3'

GCGTCATGATCGGCTCGATG3'

(3)PCR过程中温度从90℃降到55~60℃的目的是 

(4)检测人员通过多重PCR技术确定农作物中是否含有A、B、C三种转基因。

将A、B、C三种基因和待测的农作物基因样品进行PCR,扩增后的产物再进行电泳,结果如图12-36-10。

据图分析:

含有三种转基因的农作物是    ,判断依据是  

图12-36-10

(5)与PCR技术相比,多重PCR技术的优势有:

a. 。

b. 。

c. 。

考点三 基因工程的应用与蛋白质工程􀎯

一、基因工程的应用

1.植物基因工程

抗虫、    、    转基因植物,利用转基因改良植物的品质。

2.动物基因工程

提高动物      、改善畜产品的品质、用转基因动物生产    ,用转基因动物作器官移植的供体。

3.基因工程药物

(1)方式:

利用基因工程培育“      ”来生产药品。

(2)成果:

利用“工程菌”可生产细胞因子、抗体、疫苗、激素等。

4.基因治疗

(1)概念:

把      导入病人体内,使

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