届高三生物一轮书稿第12单元现代生物科技专题含答案 师生复习资料Word文件下载.docx
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③结果:
产生 末端或 末端。
(2)DNA连接酶
常用类型
E·
coliDNA连接酶
T4DNA连接酶
来源
T4噬菌体
功能
连接黏性末端
连接
结果
恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键
(3)载体
①条件:
能自我复制、有一个至多个 切割位点、有特殊的 。
②常用载体—— 。
③其他载体:
λ噬菌体的衍生物、 等。
1.限制酶和DNA连接酶的关系
图12-36-1
(1)限制酶和DNA连接酶的作用部位都是磷酸二酯键。
(2)限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。
(3)DNA连接酶起作用时,不需要模板。
2.DNA相关六种酶的比较
名称
作用部位
作用
底物
作用结果
限制酶
磷酸二酯键
DNA
将DNA切成两个或多个片段
连接酶
片段
将两个DNA片段连接为一个DNA分子
聚合酶
脱氧核
苷酸
以单链DNA为模板,将单个脱氧核苷酸依次连接到单链末端
(水解)酶
将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸
解旋酶
碱基对之
间的氢键
将双链DNA分子局部解旋为单链,形成两条长链
RNA
核糖核
以单链DNA为模板,将单个核糖核苷酸依次连接到单链末端
1.如图12-36-2为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图,据图回答下列问题:
图12-36-2
(1)a代表的物质和质粒的化学本质都是 ,二者还具有其他共同点,如① ,② (写出两条即可)。
(2)若质粒DNA分子的切割末端为—A—TGCGC,则与之连接的目的基因切割末端应为 ;
可使用 把质粒和目的基因连接在一起。
(3)氨苄青霉素抗性基因在质粒DNA分子上称为 ,其作用是 。
(4)下列常在基因工程中用作载体的是( )
A.苏云金芽孢杆菌抗虫基因
B.土壤农杆菌环状RNA分子
C.大肠杆菌的质粒
D.动物细胞的染色体
2.[2017·
上海宝山区二模]分析有关基因工程的资料,回答问题。
如图12-36-3为构建某重组质粒的过程示意图。
lacZ基因可使细菌利用加入培养基的物质X-gal,从而使菌落显现出蓝色,若无该基因,菌落则成白色。
图中甲~戊DNA片段只注明了黏性末端处的碱基种类,其他碱基的种类未作注明。
图12-36-3
(1)若酶M特异性识别的DNA碱基序列是,则酶N特异性识别的DNA碱基序列是 。
(2)过程②是将所有片段混合在一起,用 酶拼接可得到不同的重组DNA。
(3)如果只考虑2个片段的组合,那么甲、乙、丁三个片段中能够形成环状DNA的片段组合是 (多选)。
A.甲和乙 B.甲和甲 C.甲和丁 D.乙和乙 E.乙和丁 F.丁和丁
(4)为了筛选含重组质粒的受体菌,应在通用培养基中额外加入 ,培养一段时间,挑选出
色的菌落进一步培养。
原来质粒中,限制酶M和N的酶切位点 。
A.M位于青霉素抗性基因中,N位于lacZ基因中
B.N位于青霉素抗性基因中,M位于lacZ基因中
C.M和N都位于青霉素抗性基因中
D.M和N都位于lacZ基因中
(5)上述目的基因能够在受体细菌中表达,其原因是不同生物 。
A.共用一套DNAB.共用一套RNA
C.共用一套蛋白质D.共用一套密码子
方法技巧 限制酶的选择技巧
(1)根据目的基因两端的限制酶切割位点确定限制酶的种类。
图12-36-4
①应选择切割位点位于目的基因两端的限制酶,如图甲可选择PstⅠ。
②不能选择切割位点位于目的基因内部的限制酶,如图甲不能选择SmaⅠ。
③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接,也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒,如图甲也可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切割位点)。
(2)根据质粒的特点确定限制酶的种类。
①所选限制酶要与切割目的基因的限制酶一致,以确保产生相同的黏性末端。
②质粒作为载体必须具备标记基因等,所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构,如图乙中限制酶SmaⅠ会破坏标记基因;
如果所选酶的切割位点不是一个,则切割重组后可能丢失某些片段,若丢失的片段含复制起点区,则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。
考点二 基因工程的基本操作程序及PCR技术
1.基因工程的基本操作程序
(1)目的基因的获取
①目的基因:
主要指 的基因,也可以是一些具有 作用的因子。
②获取
方法
(2)基因表达载体的构建——基因工程的核心
①目的:
使目的基因 ,同时使目的基因能够表达和发挥作用。
②基因表达载体的构成
图12-36-5
③构建过程:
图12-36-6
(3)将目的基因导入受体细胞
生物种类
植物细胞
动物细胞
微生物细胞
常用方法
、
受体细胞
体细胞
原核细胞
转化过程
(以农杆菌转化法为例:
)将目的基因插入到Ti质粒的 上→导入农杆菌→侵染植物细胞→整合到受体细胞的 上→表达
基因表达载体
受精卵
发育
新性状个体
处理细胞→ 细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子
(4)目的基因的检测与鉴定
图12-36-7
2.PCR技术
(1)原理:
DNA复制,即:
双链
DNA单链
图12-36-8
(2)条件
(3)过程与结果
①过程
②结果:
上述三步反应完成后,一个DNA分子就变成了 个DNA分子,随着重复次数的增多,DNA分子就以 的形式增加。
PCR的反应过程都是在 中完成的。
1.基因工程操作的易错点分析
(1)目的基因的插入位点不是随意的,基因表达需要启动子与终止子的调控,所以目的基因应插入到启动子与终止子之间的部位。
(2)启动子(DNA片段)≠起始密码子(RNA);
终止子(DNA片段)≠终止密码子(RNA)。
(3)基因表达载体的构建是最核心、最关键的一步,在体外进行。
(4)只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配对现象,其余三步都有碱基互补配对现象。
2.DNA复制与PCR技术的比较
项目
体内DNA复制
PCR技术
场所
主要在细胞核内
生物体外
酶
DNA聚合酶、解旋酶
热稳定DNA聚合酶(Taq酶)
条件
模板、ATP、常温
模板、ATP、引物链、温度变化(90~95℃→55~60℃→70~75℃)
原料
四种脱氧核苷酸
特点
形成的是整个DNA分子,一个细胞周期只复制一次
短时间内形成含有大量目的基因的DNA片段
角度1 结合实例考查基因工程的基本操作程序
1.人血清蛋白(HSA)具有重要的医用价值。
如图12-36-9是以基因工程技术获取重组HSA(rHSA)的两条途径,请回答下列问题。
图12-36-9
(1)如果HSA基因序列未知,可以采用 的方法获取该目的基因,为了使该目的基因能够在宿主细胞中复制和稳定保存,通常要先构建 后才能导入宿主细胞。
(2)方框中的“?
”一般选用的生物是 ,为了提高Ⅱ过程的导入成功率,通常用 处理大肠杆菌。
(3)人体合成的初始HSA多肽,需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性,所以,选择 (填“Ⅰ”或“Ⅱ”)途径获取rHSA更有优势。
(4)为了鉴定宿主细胞中是否产生rHSA,可以用
方法来进行检验。
A.检验HSA基因是否导入
B.检验细胞中是否产生相应的mRNA
C.抗原—抗体杂交
D.检测是否有标记基因
角度2 考查PCR技术的原理与过程
福建南平一模]基因工程在农业中的应用发展迅速,基因可导入农作物中,用于改良该农作物的性状。
通过多重PCR技术可扩增并检测转基因农作物的外源基因成分。
多重PCR技术是在一个PCR反应体系中加入多对引物,针对多个DNA模板或同一模板的不同区域,扩增多个目的基因的PCR技术。
请回答:
(1)我国科学家将Bt毒蛋白基因、鱼的抗冻蛋白基因、控制果实成熟的基因导入农作物,可获得 、 、延熟的转基因作物。
(2)引物是根据 的一段核苷酸序列合成的,每种基因扩增需要一对引物的原因是
。
下表是A、B、C三
种基因的引物,据表分析,引物特异性主要体现在
A基因
引物1
5'
GCTCCTACAAATGCCATCATTGC3'
引物2
GATAGTGGGATTGTGCGTCATCCC3'
B基因
TGAATCCTGTTGCCGGTCTT3'
AAATGTATAATTGCGGGACTCTAATC3'
C基因
CCTTCATGTTCGGCGGTCTCG3'
GCGTCATGATCGGCTCGATG3'
(3)PCR过程中温度从90℃降到55~60℃的目的是
(4)检测人员通过多重PCR技术确定农作物中是否含有A、B、C三种转基因。
将A、B、C三种基因和待测的农作物基因样品进行PCR,扩增后的产物再进行电泳,结果如图12-36-10。
据图分析:
含有三种转基因的农作物是 ,判断依据是
图12-36-10
(5)与PCR技术相比,多重PCR技术的优势有:
a. 。
b. 。
c. 。
考点三 基因工程的应用与蛋白质工程
一、基因工程的应用
1.植物基因工程
抗虫、 、 转基因植物,利用转基因改良植物的品质。
2.动物基因工程
提高动物 、改善畜产品的品质、用转基因动物生产 ,用转基因动物作器官移植的供体。
3.基因工程药物
(1)方式:
利用基因工程培育“ ”来生产药品。
(2)成果:
利用“工程菌”可生产细胞因子、抗体、疫苗、激素等。
4.基因治疗
(1)概念:
把 导入病人体内,使